实验用新西兰兔绿脓假单胞菌病的诊断与防治

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　　摘 要：绿脓假单胞菌属于条件致病菌，会使兔子出现肺炎或是出血性肠炎特征的病症。某实验室在2017年9月购进了一批新西兰兔，在规定的检疫期内，相继发病，通过临床观察、解剖试验以及生化试验等多种方式检验后，所发病症经确认是感染了绿脓假单胞菌。基于此，本文主要分析了实验用新西兰兔绿脓假单胞菌病的诊断与防治，先对绿脓假单胞菌病进行了阐述，然后通过一系列试验对新西兰兔的绿脓假单胞菌病进行诊断，最后提出了有效的防治方法，以此为相关人士研究提供一定的参考意见或建议。
　　关键词：绿脓假单胞菌病;新西兰兔;诊断
　　中图分类号：S858.291 文献标识码：A 文章编号：1671-2064（2019）14-0195-02
　　1 绿脓假单胞菌与疾病阐述
　　1.1 绿脓假单胞菌
　　绿脓假单胞菌属于革兰氏阴性菌，是一种无荚膜、芽孢的多形态杆菌，不但可以单独存在，而且也可成双存在，有时还会以短链形态存在。菌体一端带有一根鞭毛，长度大约为0.75-2.4μm，运动较为活泼。其能够寄生在伤口处并产生绿脓菌素，并且脓汁颜色为暗绿色。且在1882年，Gessard在绿色脓汁中提取出了此种细菌。另外绿脓假单胞菌是常见细菌，其病原体分布较为广泛，比如：土壤、空气以及水体中都会存在此种细菌。在人体的消化道、呼吸道以及皮肤上也易存在此细菌。此外，由于细菌对抗菌素有着较强的抵抗性，所以现已成为医院发生感染病原的主要细菌，若是宿主抵抗力较差，受到此细菌的感染会产生致命效果[1]。此细菌的主要传染源有病兔或携带者的尿液及其它分泌物，受到这些分泌物污染的水源及饲料等物质都是传染源，并且无明显季节性特征，若是在治疗其他疾病时滥用抗生素等药物，也可诱发绿脓假单胞菌病
　　1.2 绿脓假单胞菌病
　　绿脓假单胞菌病又被称作铜绿假单胞菌病。人类、牲畜都易感染此疾病，属于散发性传染病。当新西兰兔患有此病时主要表现为肠炎或是出血性肺炎。另外，新西兰兔属于肉用兔品种，在20世纪初，美国用美国白兔、弗朗德兔、安哥拉兔等多种兔种杂交培育成新西兰兔，同时成为美国企业用于试验最多的兔种，现已培育为近交品系。
　　2 临床症状与解剖观察
　　在2017年9月，某實验室为了进行实验从某饲养场购买了24只体重为2.0KG的普通新西兰兔。在隔离检疫观察期，有10只兔子出现了患病症状，4只新西兰兔出现死亡问题。通过观察发现，患病的新西兰兔相继带有精神沉郁、食量减少等问题，有些病兔体温升高、呼吸急促;少数病兔呈腹式呼吸，在鼻孔附近有黄色脓性分泌物;部分病兔有腹泻症状，其腹泻物为褐色粘液，还有3只病兔粪便中带有血丝。通过对新西兰兔饲养场的询问，其场内兔子也发生过类似病症，并有零星死亡。
　　通过对检疫期间死亡的新西兰兔解剖检查后、可以观察到病死兔的胃脏内存有大量积液，并且十二指肠的肠粘膜带有血丝，肺脏充血、部分肺脏呈大面积出血;脾脏肿大，呈樱桃红色。在所有病死途中，有2只新西兰兔的肺脏呈现深红色肝样变，其器官有出血现象，并伴有脓性分泌物，饲养场中所死亡的新西兰兔也有同种病理变化。
　　3 实验检查
　　3.1 镜检
　　镜检就是将所要检测的标本进行取样、制片，并使用显微镜观察、分析。譬如：动物排泄物、动物组织、植物细胞、人体组织等都可进行镜检，主要用于协助诊断疾病。具体检查过程为，在采样后，通过涂片、染色等程序后，使用显微镜进行样本检查，此种方式简单便利，无须使用其他特殊药物或是器材等物品。通常情况下主要使用革兰氏染色法，能够检测出革兰氏阳性球菌或阴性球菌、杆菌等细菌。若与临床资料相结合，具有较大的判断参考价值[2]。在本次实验中，通过对实验室、饲养场内死亡的新西兰兔病料采集后，选择了并制作出了脏器样本与分泌物样本，在对样本瑞士染色后使用显微镜进行观察。通过观察发现，此病菌无两级着色，具有较多形态，既有单个存在体，也有成双的存在，两端钝圆，是一种细杆菌。
　　3.2 分离培养
　　分离培养是研究微生物的一种方法，其主要目的是为了从自然物混杂微生物群体中得到所需纯种微生物。具体实验方法为：使用划线分离法、液体稀释法以及单孢子分离法等多种方式在固定的平板培养基中进行。在对病料进行分离培养时，要先进行接种培养，通过采集病死兔呼吸道上的分泌物、肠液以及肺脏的样本，将其接种于胰蛋白胨大豆（TSA）与绵羊血营养琼脂培养基中;让后将培养基放置在37℃的恒温培养箱中进行24小时培养观察。待24小时培养过后，绵羊血琼脂培养基中长出了菌落呈β溶血，而TSA中长出了较为宽大扁平、湿润光滑的铜绿色菌落。
　　3.3 生物化学试验
　　在对病死兔进行生物化学试验时，要使用梅里埃VETEK 2 compact型号的全自动微生物检定设备，利用GN细菌鉴定卡进行细致检测，通过生化试验后，其阳性试验结果为：ILATK、LIP、IMLTa、d MNE、CIT、CMT与BAIap等物质;阴性结果为：硫化氢、腺苷、BNAG、d MAL、血糖、ODC淀粉琼脂以及磷酸酯酶等物质。由结果可知，其与绿脓假单胞菌之间有着99%相似度。
　　3.4 毒力试验
　　毒力是指毒性的强弱，通过对病死兔进行毒力试验，可以有效了解绿脓假单胞菌病对新西兰兔造成的影响。在进行此试验时，需要先接种出肉汤培养基，在37℃的恒温箱中培养24个小时。然后使用小白鼠进行毒力试验，先挑选出10只体重在10-20g范围内的ICR小鼠，将其分别为2组，其中一组的小白鼠，要在每只腹腔内部注射0.2mL经过培养的肉汤培养基;另一组是试验对照组，有关人员要对每只小白鼠的腹腔内注射0.2mL的生理盐水[3]。待两组小白鼠注射完毕后，通过观察发现，注射过肉羊培养基的小白鼠在2个小时后出现了卷毛或是蜷缩等症状，并且在注射24小时之后全部死亡，而对照组的小白鼠未出现死亡现象。 　　4 新西兰兔绿脓假单胞菌病的治疗方法
　　绿脓杆菌的抗药性较强，许多种类的抗生素都无法治疗此疾病，因而为了确保治疗效果良好，治疗新西兰兔时要先进性药物过敏试验，并选择使用高敏药物。第一，庆大霉素。每只新西兰兔进行肌肉注射，抗生素用量为2万-4万单位/次，并且要连续使用3-5天;第二，多黏菌素B。依照新西兰兔的体重进行抗生素注射，每只兔子的抗生素用量为1万范围/KG，每天两次，连续使用3天;第三，羧苄青霉素。每只兔的药剂用量为20万-40万单位/次，采取肌肉注射方式，每天兩次，连续使用3天;第四，复方新诺明。同样依照新西兰兔的体重进行药物治疗，每只兔子的服用剂量为200mg/KG，采取口服形式，每天两次。第五，新霉素。每只新西兰兔的注射用量为2万-4万单位/KG体重，每天两次，需要连续使用3-4天，治疗效果显著。第六，中药治疗。需要准备2g郁金、2g白头翁、2g黄柏、2g黄芩、1g黄连、2g栀子、2g白芍、1g大黄、1g诃子、1g甘草，将此些草药研制为细末，然后使用开水进行冲泡，待半小时后与新西兰兔的饲料进行混合拌料，值得一提的时。预防用量是每只新西兰兔1g/KG体重，治疗是每个兔子的使用量为2g/KG体重。
　　而在此次试验中，由于时间较为紧迫，所以未对新西兰兔进行药敏试验，经过查阅相关书籍与文献可知，抗生素要选择使用头孢噻肟与庆大霉素，同时配合使用DXMS注射液，使用次数为每天2次，连续喂药3天。对于存在较为严重腹泻问题的家兔，要在其饮用水中加入口服补液盐，从而增强兔子体内的电解质，使其快速恢复体力。与此同时，饲养场也对出现绿脓假单胞菌病症状的病兔使用以上方法进行治疗，效果良好。而实验室所购买的剩余新西兰兔在药物治疗后状况开始好转并恢复，未出现死亡问题。
　　5 新西兰兔绿脓假单胞菌病的防治办法
　　第一，要做好新西兰兔卫生管理工作，保证饮用水源与饲料干净、卫生，同时要做好防鼠与灭鼠工作。对于存在绿脓假单胞菌感染病史的兔场，要使用治疗此病的单价或是多价灭活苗进行防治，对每个兔子进行皮下注射或是肌肉注射1ml灭活苗。新西兰兔的免疫期为半年，共免疫2次。在发生此种病症时，有关人员要将病兔与可疑病兔进行隔离治疗，并对兔舍进行全方位消毒，对于病死兔及其污物要做烧毁、深埋处理，以此断绝此病的蔓延途径[4]。除此之外，还要对饲养的笼具进行彻底的清理、消毒，以免残留的病兔分泌物对其周围环境造成污染，使其它新西兰兔患病。通常情况下，此病症所需清理的消毒药品为4%烧碱液。
　　第二，要严格按照相关规范进行饲养管理。对于新西兰兔的养殖，饲养者要使用科学合理的方式进行喂养，在饲料方面，要科学配比并制作出全价饲料，以此避免新西兰兔因营养不良或缺失出现抵抗力下降等多种问题。而且全价饲料能够确保新西兰兔具有较强的免疫力与抵抗力。若是在实验室中饲养新西兰兔，则需严格按照GB14925-2010文件清理并维护实验动物的生产环境与试验环境。
　　第三，要遵照预防为主的原则进行新西兰兔的养殖。在饲养新西兰兔时，有关饲养单位要时刻牢记预防为主、防重于治的饲养原则。对于1个月零以上的新西兰兔来说，要使用治疗此病的灭活菌苗进行免疫，并且每半年对兔子进行一次皮下注射，即可有效防控绿脓假单胞菌病的发生。
　　第四，禁止乱用、滥用抗生素药物。在使用药物进行疾病防治时，要依照药物说明进行使用，不可乱使用抗生素药物。这是因为发生绿脓假单胞菌病的主要原因就是抗生素的滥用，在平时饲养新西兰兔时，为了提升其抵抗力，许多饲养者都会在其饮用水或饲料中添加抗生素，这使得新西兰兔体内的绿脓假单胞菌具有了较强的抗药性，耐药效果较强，最终导致细菌在兔体内迅速繁殖，引发了绿脓假单胞菌病。
　　6 新西兰兔绿脓假单胞菌病实验总结
　　在对患病新西兰兔进行试验检查时，分别对链球菌病与巴士杆菌病予以鉴别，并且依照细菌菌落的形状与色泽将链球菌感染问题排除;再经过对样本瑞士染色后，为发现两级有着色现象，所以将巴士杆菌感染问题排除。按照培养菌落的色泽与生化试验结果、毒力试验结果可知判定，新西兰兔所患病症为绿脓假单胞菌感染。由于时间有限，未做药敏试验，在参考相关成功经验的资料后，选择其相同药物进行治疗，治疗效果明显。
　　7 结语
　　综上所述，通过对患病的新西兰兔进行了链球菌病与巴士杆菌病发热鉴别，依照相关实验结果可知，为了减少此疾病的发生，在养殖新西兰兔时，有关人员应当注意饲养环境的卫生，并且要保证新西兰兔的饮用水与食物无污染，不可滥用抗生素，以此避免新西兰兔患有绿脓假单胞菌病，减少饲养场的经济损失。
　　参考文献
　　[1] 高倩倩，孟小斌，陈雪芹，等.亚胺培南和阿米卡星双耐药铜绿假单胞菌的特性分析[J].热带医学杂志，2019，19（04）：404-408.
　　[2] 周妃妃，许磊.耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌分布方式以及耐药性研究[J].中国现代医生，2019，57（08）：92-94.
　　[3] 龙瑞清，刘卓慧，李书聆，等.绿脓假单胞菌感染中耳上皮细胞可以激活TGF-β1 Smad信号通路[J].昆明医科大学学报，2017，38（10）：65-69.
　　[4] 宁建国，张秋桂，匡艳华.衡阳地区绿脓假单胞菌临床分布特征及耐药性分析[J].湘南学院学报（医学版），2012，14（03）：31-33.
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