水质粪大肠菌群多管发酵法样品保存条件研究
来源:用户上传
作者:
摘要 不同保存条件对水质粪大肠菌群的检测结果有直接的影响。本文通过多管发酵法研究不同样品在不同保存温度和保存时间的水质粪大肠菌群数变化情况。结果表明，合适的水质样品保存条件为10 ℃冷藏条件下保存6 h。
关键词 多管发酵法;样品保存条件;不同浓度;不同温度
中图分类号 X832 文献标识码 A
文章编号 1007-5739（2020）08-0185-01 开放科学（资源服务）标识码（OSID）
粪大肠菌群是在44.5 ℃条件下能发酵乳糖产酸产气的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌[1]，是当前国内外环境监测部门评价水体污染程度的公认指标和主要监测项目之一，具有广泛的卫生学意义[2]。水质样品的有效保存是保证粪大肠菌群检测精确、可靠的必要条件，对于水质粪大肠菌群的监测具有重要意义[3-4]。
1 材料与方法
1.1 水样的采集
距水面约10～15 cm处采样，采集样品盛装于灭菌的采样瓶中。
1.2 试剂
单倍乳糖蛋白胨培养液、三倍乳糖蛋白胨培养液、EC培养液。
1.3 试验方法
根据水样污染程度，确定水样接种量。将水样接种到乳糖蛋白胨试管中，在37 ℃±0.5 ℃下培养24 h±2 h进行初发酵。轻微振荡在初发酵试验中产酸产气或只产酸未产气的试管，用火焰灼烧灭菌冷却后的接种环将培养物分别转接到装有EC培养基的试管中，在44.5 ℃±0.5 ℃下培养24 h±2 h。培养后立即观察，倒管中产气证实為粪大肠菌群阳性。最后根据阳性管数查MPN表换算样品中粪大肠菌群数。
2 结果与分析
采集高浓度、中浓度和低浓度样品，各自混匀后分装于一系列样品瓶内，分别于4 ℃和10 ℃下保存24 h，每小时从冰箱内取出水样检测，测定结果见表1。低浓度条件下，4 ℃保存温度下，在1～6 h和8～13 h 2个时间段粪大肠菌群数差异最大;10 ℃保存温度下，在1～6 h和9～14 h 2个时间段粪大肠菌群数差异最大。中浓度条件下，4 ℃保存温度下，1～6 h和10～15 h 2个时间段粪大肠菌群数差异最大;10 ℃保存温度下，在1～6 h和10～15 h 2个时间段粪大肠菌群数差异最大。高浓度条件下，4 ℃保存温度下，在1～6 h和11～16 h 2个时间段粪大肠菌群数差异最大;10 ℃保存温度下，在1～6 h和13～18 h 2个时间段粪大肠菌群数差异最大。
在4 ℃和10 ℃保存条件下，选取低、中、高3个浓度粪大肠菌群数结果差异最大的不同时间段的数值经对数处理后进行配对t检验，结果见表2、3。
由表2可知，4 ℃条件下，低浓度样品保存1～6 h的测定结果和8～13 h的测定结果在统计学意义上有显著性差异（P=0.001）;中浓度样品保存1～6 h的测定结果和10～15 h的测定结果在统计学意义上无显著性差异（P=0.418）;高浓度样品保存1～6 h的测定结果和11～16 h的测定结果在统计学意义上有显著性差异（P=0.005）。
由表3可知，10 ℃条件下，低浓度样品保存1～6 h的测定结果和9～14 h的测定结果在统计学意义上有显著性差异（下转第188页）
（P=0.002）;中浓度样品保存1～6 h的测定结果和10～15 h的测定结果在统计学意义上有显著性差异（P=0.042）;高浓度样品保存1～6 h的测定结果和13～18 h的测定结果在统计学意义上有显著性差异（P=0.001）。
分别对低浓度、中浓度、高浓度样品4 ℃和10 ℃保存1～6 h内测定结果进行配对t检验，结果见表4。6 h内低、中、高3个浓度样品在4 ℃和10 ℃保存条件下粪大肠菌群数均无显著性差异（P值分别为0.993、0.579、0.211），所以在保存6 h的前提下，可将保存温度提高到10 ℃[5-6]。
3 结论
低、中、高3种不同浓度的不同样品在6 h内测定值没有显著变化，但在6 h后不同浓度及保存温度的情况下有着不同的变化;而在4 ℃和10 ℃的保存试验中，在6 h内没有明显区别，所以水质样品的保存条件确定为在10 ℃冷藏条件下样品可以保存6 h。
4 参考文献
[1] 张少峰，刘国强.粪大肠菌群检测方法及研究进展[J].海洋通报，2008，27（3）：102-106.
[2] 史建.粪大肠菌群检测方法研究进展[J].河北化工，2012，35（7）：32-35.
[3] 生态环境部.水质粪大肠菌群的测定 多管发酵法：HJ 347.2-2018[S].北京：中国环境出版社，2019.
[4] 黎尧，张绍斌.多管发酵法测定水质粪大肠菌群的探讨[J].环境与发展，2019，31（5）：116.
[5] 高瑞坤.粪大肠菌群检测实验中滤膜法和固定底物酶底物法的差异性研究[C]//2014中国环境科学学会学术年会（第四章）.成都：中国环境科学学会，2014.
[6] 王朝霞.水中粪大肠菌群的多管发酵法检测研究进展[J].现代农业科技，2016（7）：205.
转载注明来源:https://www.xzbu.com/8/view-15186292.htm
