水产品中硝基呋喃类兽残检测去除空白污染关键点

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　　随着中国人均经济收入大幅提高，人们对吃、穿、住、行有更高要求，饮食上对鱼、夏、蟹、贝壳等水产品需求与日俱增。特别对养殖需求量大大刺激了中国水产业的迅猛发展，但也浮现出了水产品病害严重的问题，导致抗生素等药物大量使用，其中的水产品药物残留威胁着人类身体健康，引起人们对水产品中的兽药残留等健康安全问题更加关注。而广谱抗菌抗生素药物里属于人工合成的硝基呋喃类药物，其分子结构中具有5-硝基呋喃及对应代谢物分别为：AOZ、AMOZ、AHD、SEM，该药在动物体内迅速代谢稳定数小时后，其代谢物与蛋白质结合成蛋白结合代谢产物，残留时间很长。
　　研究表明， 该类药物具有遗传毒性、潜在致畸、致癌和诱导机体产生突变的作用， 出于安全性考虑， 欧盟、美国等发达国家先后颁布了禁止使用该类兽药的禁令。但仍然有养殖户使用该类药物，因此第三方食品检测公司对水产品进行严格监控。
　　1污染源排查过程
　　1.1样品液上液相色谱-串联质谱
　　由于硝基呋喃类液相条件是梯度洗脱，改变梯度延长洗脱时间，排查是否存在基质干扰;目标峰出完后提高有机相比例至甲醇95%冲洗，排查是否上一针残留;在进样前、后增加洗针时间6S，排查是否是针污染;装流动相的容器用水冲洗干净再装一级纯水、甲醇，排查流动相或器皿带入;用异丙醇、70℃热水冲洗管路，排查管路污染及材料析出污染;调整质谱条件、重新优化定量离子对、定性离子对， 排查干扰离子的影响;进样小瓶选用新开封的玻璃瓶不加衬管，排查多次使用的污染带入。
　　仪器：Waters Xevo TQD液相色谱串联质谱仪，色谱柱（Waters T3 150mm×2.1mm×1.8μm）;柱温（45℃），进样量（10μL）;流动相A为0.05%甲酸水+5mmol乙酸铵溶液;流动相B为HPLC级甲醇。采用电喷雾离子源，毛细管电压0.5kV，去溶剂化600℃、1000L/Hr，高压50L/hr。定型离子对和定量离子对等见参数表2。
　　最后分析结果，仪器条件优化后，污染源依然存在，所以流动相、玻璃容器、液相条件、质谱条件都不是带入污染源的主要因素。
　　1.2实验污染源排查衍生后阶段
　　磷酸氢二钾溶液、氢氧化钠溶液用一级水现配现用，排除新污染物带入;样品离心、过滤纸后再过HLB小柱对比离心完直接过HLB小柱，排查滤纸是否带入污染物;其它步骤一致，样品手动过HLB小柱比对仪器设备自动过HLB小柱，排查设备带入污染物。氮吹时氮吹仪的管头都严用乙酸乙酯超声、冲洗2遍。
　　最后结果污染源依然存在，说明以上试剂、滤纸、设备不是带入污染源的主要因素。
　　1.3实验污染源排查衍生前阶段
　　采用最新的50ml塑料離心管，称取阴性样品与直接空白实验比较，排查阴性样品称量前已被污染;甲醇-水溶液、盐酸溶液、2-硝基苯甲醛衍生试剂均现配现用减少污染带入;内标储备液、标准储备液从固标开始重新配置排除标液在源头污染问题、用最新的塑料移液枪头移取试剂;最后衍生、避光、上摇床反应16h。
　　最后排查结果，污染源依然存在，说明以上试剂、衍生试剂、内标储备液、标准溶液不是带入污染源的主要因素。
　　2结论
　　水产品中硝基呋喃类兽残检测污染源有两处，一来自于聚丙烯材质的耗材带入污染，包括：50ml塑料离心管（聚丙烯材质）、10ml塑料移液枪头（聚丙烯材质）、塑料小衬管;二来自于耗材清洗中采用的洗衣粉洗涤剂带入;而滤纸因与样品液接触时间在衍生后且时间短，实验证明不影响可以放心使用。而在实验改进中50ml玻璃离心管在离心时易碎，为实验过程更顺利建议采用50ml聚四氟乙烯塑料离心管、10ml单向管（玻璃材质）、玻璃衬管。
　　（作者单位：510000  广东省广州市精益和泰质量检测股份有限公司）
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