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红掌快速繁育最适培养条件的筛选研究

来源:用户上传      作者: 凌雷

  摘要从愈伤组织、不定芽、生根等培养指标筛选红掌快速繁育的最适培养条件,结果表明:外植体最佳消毒时间是70%酒精浸泡60 s,红掌愈伤组织诱导的最佳基本培养基为MS培养基,适宜的激素组合及浓度配比为6-BA 1.0 mg/L+2,4-D 0.4 mg/L,添加5 g/L琼脂,光照强度1 000 ~1 500 lx,13 h/d的光照时间,NAA添加量为1.0 mg/L。筛选到的最佳培养条件适宜红掌的快速繁育需求。
  关键词红掌;快速繁育;培养条件;筛选
  中图分类号 S682.3;Q943.1 文献标识码A文章编号 1007-5739(2011)11-0212-02
  
  红掌为天南星科花烛属多年生附生常绿草本花卉,又称花烛、安祖花、蜡烛花、灯台花等。其株高1 m,不开花时是非常好的观叶植物。红掌成年植物1年每株可以开5~8 枝花,花大、花形奇特、颜色鲜艳。花的色彩变化也多,叶片优美,既能观花又可赏叶。近年来,红掌在园林中的应用是越来越广泛[1-3]。当前应用比较多的红掌品种有广红、Alexis、Evita等10余个品种。由于红掌品种多样且观叶观花俱佳,加上其象征着热情向上,深受人们的喜爱,为花中珍品,成为仅次于热带兰的第二大热带花卉[4-5]。目前,红掌常规的繁殖方法为分株繁殖,但难以扩大生产,红掌快速繁殖的最理想途径是组织培养[6]。本文探讨了红掌的快速繁殖条件,优化了各繁育元素的组合,以更好地开发利用红掌资源。
  1材料与方法
  1.1试验材料
  试验所用的材料购自西南大学苗木繁育中心的广红红掌品种,由实验室自行进行繁育并培植保存。
  1.2试验方法
  1.2.1表面消毒时间对叶片成活率的影响。在组培的过程中,由于培养基中的营养物质丰富且培养条件适宜,微生物繁殖的速度远快于外植体的繁殖速度,其可与外植体进行养分的争夺,阻碍外植体的生长,因此在进行组培之前,应对外植体进行消毒灭菌。选取新引进的广红品种长出的新叶作为研究对象。首先对叶片进行消毒处理:新叶先用自来水冲洗30 min,然后在超净工作台上用70%酒精分别设置浸泡处理30、60、90 s,分别用无菌水冲洗处理后的叶片3次,置于消毒瓶中备用。接种时将叶片切为带主叶脉、大小为1.5 cm×1.0 cm的长方块,于培养瓶中严格无菌操作。研究表面消毒时间对叶片成活率的影响。
  1.2.2培养基对不定芽诱导的影响。基本培养基是植物组织培养中的重要基质,不同的植物及不同的外植体对培养基的要求也不同。因此,在植物的组织培养过程中,选择合适的培养基至关重要。选择MS和1/2 MS、1/4 MS为基本培养基,这3种培养基的区别为:1/2 MS培养基中大量元素含量是MS培养基的1/2,1/4 MS培养基中大量元素含量是MS培养基的1/4,其他成分一致。研究不同的培养基对红掌不定芽诱导的影响。
  1.2.3不同取材部位对愈伤组织诱导的影响。以红掌广红品种的叶柄、叶片、茎段作为外植体,研究不同部位对愈伤组织诱导的影响。将不同部位的外植体接入最佳培养基中,50 d后观察并记录诱导率。
  1.2.4培养基中不同激素对愈伤组织诱导的影响。分别选取展开2周的广红红掌的最佳取材部位为外植体,接种于已筛选出的基本培养基表面。采用6-BA +2,4-D的培养基激素组合,设计不同水平浓度进行试验。观察培养基中激素对愈伤组织诱导的影响。设计水平为:6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L、6-BA 1.0 mg/L+2,4-D 0.4 mg/L、6-BA 1.5 mg/L+2,4-D 0.8 mg/L、6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 1.6 mg/L。
  1.2.5不同琼脂浓度对红掌愈伤组织诱导的影响。以上述试验获得的最佳条件为基础,添加不同浓度的琼脂,以改变培养基的硬度,从而设计不同硬度的培养基对红掌愈伤组织进行诱导研究。琼脂添加用量分别为2、3、4、5、6 g/L。将供试红掌叶片切成1.5 cm×1.0 cm的长方块接种。60 d后统计在不同琼脂添加量处理的愈伤组织诱导率。
  1.2.6光照强度对不定芽分化及增殖的影响。在已获得的最佳培养条件的基础上,分别在光照强度为500、1000、1 500、2 000、3 000 lx(光照时间均为13 h/d)和黑暗条件下进行培养,以研究不同的光照强度对红掌不定芽分化及增殖的影响。
  1.2.7不同浓度生长素对生根的影响。以筛选的最佳培养基为基本培养基,选用生长素NAA,浓度分别设为0、0.1、0.3、0.5、1.0 mg/L,不添加任何细胞分裂素。30 d后统计不同条件下红掌的生根数及生长情况。
  2结果与分析
  2.1不同表面消毒时间对红掌叶片生长的影响
  70%酒精浸泡处理红掌叶片不同时间后其生长情况见表1。从表1可以看出,灭菌时间为60 s的处理,成活率高达80%,污染率仅为20%,明显优于其他处理,而且接种后愈伤组织形成快,长势好。因此,红掌叶片用75%酒精灭菌时间以浸泡60 s为最佳。
  2.2培养基对不定芽诱导的影响
  试验以MS、1/2 MS、1/4 MS为基本培养基,比较在不同培养基中,红掌愈伤组织不定芽的诱导效果。结果在MS培养基上不定芽的诱导效果最好,诱导率达到了91%。
  2.3不同取材部位对愈伤组织诱导的影响
  取红掌广红苗不同部位的外植体进行试验,结果发现,不同的取材部位,愈伤组织诱导率有显著差异。将红掌苗作为外植体时,叶片的诱导率最高,达到63.3%,显著高于叶柄和茎段的诱导率。叶柄次之,诱导率为29.5%。
  2.4培养基不同激素对愈伤组织诱导的影响
  培养基中不同激素浓度组合对愈伤组织的诱导研究结果见表2。从表2可以看出,培养基不同激素对愈伤组织诱导是具有影响的,而从试验中所选择的激素种类与浓度来看,最适宜的条件就是6-BA 1.0 mg/L+2,4-D 0.4 mg/L组合,该结合下愈伤组织的诱导率达71%。
  2.5不同琼脂浓度对红掌愈伤组织诱导的影响
  不同琼脂浓度对红掌愈伤组织诱导的影响情况见表3。从表3可以看出,在最佳培养基中添加琼脂5 g/L最利于愈伤组织诱导修复,其诱导率达到了79%。
  2.6光照强度对不定芽分化及增殖的影响
  光照强度对红掌不定芽分化及增殖的影响研究结果表明,在暗培养条件下,红掌愈伤组织的增殖系数达到4.0,显著高于光培养下的增殖系数(仅为3.6)。由此可见,红掌在不定芽的增殖过程中,愈伤组织也随之在增殖。因此,在该试验所选择的光照强度中,1 000~1 500 lx,光照13 h/d是红掌最适宜不定芽增殖的光照条件。
  2.7不同浓度的生长素对生根的影响
  不同浓度的生长素对红掌愈伤组织不定芽生根的影响结果见表4。从表4可以看出,红掌极易生根,即使在不添加任何生长调节物质,不定芽的生根率就已达到82%。当添加NAA生长素后,则红掌不定芽的生根率迅速提高,达到100%。
  3结论与讨论
  研究结果表明,红掌外植体组织培养的最佳消毒方法是:流水冲洗30 min后,用70%酒精浸泡60 s;不同取材部位的愈伤组织诱导率不同,以叶片的诱导率最高;适合红掌愈伤组织生长的最佳基本培养基为MS培养基,适宜的激素组合及浓度配比为6-BA 1.0 mg/L+2,4-D 0.4 mg/L,添加琼脂5 g/L,光照强度为1 000 ~1 500 lx,光照时间为13 h/d,NAA添加量为1.0 mg/L。在组织培养过程中,供试红掌苗茎段外植体污染严重,可能是因为虽经过酒精浸泡消毒,但难以去除其内生菌。当延长灭菌时间,发现茎段外植体褐化严重,且随着培养时间推移,接种的红掌茎段外植体全部褐化死亡。当以经过酒精消毒的红掌无菌苗的不同部位作为外植体时,其愈伤组织的诱导率显著高于红掌苗相应外植体的诱导率。
  4参考文献
  [1] 李浚明.植物组织培养教程[M].北京:中国农业大学出版社,2002.
  [2] 杨士辉,王春云.盆栽红掌新品种组培快繁技术研究[J].现代农业科技,2008(12):16-18.
  [3] 司亮,尤海波,李丽娅.红掌组织培养技术的研究[J].中国林副特产,2009(3):41-42.
  [4] 聂振朋,温明霞,罗君琴,等. 红掌组织培养与快速繁殖技术综述[J].现代农业科技,2008(22):84.
  [5] 束晓春,彭峰,李乃伟,等. 红掌组织培养研究[J].江苏农业科学,2009(2):67-69.
  [6] 张振霞.红掌组织培养研究进展[J].韩山师范学院学报,2006,27(3):105-108.
  注:本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文


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