黑龙江省稻田野慈姑对丙嗪嘧磺隆抗性相关研究

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　　摘要通过整株盆栽法研究黑龙江省佳木斯市汤原县（种群R1）、856农场（种群R2）、密山市（种群R3）3个水稻田野慈姑种群对丙嗪嘧磺隆的抗性水平，采用分子生物学技术分析3个野慈姑种群在靶标酶基因上的差异，确定3个野慈姑种群对丙嗪嘧磺隆和苄嘧磺隆是否存在交互抗性。结果显示，黑龙江R1、R2、R3种群抗性指数（RI）分别为11.92、22.68、35.99。与敏感的七台河种群S相比，R1、R2、R3的ALS基因均在Pro197位发生不同突变。R1种群为Thr197取代了Pro197;R2、R3种群为Serl97取代了Pro197，ALS基因的突变是其产生抗性的主要原因。3个野慈姑种群对丙嗪嘧磺隆和苄嘧磺隆存在交互抗性。
　　关键词野慈姑;丙嗪嘧磺隆;抗性
　　中图分类号：S481.4文献标识码：A DOI：10.16688/j.ZWbh.2018186
　　1wakami在日本水稻田首次发现对磺酰脲类除草剂苄嘧磺隆和吡嘧磺隆产生抗性的野慈姑。徐凤、吴明根等报道吉林省多个地区野慈姑对苄嘧磺隆产生了抗性，其中吉林白旗的野慈姑可能對五氟磺草胺产生了交互抗性;陈丽丽等发现黑龙江省5个地区水稻田野慈姑种群对吡嘧磺隆、苄嘧磺隆的敏感性存在差异;魏松红、李平升等报道辽宁省2个野慈姑种群对苄嘧磺隆产生了抗性;刘延等报道黑龙江省哈尔滨稻田2个野慈姑种群对吡嘧磺隆产生抗性，并推测靶标酶ALS基因Pro197位点的突变可能是野慈姑种群对磺酰脲类除草剂产生抗性的主要原因。
　　黑龙江水稻田由于长期施用磺酰脲类除草剂苄嘧磺隆和吡嘧磺隆，使得野慈姑在除草剂选择压力下抗性水平逐年升高。丙嗪嘧磺隆（propyrisulfu-ron）属磺酰脲类除草剂，2014年初在我国登记。黑龙江部分地区野慈姑对丙嗪嘧磺隆表现不敏感，疑似产生抗性。因此，本研究采用整株盆栽试验及靶标位点ALS基因测序，揭示黑龙江省不同地区野慈姑对丙嗪嘧磺隆敏感性下降的原因，并探讨丙嗪嘧磺隆与苄嘧磺隆的交互抗性。以期对杂草抗性的鉴定和治理提供理论基础。
　　1材料与方法
　　1.1材料
　　供试植物：野慈姑疑似抗性种群于2017年5月采自黑龙江佳木斯市汤原县水稻田（种群R1）、856农场水稻田（种群R2）、密山市水稻田（种群R3）。这些地区多年使用苄嘧磺隆、吡嘧磺隆，且对丙嗪嘧磺隆表现不敏感;敏感野慈姑球茎采集于七台河勃利县水塘旁（种群S）。
　　除草剂：9.5%丙嗪嘧磺隆（propyrisulfuron）悬浮剂，住友化学公司;10%苄嘧磺隆（bensulfuron-methyl）可湿性粉剂，上海杜邦农化有限公司。
　　试剂：溴化乙锭，Sigma公司;DL2000DNAMarker，北京全氏金生物技术有限公司;2×TaqPCR Master Mix、天根生化科技有限公司。其余试剂均为分析纯试剂。
　　施药器械：KNAPSACK Hydraulic Sprayer，背负式喷雾器，四喷头，喷嘴型号为TEEJET 80015VS，喷液压力为20psi，喷液量为225L/hm2。
　　仪器：温度梯度PCR仪，Bio-Rad公司;ML204万分之一电子天平，梅特勒·托利多仪器（上海）有限公司;台式Centrifuge 5417R型低温离心机，Ep-pendorf公司;凝胶成像分析系统，UVP公司;JY600C电泳槽，北京君意东方电泳设备有限公司。
　　1.2方法
　　1.2.1野慈姑对苄嘧磺隆和丙嗪嘧磺隆抗性水平整株测定
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