载DOX纳米粒子在SKOV3细胞内累积的研究
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摘 要：目的：包载DOX的纳米粒子在SKOV3细胞内累积的研究。方法：本实验将人卵巢癌SKOV3细胞作为研究对象，在激光共聚焦显微镜观测NPs、NPs-DOX荧光染料随时间变化的累积情况。结果：NPs、NPs-DOX在体外培养的SKOV3细胞内荧光强度逐渐增强。结论：随时间的增加，细胞内纳米粒子的累积量逐渐增加，表现出时间依赖性。
关键词：载药纳米粒子;DOX;SKOV3
中图分类号：R318 文献标志码：A 文章编号：2095-2945（2020）15-0033-02
Abstract： Objective： To study the accumulation of DOX-loaded nanoparticles in SKOV3 cells. Methods： In this experiment， human ovarian cancer SKOV3 cells were used as the research object， and the situationthat NPs and NPs-DOX fluorescent dyes accumulated with time was observed by laser confocal microscope. Results： The fluorescence intensity of NPs and NPs-DOX increased gradually in SKOV3 cells cultured in vitro. Conclusion： with the increase of time， the accumulation of intracellular nanoparticles increased gradually， showing a time-dependent manner.
Keywords： drug-loaded nanoparticles; DOX; SKOV3
現如今，妇科恶性肿瘤种类繁多，卵巢癌所占的死亡率最高，其中大多数原发于卵巢，随着目前临床治疗手段的完善，临床上，应用肿瘤标记物进行筛查，可提前发现患者肿瘤，及早进行治疗。卵巢癌是以手术治疗为主，辅以放化疗[1]。但其疗效仍相对局限，实际上，化疗药在对卵巢癌细胞造成伤害的同时，对机体各个系统和器官也造成不同程度的损害。临床上的一线化疗方案主要还是铂类联合紫杉醇，作用于细胞DNA，但在治疗过程中，治疗效果上仍相对有限，卵巢癌对这类药物，产生阻滞及外排，在很大程度上影响着临床肿瘤治疗的效果。应用化疗药物后，引起多种并发症，降低患者的生活质量，降低患者生存几率[2-4]。阿霉素（adriamycin;又称多柔比星，doxorubicin，DOX），目前多在实体肿瘤化疗中发挥作用，它是一种广谱蒽环类，可以抗肿瘤的药物[5]。科技进步，纳米技术在多方面皆有应用，其中纳米药物更是引起关注。多篇文献报道，在抗肿瘤治疗中，载体纳米药物有更好的疗效。纳米药物，通过物理、化学等方式将传统化疗药物负载到纳米粒子上，得到纳米化疗药。纳米药物载体粒径小，通过肿瘤的特殊效应，聚积于肿瘤内部，改变了化疗药物难溶于水，对非肿瘤细胞有杀伤性等缺点[6，7]。将纳米技术与医学相结合，改变了化疗药物的溶解度和稳定性，利用纳米粒子的特性，减轻了化疗药物带来的毒副作用。本实验旨在研究包载DOX的纳米粒子在人卵巢癌SKOV3细胞内的累积情况。
1 材料和方法
1.1 实验材料
（1）实验细胞与质粒
SKOV3由佳木斯大学生命科学中心细胞库惠赠;NPs、NPs-DOX由国家纳米科学中心提供。
（2）试剂与耗材（见表1）
1.2 实验方法
（1）载药纳米粒子在细胞内的累积：于激光共聚焦专用平皿中，接种SKOV3细胞，置于培养箱中孵育24h，培养条件为37℃、5% CO2。
（2）加入250μg/mL的NPs、NPs-DOX，分别培养30min、60min、120min后。
（3）使用Olym-pus FV1000共聚焦显微镜，检测细胞内药物的累积情况。
2 结果
观察NPs-DOX在SKOV3内累积的情况，结果如图1所示，随着时间的增加，细胞内的NPs-DOX荧光强度逐渐增强。反映了纳米粒子进入细胞内的量随时间的增加而增加，呈现了时间依赖性。
3 讨论
肿瘤细胞与正常细胞的内外微环境有很大的差异，pH值、对热敏感性、谷胱甘肽含量以及血管状态等方面对肿瘤细胞均有影响[8]。纳米粒子利用这种特点，使载药纳米粒子进入肿瘤细胞内释放，从而可以大大减少正常组织对药物副作用的影响。本实验利用共聚焦显微镜，观察载药纳米粒子随时间增加，其在SKOV3细胞内逐渐增加。由此可知，纳米粒子包裹的DOX可进入肿瘤细胞内，快速释放DOX，并通过纳米粒子的协同治疗，发挥良好的体外抗肿瘤作用。
纳米技术在肿瘤的治疗中，得到广泛关注。载药纳米粒子在抗肿瘤药物中，通过加强有效递送介质发挥着重要作用。将靶向性和功能性纳米药物载体与机体的生理环境结合研究，在治疗中发挥更大的作用，减轻了化疗药物带来的毒副作用，更少的使用药物，减少耐药性。使药物作用更有效地抑制肿瘤细胞。纳米药物载体的使用，结合化学疗法，放疗和成像技术等多种肿瘤治疗方法，以及多种抗癌合作方式，可以提高肿瘤组织的敏感性，并且药物的抗肿瘤作用是更有效地发挥作用。改善纳米药物载体的结构和功能，研究和开发具有更好生物相容性的纳米载体，进一步促进纳米药物载体的临床研究将成为未来的重要研究领域。
参考文献：
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[8]Patra J K， Das G， Fraceto L F， et al. Nano based drug delivery systems： Recent developments and future prospects[J]. Journal of Nanobiotechnology， 2018，16（1）：71.
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