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高效液相色谱法测定抗饥消渴片中盐酸小檗碱的含量

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  摘要:目的:制定抗饥消渴片中盐酸小檗碱的含量控制标准。方法:采用高效液相色谱法对方中的盐酸小檗碱进行含量测定,采用Discovery C18 4.6mm×150mm,流动相:乙腈-水-三乙胺-36%醋酸(30.5:69.5:0.9:1.1),检测波长346nm。结果:在0.14643~2.4410μg(r=0.9999)范围内呈良好的线性关系。平均回收率为98.9%(n=6),RSD 1.2%。结论:该方法简便,准确。
  关键词:高效液相色谱法;抗饥消渴片;盐酸小檗碱;含量测定
  中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1673-7717(2008)04-0863-02
  
  抗饥消渴片由红参、黄连、黄柏、地黄等9味药组成,具养阴益气、润燥生津、抗饥止渴等功效[1],黄连、黄柏为方中主药,其有效成分主要为盐酸小檗碱[2],为控制产品质量,保证疗效。本文建立了分离度良好,重现性较好,阴性液无干扰的盐酸小檗碱高效液相分析方法,现将研究结果报道如下。
  
  1材料与仪器
  
  岛津2010高效液相色谱仪;UV-265 紫外分光光度仪,乙腈(天津四友生物医学技术有限公司 色谱纯),盐酸小檗碱(中国药品生物制品检定所批号 110713-200609 纯度为98.1%含量测定用),抗饥消渴片(沈阳中药制药有限公司),其它试剂为分析纯。
  
  2方法与结果
  
  2.1供试品溶液的配置
  2.1.1对照品溶液的配置精密称取盐酸小檗碱对照品12.5mg,置50mL量瓶中,加1%盐酸甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密吸取上述溶液1mL,置10mL量瓶中,加1%盐酸甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。
  2.1.2样品供试液的制备取本品10片,研细,取约0.2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入1%盐酸甲醇溶液25m1,密塞,称定重量,超声处理30min,放冷,再称定重量,用1%盐酸甲醇溶液补足减失的重量,取上清液,即得。
  2.1.3阴性样品的制备按处方比例,以样品生产方法制备缺黄连、黄柏的抗饥消渴片,照样品供试液制备方法制备阴性供试液。
  
  2.2检测波长的选定
  将对照品盐酸小檗碱适量溶于1%盐酸甲醇中,进行光谱扫描,在346nm波长处有最大吸收,故选定346nm为盐酸小檗碱的检测波长。
  
  2.3色谱条件
  色谱柱:Discovery C18 4.6mm×150 mm,流动相:乙腈-水-三乙胺-36%醋酸(30.5:69.5:0.9:1.1),检测波长:346nm,在此色谱条件下,盐酸小檗碱可与其它成分基线分离,阴性组分无干扰,结果见图1~3。
  
  
  
  2.4线性范围的考察
  精密吸取对照品溶液5mL置25mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。分别精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液C1=0.04881mg/mL、3μL、5μL、10μL,C2=0.2441mg/mL 3μL、5μL、10μL注入液相色谱仪中,按前述色谱条件在346nm波长处测定,结果以进样量为横坐标,以色谱峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,经回归处理,方程为Y=4274316X+27111,r=0.9999,可见,盐酸小檗碱进样量在0.14643~2.4410μg范围内,线性关系良好。
  
  2.5仪器精密度试验
  精密吸取同一供试品溶液10μL,按上述色谱条件,连续进样6次,测定色谱峰面积,计算RSD值为1.0%,表明仪器精密度良好。
  
  2.6稳定性试验考察
  精密吸取同一供试品溶液10μL,按0、2、4、6、8、12h时间间隔进行分析,测定色谱峰面积,计算RSD值为0.7%,显示,供试品溶液制备后12h内测定,盐酸小檗碱色谱峰面积无明显变化,说明在此时间内,供试品溶液化学性质稳定。
  
  2.7重复性试验
  取同一批号的6份样品供试液,测定含量进行分析,结果平均含量为1.6422mg/片,RSD为0.8%,表明本测定方法重复性良好。
  
  
  2.8加样回收率试验考察
  取已知准确含量(5.3755mg/g)的样品,加入盐酸小檗碱对照品溶液(c=0.1464mg/mL)4mL按样品含量测定方法操作,测定结果见表1。
  结果表明:本方法回收率良好。
  
  2.9样品含量测定
  依据含量测定的方法,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,测定,即得。结果见表2。
  
  
  3讨论
  
  抗饥消渴片含药味较多,其质量控制存在一定的难度,黄连、黄柏为方中主药,测定其主要有效成分盐酸小檗碱含量对于控制本品质量,更好的保证临床疗效,具有主要意义。
  文献报道盐酸小檗碱的含量测定方法有有紫外分光光度法、高效液相色谱法[3],薄层扫描法,本文建立的方法具有样品处理简单,本品含量测定理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000时,样品分离良好。
  本实验比较了超声20、30、40min不同时间盐酸小檗碱的提取率,结果30min提取的得率与40min的相同,因此确定提取时间为30min。
  
  参考文献
  [1]国家药典委员会.中国药典2000年版一部[S].北京:化学工业出版社,2000:250-251.
  [2]国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分分析[M].北京:人民卫生出版社,1986:120-122.
  [3]袁梦哲,许伟华.盐酸小檗碱片含量的测定方法的改进[J].中国药事,2007,21(1):57.
  [4]朱颖虹.三黄片中盐酸小檗碱含量测定[J].中成药,2004,24(1):29.
  [5]李虹,林杰.荧光扫描法测定湿热癖颗粒中盐酸小檗碱含量测定[J].时珍国医国药,2005,112(16):24.


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