细胞表面分化抗原CD15在264例成人白血病细胞上的表达
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作者: 张任群 饶爱华 欧阳桂芳
近年来的研究表明，流式细胞术(FCM)检测结果对于确定白血病的诊断与分型至关重要。以往采用横向分析的方法对白血病进行免疫分型的报道较多，而对于某一个特定标志在白血病免疫学诊断中的作用报道较少。笔者采用CD45／SSC双参数设门的多色FCM，对CD15在264例白血病患者白血病细胞中的表达作了分析，以进一步探讨CD15对白血病患者的诊断意义。
1 对象与方法
1，1对象
2001年3月--2007年8月来本院就诊以及外院送本院作细胞表面标记检查的白血病初诊患者264例为观察对象，其中男141例，女123例；年龄18-73岁，中位年龄48岁。急性白血病249例，按FAB标准诊断为急性淋巴细胞白血病(ALL)63例，急性髓细胞白血病(AML)186例；慢性粒细胞白血病(CML)15例，其中慢性期8例，急变期7例。
1，2方法
化疗前采骨髓或静脉血，肝素钠抗凝。常规分离单个核细胞(MNC)，用0.1 mol／L磷酸盐缓冲液(PBS，pH值为7.4)制成细胞浓度为106／mL的单细胞悬液备用。
1，2，1试剂
所用标准单克隆抗体(单抗)包括FITC、PE、PerCP或APC标记的CD10、CD19、CD20、CD22、CD2、CD3，CD5、CD7、CD56、CD11b、CD13、CD14、CD15、CD33、CD41a、CD61、CD34、CD117、CD38、CD45、HLA―DR、髓过氧化物酶(MPO)等单抗均购自美国Becton―Dickinson公司。
1，2，2染色
白血病细胞膜染色按多色直接免疫荧光标记法进行染色。胞浆内MPO、CD22和CD3的检测首先用1.0％的多聚甲醛固定，后加透膜剂，再进行三色直接免疫荧光标记法染色。PBS充分洗涤后行FCM检测。各样本均以4种荧光素标记的无关同型Ig亚类(均购自美国Becton―Dickinson公司)作为阴性对照。
1，2，3 FCM检测用FACSCalibur流式细胞仪(Becton－Dickinson)和CeUQuest软件获取并分析10 000个细胞。通过CD45／SSC设门识别幼稚细胞群，再分析计算该幼稚细胞群各白血病相关抗原的阳性率。以白血病细胞表面抗原阳性率≥20.0％为抗原阳性病例。
1，3统计学方法
用SAS 6.0软件包进行统计学处理，作相关分析和x2检验。
2 结果
2，1 CD15在各类白血病中的表达
186例AML患者中表达CD15有110例，阳性率为59.1％，63例ALL患者中只有11例表达CD15，阳性率为17.4％。CD15在AML中的阳性率高于在ALL中的阳性率(x2=41.2，P<0.01)。8例CML慢性期患者CD15均阳性，其CD11b亦均阳性，但CD34阴性；另7例CML急变期患者CD15阴性，其CD11b亦阴性，但CD34阳性。
2，2 CD15在AML各亚型中的表达
CD15在M0／M1、M2、M3、M4、M5、M6、M7中阳性率见表1。CD15在M5b中的表达率较高，为100.0％，高于其在粒细胞系亚型白血病(M0／M1、M2、M3)中的表达(x2=10.54，P<0.01)。8例M5a患者中CDl5阳性的4例。2.3 AML患者的CDl5表达与CD34、CD117、CD14和CD11b表达的相关性
在186例AML中，CD15与CD34、CD117的表达呈负相关(r=-0.22，P<0.05；r=-0.29，P<0.05)，与CD14、CD11b的表达呈正相关(r=0.53，P<0.01；r=0.40，P<0.01)
3 讨论
白血病患者FCM分析在白血病临床诊断中的作用越来越受到重视，随着该技术的不断普及及临床实际工作的需要，非常有必要对每个单一标志在白血病中的诊断作用及其局限性予以阐明。CDl5(又叫粒细胞相关抗原，或Lewisx)是细胞黏附分子(CAMs)的成员，由半乳糖、岩藻糖和N－乙酰葡萄糖胺组成的碳水化合物抗原，属选择素家族成员中的P选择素(CMP－140)和E－选择素(ELAM－1)的配基。正常情况下，它主要在成熟单核细胞、粒细胞上表达。白血病免疫表型研究发现，CDl5属于髓系相关分化抗原，但它在各亚型AML以及淋巴系白血病中的交叉情况不甚明确，且由于所采用的研究方法、试剂质量等的不同，各研究报道不尽相同。目前，采用CD45／SSC双参数设门策略的多参数FCM分析白血病的免疫学特征标准方法，能清楚地区分骨髓或外周血中的淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、有核红细胞和原始细胞群。笔者严格采用这一方法和应用一系列高质量标准单抗对较大样本白血病细胞CDl5的表达作了较为详细的分析，结果可靠。在264例白血病患者中，59.1％的AML患者中CDl5表达阳性，而ALL患者阳性率仅为17.4％。因此，结合髓系以及淋系的一些特异性抗原表达情况，CD15有助于髓系和淋系白血病的区分。CD25在急性单核细胞白血病(M5b)患者表达高，阳性率为100.0％，而在粒细胞系白血病(M0／M1、M2、M3)病例中的阳性率分别为31.4％、50.0％和50.0％，因此，CD15有助于M5b与M0／M1、M2、M3的区分。在M5病例中，CD25在分化较好的急性单核细胞白血病(M5b)中100.0％表达，而在分化较差的单核细胞白血病(M5a)中的阳性率仅为50.0％，这可能有助于M5的分型，由于病例数较少，有待进一步积累观察。另外。在AML病例中，我们发现CD15与CD34、CD117的表达呈负相关性，与CD14、CD11b表达呈正相关。一般认为，CD34和CD117是不成熟的分化抗原，而CD14和CD11b是较为成熟的髓细胞系标志，说明CD15也是一个髓系细胞分化较为成熟的标志。文献报道CD15和CD117结合分析可监测AML残留病。在4例CML病例中，CD15在CML慢性期病例中表达，而在急变期细胞上则不表达，提示CD15的检测可能有助于CML慢性期与急性期的鉴别，同时结合CD15以及CD117、CD34表达的观察可能有助于CML细胞分化程度的判断，但由于病例数过少，有待于进一步积累病例数加以分析。综上所述，本文资料表明：①CD15结合髓系以及淋系的一些特异性抗原表达情况，有助于髓系和淋系白血病的区分；②CD15有助于M5b与M0、M1、M2、M3的区分；③结合CD11b以及CD34的表达情况，有助于CML的诊断。
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