生脉饮党参方中五味子醇甲含量的测定方法
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[摘要]目的 建立生脉饮（党参方）中五味子醇甲含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱法（HPLC）测定生脉饮（党参方）中五味子醇甲含量。色谱条件：色谱柱为Agilent 色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为甲醇-水（62：38），检测波长为250 nm，流速为1.0 ml/min，进样体积为10 μl。结果 五味子醇甲的进样量在0.02084～0.41680 mg/ml范围内，与其峰面积呈良好的线性关系，回归方程Y=2×107X（r=1，n=5）；精密度良好（RSD=0.23%）、稳定性良好（RSD=0.4%）、重复性试验的RSD为0.87%。平均加样回收率为102.9%，RSD为0.7%（n=6）。颈复康药业集团有限公司生产的3批生脉饮（党参方）中五味子醇甲的平均含量分别为1.827、1.736和1.703 mg/支，平均RSD为0.1%。结论 所建立的方法准确、灵敏、简便，可用于生脉饮（党参方）中五味子醇甲的含量测定。
[关键词] 高效液相色谱法；生脉饮（党参方）；五味子醇甲；含量
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2019）4（c）-0052-03
Determination method of Schisandrin content in Shengmaiyin （Dangshen Famula）
ZHANG Ning GUO Yang LIU Wei DUAN Shu-qing▲
Jingfukang Pharmaceutical Group Co.， Ltd.， Hebei Province， Chengde 067000， China
[Abstract] Objective To establelish a determination method of Schisandrin content in Shengmaiyin （Dangshen Famula）. Methods High performance liquid chromatography （HPLC） was used to deternmine Schisandrin content in Shengmaiyin （Dangshen Famula）. The chromatographic condition： Agilent column （4.6 mm×250 mm， 5 μm） was used， the mobilephase consisted of methyl alcohol-water， the detection wavelength was at 250 nm， the flow ratew was 1.0 ml/min， the volume was 10 μl. Results The linear range of Schisandrin was 0.02084～0.41680 mg/ml， it had a good linear relationship with its peak area， the regression equation was Y=2×107X （r=1， n=5）. The accuracy was good （RSD=0.23%）， the stability was good （RSD=0.4%）， and the RSD of the repeated test was 0.87%. The average recovery was 102.9% and the RSD was 0.7% （n=6）. The average contents of three batches of Schisandrin in Shengmaiyin （Dangshen Famula） produced by Jingfukang Pharmaceutical Group Co.， Ltd. were 0.182 mg， 0.173 mg and 0.165 mg in each Shengmaiyin （Dangshen Famula）. The average RSD was 0.1%. Conclusion This method is accurate， sensive， simple and stability， and has good reproducibility. It is suitable for the determination of Schisandrin in Shengmaiyin （Dangshen Famula）.
[Key words] High performance liquid chromatography； Shengmaiyin （Dangshen Famula）； Schisandrin； Content
生脈饮（党参方）由党参、麦冬、五味子等3味药材组成，具有益气复脉、养阴生津的功效。用于气阴两亏、心悸气短、脉微自汗[1]。
生脉饮（党参方）[1]现收载于部颁标准第10册，除合剂的常规检验外，只有一项相对密度检验项。生脉饮中五味子具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心等的作用，在方中发挥重要作用[2-3]。因此，参考相关文献[4-17]，本实验采用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）测定生脉饮中五味子醇甲的含量，为生脉饮（党参方）的质量控制方法提供理论依据，现报道如下。
1仪器与材料
安捷伦1100高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；五味子醇甲对照品（批号110857-201714，购于中国食品药品检定研究院）；甲醇（美国Fisher）为色谱纯；纯化水（Millipore；Milli-Q Direct 8）；0.45 μm微孔滤膜（上海市新亚净化器件厂）。生脉饮（党参方）（840001批、840002批、840003批）、阴性样品制备所用的原料均由颈复康药业集团有限公司提供。 2方法与结果
2.1色谱条件
采用安捷伦C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为甲醇-水（62∶38），检测波长为250 nm；流速：1.0 ml/min，柱温：常温。分离度应>1.5。理论板数按五味子醇甲计算应≥2000。
2.2对照品溶液的制备
精密称定五味子醇甲对照品，加甲醇制成浓度为0.08336 mg/ml五味子醇甲的对照品溶液。
2.3供试品溶液的制备
精密量取生脉饮（党参方）5 ml，置于10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，经0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。
2.4阴性样品的制备
按生脉饮（党参方）处方配制不含五味子的阴性样品，依“2.3”项下方法制备即得。
2.5专属性试验
按“2.1”项下的色谱条件，将“2.2”项下的对照品溶液、“2.3”项下的供试品溶液及“2.4”项下的阴性样品溶液，分别注入高效液相色谱仪，进行测定。结果显示，阴性无干扰（图1）。
2.6线性关系实验
精密称取五味子醇甲对照品，加甲醇制成含五味子醇甲0.4168、0.2084、0.08336、0.04168、0.02084 mg/ml的对照品溶液，按照“2.1”项下色谱条件注入高效液相色谱仪。以对照品峰面积为纵坐标（Y），浓度为横坐标（X），绘制标准曲线，见图2。得回归方程Y=2×107X（r=1，n=5），结果表明，五味子醇甲在0.02084～0.41680 mg/ml范围内，线性关系良好。
2.7精密度实验
取“2.2”项下的对照品溶液，按照“2.1”项下的色谱条件，各重复进样6次，记录每次的色谱峰面积，计算RSD值，结果显示五味子醇甲RSD为0.23%，表明仪器精密度良好。
2.8重复性实验
取同一批已知浓度生脉饮（党参方），精密量取6份，按“2.3”项下的制备方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定。结果显示，五味子醇甲的平均含量为168.7 μg/ml，RSD为0.87%（n=6）。表明重现性良好。
2.9稳定性实验
按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别在0，1， 2，3，......，22，23，24 h进样10 μl，记录色谱峰面积，结果显示，峰面积RSD值为0.4%。表明样品在24 h内稳定。
2.10加样回收实验
精密量取已测定五味子醇甲含量的生脉饮（含量为0.1687 mg/ml）6份，精密吸取25 ml至50 ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀；再精密吸取5 ml，分别加入“2.2”项下的五味子醇甲对照品溶液5 ml，混匀，即可。按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果显示，五味子醇甲平均回收率为102.9%，RSD值为0.7%（表1）。
2.11定量限
取标准曲线中最低浓度的对照品，按“2.1”项下的色谱条件进行检测，然后按倍数稀释对照品溶液。结果五味子醇甲浓度为0.2084 μg/ml时信噪比为10∶1，定量限为2.084 ng。
2.12检测限
取标准曲线中最低浓度的对照品，按“2.1”项下的色谱条件进行检测，然后按倍数稀释对照品溶液。结果五味子醇甲浓度为0.08336 μg/ml时信噪比为3∶1，检测限为0.8336 ng。
3样品含量测定
按上述所建方法，测定颈复康药业集团有限公司生产的生脉饮（党参方）中五味子醇甲的含量，每批样品做平行样，结果取平均值（表2）。结果表明，3批五味子醇甲含量分别为：840001批1.827 mg/支，840002批1.736 mg/支，840001批1.703 mg/支，3批生脉饮（黨参方）中五味子醇甲整体平均含量为1.755 mg/支，平均RSD值为0.1%。
3讨论
生脉饮（党参方）疗效较好，受广大患者的好评。但现行标准中除合剂的常规检验外，只有一项相对密度检验项，并没有含量测定项，为确保生脉饮药品质量，本实验对生脉饮（党参方）的质量控制进行了研究。五味子为处方中一味重要中药材，其中含木脂素类成分，以五味子醇甲为代表，本实验采取高效液相色谱法对生脉饮（党参方）中五味子醇甲的含量进行研究。
本实验建立了生脉饮（党参方）中五味子醇甲的含量的测定方法，具有准确、灵敏度高、操作简单、分离效果好、阴性无干扰等优点。实验结果提示，3批生脉饮（党参方）中五味子醇甲的平均含量分别为1.827、1.736和1.703 mg/支，整体平均含量为1.755 mg/支，平均RSD值为0.1%。本实验可为生脉饮（党参方）中质量控制研究提供理论依据，可更为全面的反映药品质量，亦对其他制剂研究提供借鉴。
实验过程中也对色谱条件进行了考察：采用Agilent色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；YMC-pack色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）两个色谱柱进行样品分离，结果提示，Agilent色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）的分离效果更好。流动相选取甲醇-水（62：38）和甲醇-水（56：44）两个流动相进行样品分离，结果提示，甲醇-水（62：38）分离效果更好。对前处理方法做了考察，最终确定为直接稀释取续滤液即得，操作步骤简单，省时省力。
本研究结果提示，五味子醇甲的进样量在0.02084～0.41680 mg/ml范围内，与其峰面积呈良好的线性关系，回归方程Y=2×107X（r=1，n=5）；精密度、稳定性、重复性良好。平均加样回收率为102.9%（RSD=0.7%）。
从目前研究数据来看，颈复康药业集团有限公司生产的3批生脉饮（党参方）质量控制较为稳定。还有待搜集更多批次生脉饮（党参方）进行研究分析。 综上所述，本研究所建立的方法，準确、灵敏、简便，可用于生脉饮（党参方）中五味子醇甲的含量测定
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（收稿日期：2018-07-09 本文编辑：孟庆卿）
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