不同干燥方法对商陆总皂苷和皂苷甲含量的影响

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　　摘要：利用硫酸-香草醛比色法测定商陆（Phytolacca americana）总皂苷含量，采用HPLC-UV法测定商陆皂苷甲的含量。结果表明，商陆总皂苷和皂苷甲的含量比较，阴干商陆明显低于其他组，晒干商陆次之，烘干品含量较高;其中低温55 ℃烘干品的商陆总皂苷含量最高，80 ℃烘干的商陆皂苷甲含量高于其他组。商陆产地加工中，应及时干燥，避免成分流失，规模化烘干优于传统晒干，采用低温烘干为宜。
　　关键词：商陆（Phytolacca americana）;产地加工;干燥方法;总皂苷;皂苷甲
　　中图分类号：S13         文献标识码：A
　　文章编号：0439-8114（2019）08-0126-03
　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.08.029           开放科学（资源服务）标识码（OSID）：
　　Abstract： UV spectrophotometry was used to determine total saponins of Phytolacca americana by the sulphuric acid vanillin colorimetric method，HPLC-UV Method was used to determine the content of esculentoside A. Results showed that their contents of the group dry in the shade were Significantly lower than the other groups，the group dry in the sun were the second from the bottom，the group dry hot air were higher. Among them， the content of total saponin of Phytolacca americana was the highest dry at 55 ℃， and the content of esculentoside A was the highest dry at 80 ℃. It should be dried in time， avoiding the loss of ingredients， drying in large scale is better than traditional drying， and drying at low temperature is advisable.
　　Key words： Phytolacca americana; producing processing; drying method; total saponins; esculentoside A
　　商陆药材为商陆科植物商陆（Phytolacca acinosa Roxb.）或垂序商陆（Phytolacca amerrcana L.）的干燥根[1]，是中医临床常用的中药，同时也是部分民族医学的常用药。商陆根茎肥大，干燥后切片困难，一般在产地鲜切后干燥制成商品药材，再由饮片厂进一步加工炮制制备成饮片入药。商陆的炮制技术已经非常成熟，现行《药典》各地的炮制规范都有明确的规定，但其产地加工仍然由各地药农自行完成，加工粗犷，造成饮片原料的质量参差不齐。目前，人们对商陆的研究，多以总皂苷和皂苷甲的变化来评判商陆加工炮制后减毒增效的效果[2]。为了弄清商陆产地加工对商陆有效成分产生的影响，现以商陆总皂苷和皂苷甲含量为指标对其产地加工的主要环节——干燥方法进行考察。商陆总皂苷的测定拟采用硫酸-香草醛比色法显色，紫外可见分光光度计测定[3]。测定商陆皂苷甲常采用有HPLC-ELSD法[4]，但存在重复性较差的缺点，拟采用HPLC梯度洗脱，紫外210 nm检测[5]。
　　1  材料与方法
　　1.1  材料
　　1.1.1  样品  商陆样品于2016年10月在信阳市平桥区采挖，经信阳农林学院周巍副教授鉴定为商陸科植物垂序商陆的新鲜根茎。
　　1.1.2  试剂与仪器  商陆皂苷甲对照品（上海谱振生物科技有限公司，ZY151023），葡萄糖对照品（中国计量科学院，GBW10062），水为超纯水，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
　　UV1801型紫外-可见分光光度计、L600-DP6型高效液相色谱仪（北京普析通用有限公司）。
　　1.2  方法
　　1.2.1  样品处理  商陆采挖后，洗净，除去芦头和须根，按照不同产地和大小分为10组，分别切成2 mm厚片。
　　1）晒干。将切好的商陆片均匀摊在托盘中，厚度2 mm左右，于晴天上午8时至下午5时，置阳光下曝晒5 d，商陆片用手握顶手，易折断，收集，密闭，备用。
　　2）阴干。将切好的商陆片均匀摊在托盘中，厚度以不相互叠加为宜，置通风室内，室温15～20 ℃。7～11 d，商陆片用手握顶手，易折断，收集，密闭，备用。
　　1.2.2  烘干
　　1）低温烘干。将切好的商陆片均匀摊在托盘中，厚度2 mm，置热风循环烘箱，55 ℃干燥，商陆片用手握顶手，易折断，收集，密闭，备用。
　　2）高温烘干。将切好的商陆片均匀摊在托盘中，厚度2 mm，置热风循环烘箱，80 ℃干燥，商陆片用手握顶手，易折断，收集，密闭，备用。 　　1.3  商陆总皂苷含量测定
　　1.3.1  对照品溶液的制备  精密称定商陆皂苷甲对照品20 mg，用甲醇定容至10 mL（每1 mL甲醇含商陆皂苷甲1.98 mg），制备成对照品溶液。
　　1.3.2  供试品溶液的制备  精密称取商陆粉末4 g，加95%乙醇80 mL，用索氏提取器回流至回流液不再发生皂苷反应为止。用旋转蒸发仪将提取液减压浓缩至10 mL，置蒸发皿中，加入5 g硅藻土拌匀，于水浴锅上挥干。将所得硅藻土置100 mL锥形瓶中，加50 mL用水饱和的正丁醇，超声辅助提取40 min后过滤，将滤液减压浓缩至干，用少量甲醇溶解残渣，10 mL容量瓶定容，过滤，取续滤液1 mL，再用甲醇定容至10 mL，制备成供试品溶液。
　　1.3.3  检测波长的选择  取供试品溶液1.0 mL，加入香草醛乙醇溶液（8%）0.5 mL，硫酸（77%）8.5 mL，60 ℃水浴10 min，然后冰水浴15 min。用紫外可见分光光度计进行全波长扫描，结果显示在450 nm处有最大吸收峰，与参考文献[6]记载相符，故设定检测波长为450 nm。
　　1.3.4  线性范围考察  精密量商陆皂苷甲对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，加甲醇补足至1.0 mL，按“1.3.3”项下香草醛-浓硫酸法处理显色，用紫外外可见分光光度计450 nm处测定吸光度（A），以吸光度对浓度作直线回归，得回归方程Y=3.354 2X+0.130 6（r=0.999 5），表明商陆皂苷甲在0.198～1.98 g/L浓度范围与吸光度呈良好的线性关系。
　　1.3.5  精密度试验  精密量取对照品溶液1.0 mL，重复上述操作6次，RSD为1.32%，表明精密度良好。
　　1.3.6  稳定性试验  精密量取供试品溶液1.0 mL，重复上述操作，显色后每隔5 min测定1次，共7次。RSD为1.61%，表明该试验操作在30 min内保持稳定。
　　1.3.7  重复性试验  取同一批次商陆样品6份，重复上述操作，RSD为1.37%，表明该试验操作的重复性良好。
　　1.3.8  加样回收率试验  精密称定商陆样品（总皂苷质量分数1.762%）2.0 g，共6份，分别加入商陆皂苷甲对照品10 mg，重复上述操作，计算商陆总皂苷的平均回收率100.13%，RSD为1.78%，表明该方法准确可靠。
　　1.4  商陆皂苷甲的含量测定
　　1.4.1  色谱条件  PM952505-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以含甲酸（0.1%）的乙腈为流动相A，0.1%甲酸溶液为流动相B，按照表2所示方法进行梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，检测波长为210 nm，柱温30 ℃，进样量为20 μL，理论板数按商陆皂苷甲计不低于3 000[3]。
　　1.4.2  对照品溶液的制备  精密称定商陆皂苷甲对照品5.2 mg，用甲醇定容至10 mL（每mL含商陆皂苷甲0.52 mg），即得。
　　1.4.3  供试品溶液的制备  精密称取商陆粉末2 g置50 mL具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇20 mL，称重，超声处理（500 W，40 kHz）40 min，用50%甲醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
　　1.4.4  线性关系考察  精密量取“1.4.2”中的对照品储备液，分别进样3、6、9、12、15 μL注入液相色谱仪，在上述色谱条件下测定，以峰面积的积分值为纵坐标，对照品进样量为横坐标，进行线性回归，得回归方程Y=1.430 2X+9.311 8（r=0.999 8），表明商陆皂苷甲在1.56～7.80 μg线性关系良好。
　　1.4.5  精密度试验  精密吸取0.52 g/L商陆皂苷甲对照品溶液进样20 μL，重复进样5次，峰面积的RSD为1.7%，表明精密度良好。
　　1.4.6  稳定性试验  取商陆样品粉末量，按“1.4.3”方法制备供试品溶液，分别于0、2、4、6、12、24 h測定商陆皂苷甲含量，峰面积的RSD为0.36%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
　　1.4.7  重复性试验  取商陆样品粉末，按“1.4.3”方法制备供试品溶液，平行试验6份，结果样品中商陆皂苷甲平均质量分数为0.79%，RSD为1.42%，表明该试验方法的重复性良好。
　　1.4.8  加样回收试验  精密称取已知含量的商陆粉末共6份，每份0.5 g，各组分加入商陆皂苷甲对照品2 mg，按“1.4.3”方法制备供试品溶液，测定商陆皂苷甲含量，计算回收率，结果见表3。
　　2  试验结果
　　将不同干燥方法加工的商陆样品，采用上述方法测定商陆总皂苷和皂苷甲含量，结果用SPSS 19.0软件处理。如表4所示。
　　3  讨论
　　1）由上述试验结果可以看出，阴干的样品中商陆总皂苷和皂苷甲含量均明显低于其他组，晒干样品次之，烘干样品含量较高。低温55 ℃烘干样品的商陆总皂苷含量最高，80 ℃烘干的商陆皂苷甲含量最高。阴干加工与其他组具有显著差异，故不建议在产地加工中应用，由此可推定，商陆鲜切加工后应及时干燥，避免有效成分流失。晒干品与烘干组存在差异，但不显著，为了提高药材质量，产地最好采用烘干方法加工。低温烘干和高温烘干结果存在差异，但不显著，从整体而言，低温烘干优于高温烘干品。 　　2）商陆的有效成分和毒性成分均为总皂苷，关于加工炮制后总皂苷和指标性成分皂苷甲的变化，现代研究结果差异很大，薛光辉等[6]认为加工炮制后上述成分含量降低，从而达到减毒的作用，但和增效的结果相违背。陈琳等[2]得出了加工炮制后，上述成分含量增高，同时药效增加高的结论，但又和毒性降低相矛盾。李林等[3]、孟祥龙等[7]得出了加工炮制过程中上述成分呈动态变化的规律。在商陆产地加工过程中，应尽量多保留活性成分，以便后面的炮制。通过试验，可以初步确定低温55 ℃烘干为商陆产地加工的最佳方法。
　　3）本试验中采用的加工方法是模拟生产中条件而设，但与实际生产存在一定的差距，今后将进一步在生产中验证是否存在上述规律[8，9]。商陆中皂苷成分复杂，结构变化较多，含有20多种皂苷和30多种皂苷元。产地加工中，这些成分的变化规律尚未有人进行研究。另外，产地加工对药效的研究尚不明晰。
　　参考文献：
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　　[8] 马  杰，孙文基.HPLC-ELSD法测定商陆药材、饮片和醋商陆中商陆皂苷甲的含量[J].中药材，2010，33（3）：356-358.
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　　收稿日期：2018-06-29
　　基金项目：国家中医药行业专项（2015468002-2）;信阳市科技攻关项目（150089）
　　作者简介：谢其亮（1970-），男，河南信阳人，工程师，主要从事中药制药研究，（电话）13939722266（電子信箱）915036515@qq.com;通信作者，杨俊杰（1979-），男，河南南阳人，副教授，硕士，主要从事中药材产地加工及活性成分开发研究，（电子信箱）nanyangjj@xyafu.edu.cn。
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