中药当归化学成分的分离及其内酯类成分结构的鉴定研究
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【摘 要】 目的：对中药当归中的化学成分以及内酯类成分结构进行分析，以此来为临床用药提供科学合理的依据。方法：相关化学成分均采用硅胶柱色谱和制备薄层色谱等方式进行分离纯化，将波谱数据以及理化性质作为依据，对中药当归中的藁本内酯类化合物结构进行鉴定。结果：分离后共获得15个化合物，采用色谱方法从当归根乙醇提取物中分离出（Z）-藁本内酯、（Z）-6，7-反式-二羟基藁苯内酯、（Z）-6，7-环氧藁苯内酯、当归酸（Z）-藁苯内酯-11-醇酯。结论：中药当归的化学成分采用薄层色谱法与硅胶柱色谱法进行分离操作简单，为当归化学成分的理化性质研究提供了重要参考依据。
【关键词】 中药;当归;化学成分;内酯类成分;鉴定
【中图分类号】R284.1
【文献标志码】A
【文章编号】 1005-0019（2019）14-118-02
现阶段，中药当归已被广泛应用于临床，在血栓性浅静脉炎、冠心病、高血压、中风、肿瘤、妇科疾病以及贫血等疾病治疗中得到了广泛应用，能促使机体免疫力提高，同时还具备抗氧化、改善肺功能、抗炎等诸多功效[1-2]。本研究主要针对中药当归中的化学成分以及内酯类成分结构进行分析，以此来为临床用药提供科学合理的依据，报道如下。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
JascoJ-1010旋光分析仪器;MP-A4型显微熔点测定仪器;AV-612型以及Bruker ARS-300型核磁共振光谱仪器;DU-640紫外光谱仪器;996二极管阵列检测仪器;Waters717高效液相色谱仪器。
1.2 试剂
三蒸水;柱色谱硅胶;薄层色谱硅胶H;;薄层色谱硅胶GF251;甲醇为色谱纯;正己烷;丙酮;石油醚。
1.3 实验试药
批号为20150217的当归，我院相关专业教授对其进行鉴定之后，确定为为伞形科植物当归的干燥根。
2 方法与结果
2.1 提取与分离当归有效成分
提取当归有效成分：称取10g干燥的中药材当归，粉碎之后浸泡在95%的乙醇溶液中，然后再采用旋转蒸发仪器对其进行浓缩，获取浓缩液与药渣，然后再将95%的乙醇溶液加入药渣中，严格按照以上方式进行浸提，行3次反复操作之后，合并浓缩液，获得1.5L总浸膏[3];在水溶液中悬浮浸膏，对其进行萃取，获得49.95g正丁醇萃取物、26.97g石油醚萃取物、53.1g乙酸乙酯萃取物。
分离当归有效成分：经硅胶柱色谱部分分离醋酸乙酯，梯度洗脱石油醚—醋酸乙酯系统，最终共获得15个化合物与15个部分，经甲醇溶液将第5部分析出白色固体，抽滤之后获得双藁苯内酯，第6部分经硅胶柱色谱分离，获得5-羟甲基糠醛、5-乙酰氧甲基糠醛;第7部分经反复硅胶柱色谱分离，获得对甲基苯酚;第15部分经硅胶柱色谱与柱色谱分离，获得4-（2 羟基-1-甲氧乙基）-苯酚、阿魏酸、4-（2-羟基-1-乙氧乙基）-苯酚。经硅胶柱色谱将乙酸乙酯萃取物反复分离纯化，获得异欧前胡素、菠菜甾醇、发卡二醇、厚朴酚、反式阿魏酸、正丁基苯酞，采用以氯仿—甲醇行梯度洗脱，反复分离纯化后获得黄芩苷。
2.2 内酯类化合物藁苯内酯的分离与鉴定
提取方法：采用超临界CO2萃取法，利用HA141-50-01超临界萃取装置，2取500g当归中药材，采用超临界 CO2（SC-CO2）对其进行萃取，萃取压力控制为20MPa，温度控制为40摄氏度，流量控制为15kg/h，萃取时间控制在2h。
藁本内酯分离方法：选择硅胶柱色谱进行分离，藁本内酯具有较小极性，采行5次反复梯度洗脱，获得藁本内酯，纯度在98%以上。
提取藁本内酯化合物：取当归CO2超临界萃取物，每次试验时均取500g中药当归药材，将其粉碎之后放入超临界萃取釜中，采用CO2对其进行萃取;合并超临界CO2萃取釜提取的挥发油，干燥后采用薄层制备方式行分离处理，行梯度洗脱，每100ml对溶液进行收集，然后再行GC-MS检测，分成5分组份，各個组份均将溶剂挥发干燥后，行薄层色谱分离处理，萃取，溶剂回收之后获得25.4g乙酸乙酯，324g油状物质。再次硅胶柱色谱分离第1份之后，行梯度洗脱，获物（Z）-藁本内酯;第3份经Sephadex LH-20柱色谱获得当归酸（Z）-藁苯内酯-11-醇酯;第7份经高效液相色谱以及硅胶柱色谱 Sephadex LH-20分离获得物（Z）- 6，7-反式-二羟基藁苯内酯;分经过反复硅胶柱色谱后，乙酸乙酯部分获得物（Z）- 6，7-环氧藁苯内酯。
藁本内酯类化合物结构鉴定：（1）（Z）-藁本内酯：经13C-NMR谱中，δ值为126.7、127.5、152.0/145.6等位移值表明有共轭价健存在于结构中，δ值为158.7表明有羰基存在于结构中，按照峰型分裂情况，可知其属于内酯类化合物。（2）（Z）-6，7-反式-二羟基藁苯内酯：经13-NMR，可观察到有12个碳原子存在于本结构中，含有双键碳4个，连氧双键碳1个，羰基结构1个，δ值为42.6 处可以观察到有连氧烷基碳原子存在，同时还有烷基碳5个;Dept显示，有4 个季碳原子存在于低场处，从1H-NMR谱中可以观察到双键氢2个。
3 讨论
当归属于一种常见的中药，主要分布于我国湖南、湖北、贵州、山西、青海、四川、云南以及甘肃等地区[4-5]。该药物具有润肠滑肠、调经止血以及补血和血等诸多功效，主要化学成分包括多糖类、苯酞类、内酯类、酚酸类、黄酮类以及挥发油等[6]。挥发油是当归的主要有效成分，在总生物含量中占有1.2%左右的比例，包括酸性油、酚性油以及中性油3种，其中比重最高的为中性油，其主要成分包括松柏醇阿魏酸酯、新当归内酯、亚丁基苯酞、川芎内酯类以及藁本内酯类等19种，具有降血压等诸多作用，能有效保护实验性心肌缺血症。本研究中提取到了15种化合物，同时还对当归挥发油中的藁本内酯类成分进行结构鉴定，通过超临界CO2萃取法提取当归中的挥发油成分，经硅胶柱色谱法分离出四种化合物，分别为（Z）-藁本内酯、（Z）-6，7-反式-二羟基藁苯内酯、（Z）-6，7-环氧藁苯内酯、当归酸（Z）-藁苯内酯-11-醇酯。
综上所述，中药当归的化学成分采用薄层色谱法与硅胶柱色谱法进行分离操作简单，为当归化学成分的理化性质研究提供了重要参考依据。
参考文献
[1] 朱邵晴， 郭盛， 钱大玮，等. 基于多元功效成分的当归药材产地现代干燥加工方法研究[J]. 中国中药杂志， 2017， 42（2）：264-273.
[2] 李静. 基于NMR代谢组学技术的当归不同部位化学成分比较[J]. 中草药， 2017， 48（7）：1409-1415.
[3] 陈廷廷，刘波，王秀梅. 川西高原当归药花蜜酒发酵条件优化及其风味成分分析[J]. 食品工业科技， 2017， 38（15）：146-151.
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