肉桂多酚对急性酒精性肝损伤的保护作用

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　　摘 要 目的：探究肉桂多酚对急性酒精性肝损伤的保护作用。方法：将54只昆明中小鼠随机平均分为6组：正常组、模型组、阳性对照组（400 mg/kg）和肉桂多酚低、中、高剂量组（150、300、600 mg/kg），试验第14天模型组及各剂量组通过一次灌胃给予50度白酒（14 mg/kg），正常组予以相同剂量蒸馏水建立急性酒精性肝损伤模型，测定各组小鼠血清中AST、ALT、MDA及SOD含量，计算肝脏指数并观察肝脏组织病理学变化。结果：与模型组相比，高、中、低剂量组中血清AST含量降低，SOD活性增强（P<0.05或P<0.01），肝组织病理学改变减轻；仅高、中剂量组中血清ALT、MDA含量显著降低（P<0.05或P<0.01）。结论：肉桂多酚对急性酒精性肝损伤有保护作用。
　　关键词 肉桂多酚 急性酒精性肝损伤 保护
　　中图分类号：R965； R595.6 文献标志码：A 文章编号：1006-1533（2020）03-0065-04
　　Protective effect of cinnamon polyphenols on acute alcoholic liver injury*
　　XU Zexi1**， CHEN Liqin1， LU Weina1， LUO Qichen1， ZHUANG Xiaoyu1， HUANG Qiuchan1， LI Ganfeng1， XIAO Qing2***
　　（1. the Second Clinical College， Guangzhou Medical University， Guangzhou 511436， China； 2. College of Pharmacy， Guangzhou Medical University， Guangzhou 511436， China）
　　ABSTRACT Objective： To investigate the protective effect of cinnamon polyphenol on acute alcoholic liver injury. Methods： Fifty-four Kunming mice were randomly and averagely divided into 6 groups： blank group， model group， positive control group（400 mg/kg）and cinnamon polyphenol low， medium and high dose groups （150， 300， 600 mg/kg， respectively）. Every-dosage group was intragastrically administered with one dose of 50 degrees liquor （14 mg/kg） on the 14th day while the blank group was given the same dose of distilled water so as to establish a model of acute alcoholic liver injury. The serum contents of AST， ALT， MDA and SOD were determined， liver index was calculated and the histopathologic changes of the hepatic tissue were observed in each group. Results： Compared with the model group， the serum contents of AST were decreased and the activity of SOD was increased among high， middle and low dose groups （P<0.05 or P<0.01）， and the pathological changes of liver were alleviated as well. However， only the contents of ALT and MDA in serum were significantly reduced in both high and middle groups （P<0.05 or P<0.01）. Conclusion： Cinnamon polyphenol has protective effect on acute alcoholic liver injury.
　　KEY WORDS cinnamon polyphenols； acute alcoholic liver injury； protection
　　酒精性肝病（ALD）是由于長期的大量饮酒导致的常见的肝脏疾病。酒精肝的发病率与生活水平的提高密切相关。近年来，随着我国人民生活水平逐年的提高，酒精肝的发病率也逐年上升趋势[1]。急性酒精性肝损伤是ALD的早期表现，酒精及其代谢产物会引起脂质代谢紊乱、氧化应激及细胞凋亡等，对肝组织造成损害[2-3]。
　　肉桂为樟科植物肉桂树的干树皮，具有温中补肾，祛寒止痛的功能。近几年来国内外的药理研究发现，肉桂的活化成分有降血糖、抗氧化、抗肿瘤以及神经保护等作用。肉桂多酚是从肉桂皮提取的多酚类物质，目前已鉴定出肉桂多酚主要为类黄酮类及其多聚体化合物，有着抗氧化改善肝细胞的作用[4]。研究表明，黄酮类化合物对于保护急性肝损伤有着良好的效果[5]。本实验主要研究肉桂多酚对急性酒精肝损伤的保护功能以及可能的作用机制，为肉桂多酚解酒护肝的作用的研究提供一定的理论基础和实验依据。 　　1 材料与方法
　　1.1 试验药物
　　肉桂多酚（含量100%，西安明朗生物科技有限公司）；护肝片成分为柴胡、菌陈、板蓝根、五味子、猪胆粉和绿豆（批准文号为国药准字Z20003336，批号201709040，人体推荐用量是1.4 g，黑龙江葵花药业股份有限公司）；50度北京红星二锅头（批号20180305，北京红星股份有限公司）。
　　1.2 实验动物
　　普通级健康雄性昆明种小鼠54只，体质量24～35 g，由广州市白云区江高文毅实验养殖场提供，生产许可证号为SCXK（粤）2017-0042，动物被放置在室温 18～22 ℃、相对湿度65%的环境中饲养，自然明暗周期。
　　1.3 试剂
　　丙二醛（MDA）、谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒，均购于南京建成生物工程研究所，批号：20180727，20180803，20180808，20180809。
　　1.4 主要仪器
　　G9206型Carl Zeiss光学显微镜（蔡司光学仪器国际贸易有限公司）；HF90型恒温箱（上海力申科学仪器有限公司）；5811型台式离心机（德国Eppendorf公司）；DK-8AB型恒温水浴箱（上海默西科学仪器有限公司）；TS-1型漩涡混匀器（海门其林贝尔仪器制造有限公司）；WKYⅢ-2微量移液器（上海宝予德科学仪器有限公司）；Prism R型酶标仪（广州云星科学仪器有限公司）。
　　1.5 方法
　　1.5.1 分组
　　54只小鼠随机分为正常组、模型组、护肝片阳性对照组（400 g/kg）和肉桂多酚低、中、高（150、300、600 mg/kg）剂量组，每组9只。
　　1.5.2 小鼠急性酒精性肝损伤的制备
　　造模参考已有文献[6-8]并根据预实验结果做适当调整。各组小鼠均灌胃给药，正常组和模型组给予等体积蒸馏水。给药体积均为5 mg/kg，每日2次，每天上午11时和下午5时30分给药，各组灌胃前均禁食不禁水5 h，连续灌胃14 d。第14 d最后一次给药1 h后，正常组给予等量蒸馏水灌胃，其他各组小鼠给予50度红星二锅头白酒（14 mg/kg）灌胃制備急性酒精性肝损伤模型。
　　1.6 样品制备与测定
　　1.6.1 血清学生化指标的测定
　　第14 d给酒后禁食不禁水16 h，眼球取血1.5 ml置于离心管内，37 ℃恒温30 min后，离心（3 500 r/min）10 min，小心吸取血清，严格按试剂盒说明检测ALT、AST、MDA及SOD的含量。
　　1.6.2 肝脏指数的测定
　　颈椎脱臼处死小鼠后，取出肝脏，用4 ℃生理盐水洗净，滤纸吸干，称重，计算肝脏指数（LI）（LI=肝脏质量/体质量×100%）。
　　1.6.3 肝组织病理形态学检测
　　取小鼠肝脏左叶中部，大小不超过1 cm3，置于4%多聚甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，切片后HE染色，观察肝组织病理学变化。
　　1.6.4 统计学分析
　　采用SPSS 16.0进行统计学处理分析，实验结果均以均数士标准差表示（n为样本量，组间比较采用单因素方差分析，各指标间比较采用t检验，P<0.05表示差异有统计学意义）。
　　2 结果
　　2.1 小鼠急性肝损伤后肝脏指数的变化
　　与空白组相比，模型组的肝脏指数明显增加（P<0.01）。与模型组相比，肉桂多酚高剂量组肝脏指数降低，但其差异无统计学意义，肉桂多酚中、低剂量组肝脏指数降低，差异具有统计学意义（P<0.05，表1）。
　　2.2 小鼠急性肝损伤后血清转氨酶的变化
　　与空白组相比，模型组的ALT、AST 活性显著升高，其差异具有统计学意义（ P<0.05 ）。肉桂多酚各剂量组，护肝片阳性对照组与模型组相比，ALT、AST水平均降低，其中护肝片阳性对照组和肉桂多酚高、中剂量组均明显降低，差异具有统计学意义（P<0.05或P<0.01，表2）。
　　2.3 小鼠急性肝损伤后血清SOD、MDA的变化
　　与空白组相比，模型组血清中的MDA含量明显升高，SOD活力下降，其差异具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。与模型组相比，肉桂多酚高、中剂量组和护肝片阳性对照组血清中MDA水平降低，SOD含量增加，具有显著差异性（表3）。
　　2.4 小鼠急性肝损伤后肝组织病理形态学的变化
　　肉眼观察空白组肝脏表面呈红褐色，富有光泽。模型组与空白组相比，体积增大，边缘圆钝，部分肝脏色黄且有油腻感。护肝片和肉桂多酚各剂量组介于正常组与模型组之间，肝脏被膜较光滑，颜色较正常，切面无油腻感。经过HE染色后，可见空白组肝细胞以中央静脉为中心放射状排列，条索排列规整，肝细胞胞核浅蓝色且较大，胞质呈粉红色，小叶结构正常。酒精性肝损伤模型组肝细胞明显肿胀，胞内可见气球样变，胞质疏松化，肝索排列紊乱，同时可见炎症细胞浸润。肉桂多酚高、中剂量组肝细胞轻度肿胀，肝索排列较整齐，炎症细胞浸润减轻，低剂量组出现明显的变性坏死。护肝片阳性对照组肝细胞形态与空白组类似，未见变性，坏死等情况（图1）。 　　3 讨论
　　白酒灌胃法为诱导小鼠急性酒精性肝损伤的一种常用方法，它具有死亡率低、符合人类饮酒习惯等优点。酒精摄入后造成肝损害，其明显特征是细胞酶外漏至血浆[9]。本实验采取一次大剂量白酒灌胃法诱导出小鼠急性酒精性肝损伤模型，禁食16 h，取血，血清的转氨酶ALT、AST活力及MDA含量显著升高，且SOD活力显著降低。病理组织学检查提示，肝细胞呈现不同类型和不同程度的变性改变并伴有炎症，表明本实验成功制备了小鼠急性酒精性肝损伤模型。
　　酒精性肝损伤的致病机制与氧化应激关系紧密，而多酚具有较强的还原性，可清除生物体内的超氧自由基，其清除自由基能力和总酚含量呈线性正相关，并通过抑制脂质过氧化而保护肝肾，动物和人体实验证明肉桂多酚具有抗氧化的作用[10]。肉桂多酚显著降低血清中氧化应激标记物水平，同时，还显著降低NF-kB转录因子的活力进而抑制一氧化氮合成酶iNOS基因的表达[8]。
　　本实验将肉桂多酚用于酒精性肝损伤的防治，结果显示低、中、高剂量的肉桂多酚对急性酒精肝损伤都有保护作用，但中、高剂量的保护作用显著优于低剂量组。其中高剂量组肝脏指数降低，但差异无统计学意义，推测可能与高剂量的肉桂多酚可导致中毒反应有关。因此，肉桂多酚对急酒精性肝损伤的保护作用存在一定的量效关系。本实验有效的剂量范围为300～600 mg/kg，但由于实验样本有限，尚不能得出最适剂量。
　　综上所述，肉桂多酚能有效提高肝组织抗氧化能力，减少乙醇代谢过程中产生的自由基，有效稳定氧化与抗氧化的动态平衡，进而减轻氧化应激对肝组织产生的脂质过氧化损伤，保护肝细胞膜正常的通透性，降低血清转氨酶的活性，减轻肝损伤过程中的病理改变，维持正常的肝功能。其确切的作用机制，如是否降低NF-kB轉录因子的活力等还有待进一步深入研究。
　　参考文献
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