藻酸双酯钠氯化钠注射液的制备\质量控制\稳定性及安全性考察

来源:用户上传      作者: 徐芳辉 李健和 王 强 曹俊华

　　[摘要] 目的:制备藻酸双酯钠氯化钠注射液,建立其质量控制方法,并考察其稳定性和安全性。方法:优化处方组成与制备工艺,并进行性状、鉴别、检查等质量研究,采用滴定法测定藻酸双酯钠和氯化钠的含量,影响因素试验、加速试验和长期试验考察其稳定性,血管刺激性试验、溶血性试验以及过敏性试验评价其用药的安全性。结果:藻酸双酯钠和氯化钠的平均回收率分别为99.73%、100.93%,RSD分别为0.34%、0.17%。恒温加速试验6个月和长期留样试验12个月,其性状、pH值、溶液颜色、不溶性微粒、无菌、热原、主药含量等均未见明显改变。结论:该制剂处方合理,制备工艺简便可行,质量可控,稳定性良好,用药安全。
　　[关键词] 藻酸双酯钠氯化钠注射液;制备;质量控制;稳定性;安全性
　　[中图分类号] R943 [文献标识码]C [文章编号]1674-4721(2010)07(a)-173-03
　　
　　Alginic sodium diester and sodium chloride injection:preparation,quality control,stability and safety study
　　XU Fanghui1,LI Jianhe2*,WANG Qiang1,CAO Junhua2
　　(1.Yiyang Medical College,Hunan Province,Yiyang 413000,China;2.Department of Pharmacy,The Second XiangYa Hospital, Central South University, Hunan Province,Changsha 410011,China)
　　[Abstract] Objective: To prepare alginic sodium diester and sodium chloride injection,establish its quality control and investigate its stability and safety. Methods: Some work was done to optimize the prescription and preparation technology.The character, identification and examination et al were tested. The content of alginic sodium diester and sodium chloride were determined by the method of titration.Stress testing, accelerated testing and long-term testing were done to study its stability.The safety was evaluated by testing the vessel stimulation,haemolyticus and hypersensitivity. Results: The mean recovery and RSD of alginic sodium diester and sodium chloride were 99.73%,0.34% and 100.93%, 0.17% respectively.No obvious changes were observed at 6 months of an accelerated test or 12 months of long-term storage test. Conclusion: The preparation is reasonable in formulation,simple and convenient in preparation technique,accurate in quality control,good in stablility,and safe in application.
　　[Key words] Alginic sodium diester and sodium chloride injection;Preparation;Quality control;Stability;Safety
　　
　　藻酸双酯钠是以海藻提取物为基础原料,经引入有效基团精制而得的多糖类化合物,属类肝素药。具有抗凝血、降低血黏度、降血脂、抑制红细胞和血小板聚集和改善微循环作用,是近年来常用的预防心脑血管疾病和改善微循环药物之一[1-5]。鉴于藻酸双酯钠安瓿装注射剂不能直接肌注和静脉注射,临用前须注入5%或10%葡萄糖注射液和0.9%氯化钠注射液内稀释后再用[6],这样配制过程中药物有可能被空气、尘埃、异物和微生物污染,故笔者研制开发了藻酸双酯钠氯化钠注射液,直接静脉滴注,可避免上述现象的产生,方便临床应用,降低护理人员工作量。现将其制备、质量控制、稳定性及安全性考察的研究结果报道如下:
　　1 一般资料
　　上海精密科学仪器有限公司FA1004N型电子分析天平;上海雷磁仪器厂pHS-3C型精密酸度计;天津大学精密仪器厂GWJ-3智能微粒检测仪;天津大学精密仪器厂YB-Z型澄明度检测仪;杭州高得医疗器械有限公司全封闭式HTY-2000型集菌仪;杭州高得医疗器械有限公司KSF集菌培养器;广东医疗器械厂生化培养箱。
　　藻酸双酯钠原料药(赤峰松州制药厂提供;批号:090120,含量:99.7%。);氯化钠(江苏南通勤奋制药厂,批号:090210,含量:99.9%);藻酸双酯钠氯化钠注射液(中南大学湘雅二医院药学部和湖南科伦制药有限公司研制提供,规格为100 ml:藻酸双酯钠0.1 g+氯化钠0.86 g,批号:20090318、20090420、20090421、20090422);醋酸钠和醋酸为药用辅料,盐酸、硝酸、氯化钡、氯化镁、乙二胺四醋酸二钠等试剂均为分析纯。
　　2 方法与结果
　　2.1 处方工艺
　　处方:藻酸双酯钠1.0 g,氯化钠8.6 g,三水醋酸钠1.2 g,10%醋酸溶液适量(约0.14 ml)调药液pH值至6.0,注射用水加至1 000 ml。
　　工艺:称取藻酸双酯钠1.0 g,加至80～90℃注射用水500～600 ml中,搅拌溶解后,抽滤,得药液1;另称取氯化钠8.6 g和三水醋酸钠1.2 g,加入80～90℃注射用水约50 ml中,搅拌溶解后,加入浓溶液0.2%的药用活性炭0.1 g,搅匀,煮沸15 min,抽滤脱炭,得药液2。将药液2加入药液1中,补加注射用水至990 ml,搅匀,用10%醋酸溶液适量(约0.14 ml)调药液pH值至6.0,搅匀,补加注射用水至1 000 ml,搅匀,取样测定药液pH值及藻酸双酯钠和氯化钠含量,合格后,精滤,灌封于100 ml玻璃输液瓶中,115℃热压灭菌30 min,澄明度检查合格后,贴标签,包装,即得。
　　2.2 质量检查
　　本品为藻酸双酯钠加适量氯化钠使之成等渗的灭菌水溶液,含藻酸双酯钠和氯化钠均应为标示量的90.0%～110.0%。

　　2.2.1 性状
　　本品为无色或几乎无色的澄明液体。
　　2.2.2 鉴别
　　取本品50 ml,置水浴上蒸发至约1 ml,加盐酸羟胺试液2 ml,氢氧化钠溶液(6 mol/L)0.4 ml,摇匀,加热至沸,放冷,加盐酸溶液(1 mol/L)4 ml,三氯化铁试液3～5滴,溶液应显酒红色。
　　2.2.3 检查
　　pH值:应为5.0～7.0(中国药典2005年版二部附录ⅥH)。
　　颜色:本品,应无色,如显色,与黄色或黄绿色1号标准比色液比较(中国药典2005年版二部附录ⅨA第一法),不得更深。
　　重金属:取本品50 ml,蒸发至约20 ml,放冷,加醋酸盐缓冲液(pH 3.5)2 ml与水适量使之成25 ml,依法检查(中国药典2005年版二部附录ⅧH第一法),含重金属不得过3‰。
　　不溶性微粒:取本品1瓶,依法检查(中国药典2005年版二部附录ⅨC),应符合规定。
　　热原:取本品,依法检查(《中国药典》2005年版二部附录ⅪD),剂量按家兔体重每1千克缓缓注射10 ml,应符合规定。
　　 其他:应符合注射剂下有关的各项规定(《中国药典》2005年版附录ⅠB)。
　　2.3 含量测定
　　2.3.1 藻酸双酯钠含量测定
　　2.3.1.1方法的确定 参照卫生部药品标准二部第四册藻酸双酯钠原料、片剂及注射液项下的方法进行。
　　精密量取本品50 ml,置锥形瓶中,小火加热至干,加盐酸10 ml,硝酸4 ml,加热至微沸,水解40～60 min(至溶液约1 ml),精密加入氯化钡溶液(0.05 mol/L)10 ml,继续煮沸5 min,放冷,加溴麝香草酚蓝指示液2滴,用氢氧化钠溶液(2 mol/L)中和至显蓝色,加氨-氯化铵缓冲液(pH 10)10 ml,精密加入氯化镁溶液(0.05 mol/L)5 ml,铬黑T指示剂适量,用乙二胺四醋酸二钠滴定液(0.05 mol/L)滴定至纯蓝色,并将滴定结果用空白试验校正。每1毫升乙二胺四醋酸二钠滴定液(0.05 mol/L)相当于13.94 mg的藻酸双酯钠。
　　2.3.1.2 滴定度的确定 取80°C干燥4 h的藻酸双酯钠,按上述方法测定,计算滴定度,结果见表1。试验结果表明:滴定度测得值与理论值基本一致。
　　2.3.1.3 回收率试验精密称取经80°C干燥4 h的藻酸双酯钠适量,及相当处方量的空白辅料溶液(处方中除藻酸双酯钠以外所用的原辅料),分别制成高、中、低3种溶液的浓度,按上述方法测定藻酸双酯钠含量,计算回收率,结果见表2。试验结果表明本方法回收率良好。
　　2.3.1.4 重现性试验取同一批样品(批号:20090421),共6份,按含量测定项下方法,分别测定其藻酸双酯钠的含量,结果其平均含量为101.98%,RSD值为0.29%,本方法重现性良好。
　　2.3.1.5 3批样品中藻酸双酯钠含量的测定取3批样品(批号:20090420、20090421、20090422),按上述方法测定藻酸双酯钠含量,测定结果见表3。
　　2.3.2 氯化钠含量测定
　　2.3.2.1 方法的确定 参照《中国药典》2005年版二部氯化钠注射液项下的方法进行。
　　精密量取本品10 ml,加水40 ml,2%糊精溶液5 ml与荧光黄指示5～8滴,用硝酸银滴定液(0.1 mol/L)滴定,每1毫升硝酸银滴定液(0.1 mol/L)相当于5.844 mg的NaCl。
　　2.3.2.2 空白辅料的干扰试验取本品处方量的空白辅料溶液(处方中除氯化钠以外所用的原辅料),按上述方法测定,不消耗硝酸银滴定液(0.1 mol/L),表明空白辅料不干扰氯化物的测定。
　　2.3.2.3 回收率试验 精密称取经105°C干燥至恒重的氯化钠基准适量,及相当处方量的空白辅料溶液(处方中除氯化钠以外所用的原辅料),分别制成高、中、低3种溶液的浓度,按上述方法测定氯化钠含量,计算回收率,结果见表4。试验结果表明本方法回收率良好。
　　2.3.2.4重现性试验取同一批样品(批号:20090421),共6份,按含量测定项下方法,分别测定其氯化钠的含量,结果其平均含量为100.93%,RSD为0.17%,本方法重现性良好。
　　2.3.2.5 3批样品中氯化钠含量的测定取3批样品(批号:20090420、20090421、20090422),按上述方法测定氯化钠含量,测定结果见表3。
　　2.4 稳定性考察
　　2.4.1影响因素试验
　　对按照上述处方工艺生产的批号为:20090318的藻酸双酯钠氯化钠注射液置高温[(60±2)℃]、低温(0～5℃)以及光照(4 500±500) lx条件下,分别于0、5、10 d定期取样,然后进行质量检测,并与0 d的数据进行比较分析。结果在上述高温、低温及光照条件下5 、10 d藻酸双酯钠氯化钠注射液的性状、pH值、溶液的颜色、不溶性微粒、无菌、热原及藻酸双酯钠和氯化钠的含量与0 d比较均基本上无明显变化,示其在上述试验条件下较为稳定;这些进一步证明本处方及工艺基本合理、可行。
　　2.4.2 恒温加速试验
　　取模拟上市包装批号为20090420、20090421、20090422的藻酸双酯钠氯化钠注射液3批,放入温度(40±2)℃、相对湿度(75±5)%的生化培养箱中,分别于0、1、2、3、6个月定期取样,然后进行质量检测,并与0个月的数据进行比较分析。结果本品经加速试验6个月后,通过检查试验前后其性状、pH值、溶液的颜色、不溶性微粒、无菌、热原及藻酸双酯钠和氯化钠的含量等,1、2、3、6个月的各项检测指标与0个月比较均基本上无变化,表明本品在本加速试验条件下放置6个月较为稳定。
　　2.4.3 长期留样试验
　　取模拟上市包装批号为20090420、20090421、20090422的藻酸双酯钠氯化钠注射液3批,在温度(25±2)℃、相对湿度(60±10)%的条件下放置12个月,分别于0、3、6、9、12个月定期取样,然后进行质量检测,并与0个月的数据进行比较分析。12个月后仍须继续考察,检测结果与0个月比较,以便确定药品的有效期。结果本品经长期试验12个月后,通过检查试验前后其性状、pH值、溶液的颜色、不溶性微粒、无菌、热原及藻酸双酯钠和氯化钠的含量等,3、6、9、12个月的各项检测指标与0个月比较均基本上无变化,表明本品在本长期试验条件下放置12个月较为稳定。本品暂定有效期为2年,贮藏条件为:密封,在干燥处保存。
　　2.5 安全性试验
　　对藻酸双酯钠氯化钠注射液进行了全身过敏性、溶血性及血管刺激性试验,以此评价本品用药的安全性。在全身过敏性试验中,选用豚鼠隔日腹腔注射受试物,连续3次,于首次注射后第14及21天静脉注射藻酸双酯钠氯化钠注射液,观察攻击后15 min内动物的反应,同时设阳性对照组及阴性对照组,结果藻酸双酯钠氯化钠注射液无变态反应。在溶血性试验中,用2%的红细胞悬液分别加入不同量的药液,摇匀后置37℃恒温箱中观察4 h,观察有无溶血和凝集现象,结果藻酸双酯钠氯化钠注射液未使红细胞产生溶血或凝集等反应,溶血试验为阴性。在血管刺激性试验中,选用家兔耳缘静脉注射藻酸双酯钠氯化钠注射液,每天1次,连续3 d,末次注射后24 h及7 d,肉眼观察注射部位的血管及周围组织的变化,并进行病理组织学检查,结果藻酸双酯钠氯化钠注射液给家兔静脉注射均未见明显的刺激性。
　　3 讨论
　　根据《中国药典》2005年版二部附录对注射剂的要求,对本品的性状、鉴别、酸度、溶液颜色、重金属、无菌、热原、含量等各项指标进行研究,建立本品的质量控制标准。本品处方工艺合理可行,质量可控,稳定性良好,用药安全。
　　藻酸双酯钠系海带提取物褐藻酸钠经水解、酯化而成的一种藻酸丙酯的硫酸酯钠盐,因分子结构中含有硫,在强酸条件下水解生成硫酸盐,与过量的氯化钡反应生成硫酸钡,剩余的氯化钡用乙二胺四醋酸二钠滴定液回滴定,测得其含量,加入氯化镁,使终点敏锐,易于观察。经测定3批样品,结果均在90.0%～110.0%范围内。
　　
　　[参考文献]
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　　(收稿日期:2010-05-19)

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