辣木果胚油的体外抗氧化活性研究
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摘 要：辣木果胚油来源于辣木籽、翼籽辣木籽，该文通过不同评价方法测定辣木果胚油的体外抗氧化活性。即通过测定ABTS（2，2-联氮-二-（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）-二铵盐）自由基清除能力、DPPH（1，1-二苯基-2-苦肼基）自由基清除能力和二价铁离子的螯合能力来判断辣木果胚油的体外抗氧化活性，辣木果胚油的体外抗氧化活性在一定范围内随浓度的增大而增加。结果如下：当辣木果胚油的浓度为16 mg/mL时，对ABTS自由基清除能力为78.58%;当辣木果胚油的浓度为20 mg/mL时，对DPPH自由基清除能力为51.18%;当辣木果胚油的浓度为10 mg/mL时，对二价铁离子的螯合能力为70.03%。
关键词：辣木果胚油;抗氧化活性;ABTS;1，1-二苯基-2-三硝基苯肼
中图分类号：Q946 文献标志码：A
辣木（Moringa oleifera）属于辣木科（Moringaceae）辣木属（Moringa Adans.）的热带落叶木本蔬菜及油料植物，树龄约为20a，全世界约有13个辣木品种。
辣木（Moringa oleifera）叶片和果荚富含多种矿物质、维生油、蛋白质、氨基酸、辣木多肽和脂肪等有效成分，脂肪主要集中在种子上，其中含有较高的不饱和脂肪酸。辣木活性成分具有抗氧化和保护肝脏、降血糖、降血脂和血压、抗菌消炎等保健功效。辣木果胚油是一款来源于辣木籽、翼籽辣木籽提取的精油，具有多种活性成分。该文对辣木果胚油的体外抗氧化活性进行深入探讨。
1 实验部分
1.1 试剂与仪器
辣木果胚油，10 mL，红河谷辣木产业有限公司;2，2-联氮-二-（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）-二铵盐（ABTS），1 g，上海伊卡生物科技有限公司;1，1-二苯基-2-苦肼基（DPPH），1 g，上海源叶生物科技有限公司;亚铁嗪，1 g，Sigma;过硫酸钾，500 g，天津市风船化学试剂科技有限公司;维生素E，100 g，上海伊卡生物科技有限公司;乙二胺四乙酸二钠，100 g，上海伊卡生物科技有限公司;氯化亚铁，500 g，天津市风船化学试剂科技有限公司;无水乙醇，500 mL，天津市风船化学试剂科技有限公司。UV-1800 PC型紫外-可见分光光度计，上海美谱达仪器有限公司;FA2004型電子天平，上海舜宇恒平科学仪器有限公司;HH-4型水浴锅，金坛市双捷实验仪器厂;SK-1型快速混匀器，常州丹瑞实验仪器设备有限公司;实验室超纯水机，重庆圣德利医疗器械研究有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 ABTS自由基清除能力
7 mM ABTS溶液：称取38.41 mg ABTS溶解在5 mL去离子水中;2.45 mM过硫酸钾：称取6.61 mg过硫酸钾溶解在5 mL去离子水中;2种溶液混合均匀，避光条件下放置16 h～24 h（让其充分氧化）。使用时用无水乙醇按1∶80稀释使用，现配现用。取稀释好的ABTS溶液4 mL，加入80 μL用无水乙醇溶解的辣木果胚油（MOP）溶液，浓度为2 mg/mL、4 mg/mL、
8 mg/mL、12 mg/mL、16 mg/mL，混匀在37 ℃水浴放置10 min，测定734 nm处的吸光度。维生素E做阳性对照。平行3次，空白不加样品，以等量的无水乙醇代替，辣木果胚油抗氧化率计算如下：
其中As代表样品的吸光度，A代表空白的吸光度。
1.2.2 DPPH自由基清除能力测定
取辣木果胚油（MOP）溶液2 mL，浓度为1.0 mg/mL、2.0 mg/mL、5.0 mg/mL、10.0 mg/mL、20.0 mg/mL，加入1 mL用无水乙醇溶解的0.2 mM的DPPH溶液，混匀放置30 min，测定517 nM处的吸光度。维生素E做阳性对照。平行3次，空白不加样品，以等量的无水乙醇代替，辣木果胚油抗氧化率计算如下：
其中As代表样品的吸光度，A代表空白的吸光度。
1.2.3 二价铁离子的螯合能力测定
配制1.0 mg/mL、2.0 mg/mL、4.0 mg/mL、5.0 mg/mL、10.0 mg/mL的辣木果胚油（MOP）溶液各取1 mL，加入3.7 mL无水乙醇，再加入2.0 mM的FeSO4·7H2O溶液0.1 mL，混匀25 ℃下水浴60 min，加入5 mM的亚铁嗪溶液0.2 mL，混匀25 ℃下水浴10 min，在562 nm处测定吸光度。EDTA做阳性对照。平行3次，空白不加样品，以等量的无水乙醇代替，辣木果胚油对二价铁离子的螯合能力计算如下：
其中As代表样品的吸光度，A代表空白的吸光度。
2 结果与讨论
2.1 ABTS自由基清除能力
2，2-联氮-二-（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）-二铵盐（ABTS）是以水溶性的自由基引发剂为显色剂，ABTS经过硫酸钾氧化生成稳定的蓝绿色阳离子ABTS自由基，ABTS法是用于体外检测物质总抗氧化能力的方法。
随着辣木果胚油浓度（2 mg/mL～16 mg/mL）的增加，当浓度达到16 mg/mL时，辣木果胚油对ABTS自由基的清除能力达到78.58%。
2.2 DPPH自由基清除能力
DPPH又称1，1-二苯基-2-三硝基苯肼，是一种很稳定的氮中心的自由基，常用于抗氧化成分的体外抗氧化性评价。DPPH法于1958年提出，依据是DPPH自由基有单电子，在517 nm处有一强吸收，其醇溶液显紫色。
辣木果胚油对DPPH自由基的清除能力随辣木果胚油浓度的增大而增强。当辣木果胚油的浓度达到20 mg/mL时，其清除DPPH自由基的能力达到51.18%。这一结果说明辣木果胚油具有较强的清除DPPH自由基的能力。
2.3 二价铁离子的螯合能力
二价铁离子螯合能力的方法用亚铁嗪作为显色剂，亚铁嗪是测定Fe2+的一种特效显色剂。原理是抗氧化物质被认为具有螯合金属离子的能力，从而避免发生芬顿反应产生自由基。当最后加入亚铁嗪后，未被螯合的二价铁离子与亚铁嗪形成紫红色的显色团，在562 nm处有强吸收，根据吸光度的大小可以间接的反映抗氧化物质的抗氧化能力。
辣木果胚油对二价铁离子的螯合能力随辣木果胚油浓度的增大而增强。当辣木果胚油的浓度达到10 mg/mL时，其螯合能力达到70.03%。这一结果说明辣木果胚油具有较强的螯合二价铁离子的能力。
EDTA是很好的螯合剂，可以被广泛应用。辣木果胚油螯合能力为70.03%，表明它是一种很好的抗氧化剂，有望在其他方面的应用。
3 结论
（1）当辣木果胚油的浓度为16 mg/mL时，对ABTS自由基清除能力为78.58%。
（2）当辣木果胚油的浓度为20 mg/mL时，对DPPH自由基清除能力为51.18%。
（3）当辣木果胚油的浓度为10 mg/mL时，对二价铁离子的螯合能力为70.03%。
参考文献
[1]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志（第三十四卷第一分册）[M].北京：科学出版社，1984.
[2]盛军.现代辣木生物学[M].云南：云南出版集团公司，云南科技出版社，2015.
[3]林玲，何舒澜.辣木的研究进展[J].海峡药学，2013，25（11）：60-63.
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