海南省主栽辣椒品种疫病抗性及防治药剂筛选

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　　摘要：采用灌根法对海南省主栽的19个辣椒品种进行了辣椒疫病抗性鉴定，采用菌丝生长抑制法评价6种药剂对辣椒疫霉菌的抑制效果，并对6种药剂进行辣椒疫病盆栽防效试验比较。结果表明，辣椒品种对疫病的抗性存在较大差异，筛选出17份感病品种;筛选出1份高抗品种，为热辣4号绿皮线椒;1份中抗品种，为辣丰新三号。不同药剂对辣椒疫霉菌的菌丝抑制存在明显差异，其中，50%烯酰吗啉可湿性粉剂对菌丝的抑制效果最好，EC50为0.575 0 μg/mL;其次是68%精甲霜·锰锌水分散粒剂，EC50为2.202 9 μg/mL;68%精甲霜·锰锌水分散粒剂400倍稀释液进行灌根对辣椒疫病的盆栽防效最好，达65.68%。综合室内菌丝抑制和盆栽药效试验，68%精甲霜·锰锌水分散粒剂对辣椒疫病有较好的防治效果。
　　关键词：辣椒疫病;抗性筛选;防治药剂
　　中图分类号：S436.418.1         文献标识码：A
　　文章编号：0439-8114（2019）24-0113-04
　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.24.027           开放科学（资源服务）标识码（OSID）：
　　Selection of pepper blight resistance and control fungicide of
　　pepper varieties in Hainan province
　　DU Gong-fu1，SHEN Long-bin1，QIN Yu-ling1，LI Han-feng2，YE Jian-qiu2，QI Zhi-qiang1，CAO Zhen-mu1
　　（1.Tropical Crops Genetic Resources Institute，Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences，Danzhou 571737，Hainan，China;
　　2.Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences Proving Ground，Danzhou 571737，Hainan，China）
　　Abstract： The resistances of 19 pepper materials planted in Hainan to pepper blight were identified by means of root irrigating method. The inhibition effect of six fungicides on Phytophthora capsici was evaluated by mycelium growth inhibition method. And the effects of 6 fungicides on pot culture were compared. The results showed that there were great differences in disease resistance of the tested pepper varieties， among which 17 kinds of susceptible materials were screened out; One medium resistance species was screened out， which was Lafeng new No. 3; One high resistance species was screened out， which was Hot No. 4 green string pepper. The inhibition effect of different agents on the mycelia of Phytophthora capsici was significantly different. Among them， 50% dimorpholine wetable powder had the best inhibition effect on the mycelia， with EC50 of 0.575 0 μg/mL. The second was 68% metalaxyl·manganese zinc water dispersible granule， EC50 was 2.202 9 μg/mL. The best control effect was 68% metalaxyl·manganese zinc water dispersible granule 400 times diluted for root irrigation on pepper blight pot， up to 65.68%. Combined with indoor toxicity test and pot control experiment， 68% metalaxyl·manganese zinc water dispersible granule can be used to control pepper blight.
　　Key words： pepper blight; resistance screening; control fungicide
　　辣椒疫病是辣椒的一種毁灭性土传病害，严重威胁辣椒的生产，病原菌为辣椒疫霉菌（Phytophora capsici），其寄主范围广泛，可侵染茄果类和葫芦科等多种蔬菜[1-3]。近年来中国辣椒产业发展速度快，栽培面积大，多年在同一地块连作的普遍现象，造成了土壤理化性质劣变、土壤结构不合理等方面的障碍问题，进而导致辣椒疫病发生日益严重。由于辣椒疫霉菌有多种生理小种，且小种多样性及其与寄主、环境之间复杂的互作关系，使各个地方优势的生理小种不同，导致很多辣椒品种在某些地方是抗性品种，但在其他地方可能就是感病品种，使得辣椒抗疫病的育种工作十分困难[4，5]。因此，辣椒疫病逐渐发展成制约辣椒产业健康发展的主要病害之一。 　　目前，对辣椒疫病的防治主要还是依靠化学防治和选育抗病品种。化学防治效果明显，但长期使用也会导致疫霉菌抗性增强，投入成本不断增加，同时也会造成环境污染等问题;选育抗病品种是最高效安全的措施，但是品种的选育具有周期长和不确定性，不能及时满足市场的变化，因此有必要进行高效化学药剂和抗病品种的筛选，为辣椒疫病的防治和抗病品种的推广提供数据支撑。
　　1  材料与方法
　　1.1  材料
　　1.1.1  供试辣椒品种  供试的19份辣椒品种均由中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所蔬菜研究室提供，具体品种名称及来源见表1。
　　1.1.2  供试菌株  供试菌株辣椒疫霉菌由中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所蔬菜实验室保存，培养于PDA培养基上25 ℃培养箱中备用。
　　1.1.3  供试药剂  供试药剂共6种，具体药剂名称及来源见表2。
　　1.2  方法
　　1.2.1  菌种的准备  将试管保存的辣椒疫霉菌接种在PDA培养基（马铃薯∶琼脂∶葡萄糖=200g∶20g∶20g）上，并置于生化培养箱中25 ℃条件下培养7 d，产生大量孢子囊后，用无菌水洗刷菌丝并收集起来，然后用双层尼龙布过滤，将收集到的菌悬液置于4 ℃冰箱中预冷30min，目的是促使孢子囊释放游动孢子，取出预冷的菌悬液用血球计数板计算游动孢子的数量，无菌水稀释至1mL约含有1000个游动孢子。
　　1.2.2  辣椒品种抗性鉴定  待19份辣椒品种长至6叶1心时开始进行接菌试验[6，7]。将“1.2.1”稀释好的菌悬液接种到距离辣椒幼苗根茎约3cm处，孔深3cm左右，每个孔穴灌3 mL游动孢子菌悬液。每个品种24株，3次重复。接种后保湿12 h后适时浇水以保持土壤湿度近饱和状态，温度保持在（25±1） ℃。接菌后15d调查19份辣椒发病情况，记录发病率、病情指数及进行抗性评价。
　　1.2.3  调查分级及计算病情指数  按照辣椒疫病的调查标准进行分级[8，9]。0级，无病;1级，幼苗根茎部轻微水渍状发褐，叶片不萎蔫或可恢复性萎蔫;2级，幼苗根茎部变水渍状褐色，发病部位长度1～2cm，叶片不可恢复性萎蔫，下部叶片偶有脱落;3级，幼苗根茎部变水渍状褐色，发病部位长度超过2cm，叶片明显萎蔫或落叶明显;4级，幼苗根茎部变水渍状褐色，并且茎秆有溢缩现象，除生长点外全部落叶或植株萎蔫;5级，植株枯死。
　　病情指数=[∑（病级数值×该病级病株数）×100]/（病级最高数×调查株数）
　　品种群体抗病性划分标准：高抗（HR），病情指数≤10;抗病（R），10<病情指数≤30;中抗（MR），30<病情指数≤50;感病（S），病情指数>50。
　　1.2.4  室内毒力测定  采用菌丝生长抑制法对6种化学药剂进行辣椒疫霉菌室内毒力试验[10，11]。用直径0.8 cm的打孔器在辣椒疫霉菌菌菌落边缘进行打菌圈，菌落在PDA培养基上培养4 d。然后将菌圈转移到含不同药剂浓度的PDA培养基上，放置在平板中央，每个平板接1个菌圈。
　　每種药剂设5个浓度（μg/mL）梯度处理，0.05、0.10、0.20、0.40、0.80（50%烯酰吗啉可湿性粉剂），0.1、0.2、0.5、1.0、2.0（70%甲基托布津可湿性粉剂，68%精甲霜·锰锌水分散粒剂），0.5、1.0、3.0、10.0、30.0（50%克菌丹可湿性粉剂），0.1、0.5、2.5、12.5、60.0（33.5%喹啉铜悬浮剂），5、10、20、50、100（64%恶霜·锰锌可湿性粉剂）。
　　每个药剂浓度设3次重复，只接菌不含药的处理为对照。放置在生化培养箱25 ℃恒温条件下黑暗培养4 d，用十字交叉法测量菌落直径，计算抑制生长率，并求出毒力回归方程和抑制中浓度EC50。
　　抑制生长率=[（对照菌落直径-0.8）-（处理菌落直径-0.8）]/（对照菌落直径-0.8）×100%
　　1.2.5  盆栽药效试验  试验在大棚内实施，辣椒供试品种为久保田螺椒王，每个处理15株辣椒，3次重复，7个处理。以接菌不施药的植株为对照，上午接菌（参考“1.22”），下午将药剂分别配制成相应浓度，每株灌施60 mL，每隔7 d调查1次，计算病情指数及防治效果。
　　2  结果与分析
　　2.1  辣椒品种抗疫病鉴定
　　对19份材料进行抗疫病鉴定，鉴定结果如表3所示，海南省主栽的19个辣椒品种对疫病的抗性存在较大差异。根据辣椒品种群体抗病性划分标准，筛选出1份高抗品种，为热辣4号绿皮线椒，占辣椒品种群体的5.26%;1份中抗品种，为辣丰新三号，占辣椒品种群体的5.26%;17份感病品种，占辣椒品种群体的89.47%。表现高抗的热辣4号绿皮线椒在接种后10 d仍没有发病，发病率为0，说明热辣4号绿皮线椒对辣椒疫病高抗。
　　2.2  室内毒力测定
　　采用生长速率法测定6种药剂对辣椒疫霉菌的毒力，结果（表4）显示，14种药剂EC50的大小顺序表现为50%烯酰吗啉可湿性粉剂<68%精甲霜·锰锌水分散粒剂<33.5%喹啉铜悬浮剂<70%甲基托布津可湿性粉剂<50%克菌丹可湿性粉剂<64%恶霜·锰锌可湿性粉剂。不同药剂对辣椒疫霉菌的菌丝抑制存在明显差异，其中，50%烯酰吗啉可湿性粉剂对菌丝的抑制效果最好，EC50为0.575 0 μg/mL;其次是68%精甲霜·锰锌水分散粒剂，EC50为2.202 9 μg/mL;对辣椒疫霉菌菌丝抑制效果较差的是64%恶霜·锰锌可湿性粉剂，EC50为283.530 6 μg/mL，与50%烯酰吗啉可湿性粉剂抑制效果相差约492倍。 　　2.3  盆栽药效试验
　　对6种化学药剂进行辣椒疫病盆栽防治效果试验比较。从表5可以看出，不同药剂对辣椒疫病的防效差异较大，68%精甲霜·锰锌水分散粒剂400倍稀释液灌根处理对辣椒疫病的防治效果最好，药后14 d防效达65.68%;70%甲基托布津可湿性粉剂400倍稀释液防效最差，药后14 d防效为38.02%。
　　3  小结与讨论
　　本研究采用最接近田间疫病发生过程的游动孢子灌根接种法，对19份不同类型的辣椒品种进行了疫病抗性鉴定，筛选出1份高抗品种，为热辣4号绿皮线椒;1份中抗品种，为辣丰新三号，这些品种均可用于辣椒生产推广，可以有效减少辣椒疫病发生。
　　目前关于辣椒对疫病的抗性鉴定方法尚未统一，存在很多因素的影响，比如接菌时使用的浓度、接菌方法（伤根法、拌土法）、合适的辣椒生育期（4叶1心或6叶1心）、疫霉菌的致病力等均对辣椒疫病抗性鉴定结果存在不统一性[12，13]。综合这些因素，本试验采用灌根法在辣椒植株6叶展平期进行人工接种，选用来源于海南省当地的菌株作为接种体，有利于筛选到适用于海南省当地抗辣椒疫病的品种。
　　对于辣椒疫病防治药剂的筛选，采用了测定药剂EC50和盆栽药效试验相结合，采用菌丝生长抑制法对6种化学药剂进行辣椒疫霉菌室内毒力试验，结果表明，不同药剂对辣椒疫霉菌的菌丝抑制存在明显差异，其中，50%烯酰吗啉可湿性粉剂对菌丝的抑制效果最好，EC50为0.575 0 μg/mL;其次是68%精甲霜·锰锌水分散粒剂，EC50为2.202 9 μg/mL。辣椒疫病盆栽防治效果试验结果表明，利用68%精甲霜·锰锌水分散粒剂400倍稀释液进行灌根对辣椒疫病的防治效果最好，防效达65.68%。综合室内菌丝抑制和盆栽药效试验，68%精甲霜·锰锌水分散粒剂对辣椒疫病有较好的防治效果。
　　对于辣椒疫病的防治，首先要明确引起辣椒疫霉菌的生理小种，根据海南省优势种群构建抗病品种的选育及药剂的筛选。因此，本试验前期对辣椒疫霉菌的生理小种进行鉴定，为生理小种3号菌，采用优势生理小种开展抗病鉴定及药剂筛选具有准确性及适应本区域性。
　　生产中避免长期使用单一药剂对辣椒疫病进行防治。本试验筛选到68%精甲霜·锰锌水分散粒剂400倍稀释液进行灌根对辣椒疫病的防治效果最好，由于辣椒疫霉菌易产生抗药性，建议在辣椒一个生长周期内采用两种或两种以上不同类型的杀菌剂轮换使用防治辣椒疫病，可以有效避免或延缓抗药性的产生[13-16]。
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