高效液相色谱-串联质谱法建立同时测定肌肉组织中4种药物残留的方法及其确认

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　　摘  要：目的  研究与分析高效液相色谱-串联质谱法建立同时测定肌肉组织中4种药物残留的方法及其确认情况。方法  采取高效液相色谱-串联质谱分析方法来同时建立测定肌肉组织中新霉素、多黏菌素B、灰黄霉素、喹乙醇以及其代谢物3-甲基喹啉-2-羧酸，同时采取外标法定量。结果  在质量浓度1.0～200.0g/L范围内，4种药物均表现出良好的线性关系，且R2均超过0.9980。喹乙醇及MQCA的方法检出限为0.5g/kg，灰黄霉素、新霉素以及多黏菌素B的方法检出限为5.0g/kg，4种药物在阴性样品中的加标回收率为82.1%～98.5%。结论  采取高效液相色谱-串联质谱法来进行处理，操作简单便捷，对结果干扰性较小，可以加以广泛应用。
　　关键词：高效液相色谱-串联质谱法  肌肉组织  药物残留
　　中图分类号：X824   文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2020）01（c）-0230-02
　　随着药物的滥用，在动物肌肉组织中会残留很多药物，目前已经有部分报道了灰黄霉素、喹乙醇、黏菌素以及新霉素等药物的检测方法，很多法律法规也对各类药物的检测方法进行了规定[1]。该文对高效液相色谱-串联质谱法建立同时测定肌肉组织中4种药物残留的方法及其确认情况进行研究与分析，现报道如下。
　　1. 材料与方法
　　1.1 材料和试剂
　　试验样品选取购买自市场的8份猪肉，4份兔肉以及8份鸡肉。试剂选取德国Dr.Ehrenstorfe公司生产的纯度>99.0%的MQCA、纯度>99.0%的喹乙醇、纯度>84.0%的硫酸多黏菌素B、纯度>98.0%的灰黄霉素、纯度>90.0%的硫酸新霉素标准品。德国Merck公司生产的乙腈以及甲醇。此次试验均为超纯水，同时该实验使用甲酸为上海安谱实验科技股份有限公司生产，分析纯为广州化学试剂厂生产。
　　1.2 仪器与设备
　　德国CNW公司生产的200mg、6mL HLB固相萃取小柱，德国IKA公司生产的T18高速均质机以及MS3 Basic漩涡振荡器，美国Agilent公司生产的6490串联三重四极杆质谱仪以及1260超高效液相色谱仪，昆山市超声仪器有限公司生产的250W KQ-250DV超声波清洗仪，美国Millipore公司生产的Milli-Q纯水仪，KDC-1044离心机采用由北京中科佳仪科技有限公司生产的仪器。
　　1.3 方法
　　1.3.1 配制标准溶液
　　准确称取10.0mg5种标准品，放置于100mL的棕色容量瓶中，溶解标准品采用50∶50，V/V10mL乙腈-1%甲酸水溶液，采用乙腈进行定容处理，将5种单标储备液分别吸取1.0mL，随后定容至100mL，随后得到混合标准溶液。在-18℃条件下保存标准溶液。
　　1.3.2 样品处理
　　（1）提取。
　　首先切碎肌肉组织，随后将其打碎，混合均匀，将均质后的5.00g样品放置在塑料离心管（50mL）内，向其内加入提取溶剂10mL，随后进行涡旋，涡旋时间为1min，在超声提取10min，离心速度为4000r/min，离心时间为3min，向25mL比色管中加入上清液，随后进行重复提取，合并2次对上清液进行提取，使用提取溶剂进行定容，需要定容至25.0mL，随后进行摇匀，待净化[2-3]。
　　（2）净化。
　　预先将HLB固相萃取柱进行活化，活化采取超纯水10mL，甲醇5mL，待完全流出液体后，对固相萃取柱采用5mL超纯水淋洗，随后进行减压抽干处理，目标化合物采用10mL净化洗脱液进行洗脱，洗脱完毕后将其放置于15mL离心管内，将洗脱液用氮气在50℃条件下浓缩至近干。采用1.0mL初始流动相溶解浓缩物，采取0.22m滤膜来进行过滤处理，测定采用HPLC-MS/MS[4-5]。50℃条件下将洗脱液用氮气浓缩至近干。浓缩物采用1.0mL初始流动相溶解，过滤采取0.22m滤膜，最后采用HPLC-MS/MS进行测定[4-5]。
　　2  结果
　　2.1 樣品提取和净化条件的选择
　　很多脂溶性的内源性物质存在于动物肌肉组织内，在检测过程中这些物质会对化合物的相应产生影响，因此将干扰物质采取合适的净化方式和提取溶剂去除十分必要[6]。
　　2.1.1 选择提取溶剂
　　极性较大的药物包括新霉素、多黏菌素B和喹乙醇，可以使用极性溶剂进行提取，而极性较小的药物包括MQCA和灰黄霉素，可以使用有机溶剂进行提取，在酸性条件下多黏菌素B和新霉素具有较高的提取效率。此次实验结果显示，喹乙醇、MQCA以及灰黄霉素可以通过单一有机溶剂体系来进行提取，但是提取新霉素以及多黏菌素的效果较差，使用单一的5%甲酸水溶液来提取灰黄霉素几乎没有提取效果。
　　2.1.2 净化洗脱液的选择
　　利用固相萃取小柱净化提取液，可以有效地去除杂质，同时将基质的干扰减少。此次实验结果显示，采用体积分数为20%和50%的乙腈来洗脱杂质，具有较佳的去除效果，但是仍有30%和45%未被洗脱的灰黄霉素残留，洗脱采用纯乙腈洗脱液后，会具有较多的杂质。而采取5%甲酸水-80%乙腈来进行洗脱时，具有较少的杂质，而药物的回收率均超过80%，因此，最佳的洗脱液为10mL 5%甲酸水-80%乙腈。
　　2.2 线性方程和检出限
　　在质量浓度1.0～200.0g/L范围内，4种药物均表现出良好的线性关系，且R2均超过0.9980。喹乙醇及MQCA的方法检出限为0.5g/kg，灰黄霉素、新霉素以及多黏菌素B的方法检出限为5.0g/kg（见表1）。
　　2.3 回收率
　　4种药物在阴性样品中的加标回收率为82.1%～98.5%。
　　3  结语
　　采取高效液相色谱-串联质谱法来进行处理，操作简单便捷，对结果干扰性较小，可以加以广泛应用。
　　参考文献
　　[1] 宁霄，金绍明，高文超，等.QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中氟虫腈及其代谢物残留[J].分析化学，2018，46（8）：1297-1305.
　　[2] 周广运，王桂姬，任皓威，等.超高效液相色谱-串联质谱法鉴定猪肉的特异性肽生物标志物[J].分析化学，2017，45（2）：205-210.
　　[3] 李文廷，瑞雨，师真，等.桑椹中11种真菌毒素的检测分析[J].环境化学，2018，37（1）：185-187.
　　[4] 周理，邹宇聪，张佩，等.急性非特异性腰痛的腰肌横截面积、脂肪浸润与不对称性及其临床意义[J].中国疼痛医学杂志，2017，23（2）：148-151.
　　[5] 吴红然，陈雪晓，宋学琴，等.肯尼迪病一例患者的临床表现、肌肉病理、基因检测及其家系遗传学分析[J].脑与神经疾病杂志，2017，25（2）：107-110.
　　[6] 周艳芬，王芳焕，王泽岚，等.串联双柱固相萃取-高效液相色谱-电喷雾多级质谱法测定盐酸二甲双胍制剂中的盐酸二甲双胍及残留物三聚氰胺和双氰胺[J].色谱，2018，36（2）：159-166.
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