超高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中氟喹诺酮类药物

来源:用户上传      作者:

　　【摘要】 采用超高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中氟喹诺酮类药物。样品以甲酸水和乙腈作为提取溶剂，经超高效液相色谱-串联质谱分离检测。为消除不同化妆品基质带来的差异，采用基质标准曲线进行定量。13种氟喹诺酮的线性范围均在1～50 μg·g-1之间，检出限为0.05 μg·g-1。对空白样品进行加标回收试验，回收率在84.3%～111.6%之间，测定值的相对标准偏差（n=6）在0.5%～6.5%之间。
　　【关键词】 超高效液相色谱-串联质谱法;氟喹诺酮;化妆品
　　【DOI编码】 10.3969/j.issn.1674-4977.2019.04.003
　　Abstract： UPLC-MS/MS was used for the determination of fluoroquinolones in cosmetics. The sample was extracted with formic acid solution and acetonitrile. The fluoroquinolones were detected by UPLC-MS/MS and quantified by matrix calibration curves. The linear ranges of 13 kinds of fluoroquinolones were within 1～50 μg·g-1，the detection limit was 0.3 μg·g-1. Recovery rates measured by standard addition method were in the range of 84.3%～111.6% with RSD （n=6） in range of 0.5%～6.5%.
　　Key words：  UPLC-MS/MS;fluoroquinolones;cosmetic
　　氟喹诺酮类药物是喹诺酮药物发展到第三代的产物，是人工合成抗菌药，具有广谱性杀菌作用，其组织渗透能力强，因此广泛应用于细菌感染性疾病的临床治疗中[1-3]。一些不法商家可能故意在化妆品中添加该类物质，以求达到宣称的祛痘或除螨效果，进而牟取暴利。在化妆品中添加氟喹诺酮类物质可能会刺激皮肤，引起皮肤过敏或皮炎等诸多的不良反应。
　　目前，针对化妆品中氟喹诺酮类物质的检测报导较少，主要是采用高效液相色谱法[4-5]，但液相色谱-串联质谱法已经广泛应用于食品等[6-15]各种领域，成为氟喹诺酮类物质检测的主要方法。超高效液相色谱法具有分析时间短和高分离度的特点，三重四级杆质谱具有高灵敏度的优势，两种方法联用可以实现对复杂样品的痕量定量和确认。
　　化妆品基质复杂、提取难度大，在分析中往往受到高背景的干擾而难于定量，本研究通过尽量简单的前处理方法，采用液体、半固体和固体三种不同的基质分别进行验证，从而满足实际工作过程中大批量不同种类样品的检测要求。
　　1 试验部分
　　1.1 仪器与试剂
　　1）Waters XEVO TQ型三重四级杆超高效液相色谱-串联质谱仪;BECKMAN Avanti J-E型离心机;MILLI-Q Avantage A10型纯水机;METTLE TOLEDO XS105型电子天平;Sartorius BT224S型电子天平;Speader 2H-2型涡旋混合器;AS3120A型超声波清洗仪。
　　2）13种氟喹诺酮类对照品纯度不低于90%。
　　3）混合标准储备溶液1 mg/mL，精密称取13种氟喹诺酮类对照品各10.0 mg置入同一10 mL量瓶中，少量甲酸溶解，用乙腈定容。
　　4）系列标准工作溶液（μg/mL）：10，25，50，100，250，500，用乙腈稀释混合标准储备溶液。
　　5）微孔滤膜为0.22 μm有机相滤膜。
　　6）乙腈、甲醇、甲酸为色谱纯，试验用水为超纯水。
　　1.2 仪器工作条件
　　1）色谱条件
　　Waters BEH C18色谱柱（2.1×100 mm，1.7 μm），柱温35 ℃;进样量为10 μL。流动相：A为0.1%甲酸水，B为甲醇-乙腈混合溶液（1+1），流速0.4 mL·min-1，梯度洗脱程序见表1。
　　2）质谱条件
　　电喷雾离子源正离子（ESI+）多反应监测（MRM）模式;毛细管电压：0.5 kV;脱溶剂气温度：650 ℃;脱溶剂气流速：850 L/Hr;锥孔气流速：50 L/Hr;碰撞气流速：0.15 mL/min;定量、定性离子以及参数见表2。
　　1.3 试验方法
　　称取样品0.200 g，置10 mL比色管中，加入2%甲酸水5 mL，涡旋10 s后，加入乙腈3 mL，涡旋30 s，超声提取30 min，加入乙腈定容至刻度，涡旋1 min，5000 rpm离心5 min，取上清液经0.22 μm微孔滤膜过滤后，按仪器工作条件进行测定。
　　2 结果与讨论
　　2.1 前处理及检测条件的选择
　　2.1.1 提取方法
　　根据文献报道，大部分的氟喹诺酮类化合物在酸性水溶液中具有良好的溶解性，本方法研究时采用2%甲酸水作为提取溶液，但仅用甲酸水溶液进行提取样品易产生乳化现象且不易于过滤，因此本方法采用乙腈作为定容溶液，这样既有利于目标化合物的提取又可以保证定容的准确性。
　　2.1.2 流动相
　　由于氟喹诺酮类药物在酸性溶液中溶解性更好，并且加入适量的酸更有助于待测物质离子化，因此流动相中水相采用0.1%甲酸水，而甲醇-乙腈混合溶液（1+1）作为有机相明显好于甲醇和乙腈，所以实验最终选择0.1%甲酸水和甲醇-乙腈混合溶液（1+1）体系作为流动相，采用梯度洗脱在尽量短的分析时间对13种化合物进行分离。 　　2.1.3 质谱条件
　　将氟喹诺酮类药物标准溶液注入离子源，在正离子模式下对13种物质分别进行毛细管电压、锥孔电压、碰撞气流速、碰撞能量等质谱条件的优化，使母离子与子离子的信号强度的响应值达到最大，并挑选最强的两个子离子作为定量离子和定性离子，最优的质谱条件见表2。13种氟喹诺酮混合标准溶液的色谱图见图1。
　　由图1可以看出13种物质在4.16～9.16 min内依次出峰且峰型良好。
　　2.2 方法特异性试验
　　分别取固体、半固体、液体三种不同化妆品基质样品，按试验方法前处理后进行质谱检测，结果表明三种基质中均未含有氟喹诺酮类物质，以这三种基质进行加标回收试验无干扰。
　　2.3 工作曲线及检出限
　　称取三种空白基质样品0.200 g，置10 mL比色管中，分别加入系列标准工作溶液50 μL，按照试验方法步骤进行前处理，得到质量浓度（μg/g）为1，2.5，5，10，25，50的标准溶液进行分析，以定量离子色谱图中各组分的峰面积定量，加权系数为1/X，绘制标准曲线。结果表明待测物1～50 μg·g-1范围内呈线性关系，线性回归方程和相关系数见表3。该方法检出限为0.05 μg·g-1。
　　2.4 回收试验
　　分别在阴性的固体、半固体、液体三种不同化妆品基质中添加2.5、10、25 μg·g-1三个浓度水平的混合标准溶液，按试验方法处理，分别平行测定6次，计算13种氟喹诺酮的平均加标回收率和相对标准偏差（RSD）结果见表4。
　　2.5 样品分析
　　按试验方法对80批市售宣称具有祛痘功能的化妆水、乳液、润肤膏霜等不同类型的化妆品样品进行检测，其中2批次检出氧氟沙星。
　　3 结语
　　本工作建立了超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱法测定喹诺酮类物质的方法，针对不同化妆品基质进行了考察，方法前处理过程简单，分析时间短，定量准确，可以满足大批量样品快速检测的要求，可为化妆品市场监管提供参考依据。
　　【参考文献】
　　[1] 薛磊.氟喹诺酮类药物药理作用及不良反应浅述[J].临床医药文献电子杂志，2018（27）：192-193.
　　[2] 陈木娟.临床氟喹诺酮类药的药理分析[J].中国现代药物应用，2016（8）：271-272.
　　[3] 焦文君.氟喹诺酮类药物的药理特点及研究进展[J].中国实用医药，2015（32）：280-281.
　　[4] 徐万帮，张莉，刘亚雄，等.一步提取-HPLC检测化妆品中氟喹诺酮类抗生素研究[J].广州化工，2012（7）：128-129+135.
　　[5] 郑艳明，郭新东，冼燕萍，等.化妆品中7种氟喹诺酮类药物的反相高效液相色谱法测定[J].分析测试学报，2009（2）：235-238.
　　[6] Louise J，Targa M M，Bazzan A J，et al.An LC–ESI–MS/MS method for residues of fluoroquinolones，sulfonamides，tetracyclines and trimethoprim in feedingstuffs：validation and surveillance[J].Food Additives & Contaminants：Part A，2018：1-15.
　　[7] Ziarrusta H，Val N，Dominguez H，et al.Determination of fluoroquinolones in fish tissues，biological fluids，and environmental waters by liquid chromatography tandem mass spectrometry[J].Analytical & Bioanalytical Chemistry，2017（27）：6359-6370.
　　[8] Fabiano Barreto，Cristina B.D.Ribeiro，Rodrigo Barcellos Hoff，et al.Development and validation of a high-throughput method for determination of nine fluoroquinolones residues in muscle of different animal species by liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry with low temperature clean up [J].Journal of Chromatography ，2017（27）：131-139.
　　[9] 张晶，王桂琴.液相色谱-串联质谱法测定鸡蛋中7种氟喹诺酮类药物的残留量[J].动物医学进展，2018（8）：64-70.
　　[10] 罗静，郑良清，尚吟竹，等.基质固相分散-液相色谱-串联质谱联用技术检測鸡蛋中14种氟喹诺酮类药物残留[J].分析科学学报，2018（5）：654-658.
　　[11] 许燕平.超高效液相色谱-串联质谱检测鸡肉中氟喹诺酮类药物残留[J].食品安全导刊，2018（9）：92.
　　[12] 周鑫，张建雄，李继丰，等.超高效液相色谱串联质谱法测定饲料中7种氟喹诺酮类药物[J].养殖与饲料，2018（1）：4-6.
　　[13] 陈磊，吴赟琦，赵志勇，等.QuEChERS/超高效液相色谱-串联质谱法快速测定土壤中19种氟喹诺酮类抗生素残留[J].分析测试学报，2019（2）：194-200.
　　[14] 杨路平，焦燕妮，邵立君，等.超高效液相色谱-质谱法测定饮用水中14种氟喹诺酮类抗生素的残留量[J].理化检验（化学分册），2016（4）：397-401.
　　[15] 钱卓真，梁焱，王丽娟，等.分散固相萃取-高效液相色谱串联质谱法同时测定沉积物中氟喹诺酮类药物残留[J].渔业研究，2018（4）：286-294.
转载注明来源:https://www.xzbu.com/1/view-15115265.htm