超高效液相色谱检测农作物中农药残留
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摘要：社会的进一步发展，促使现阶段我国食品行业发展速度不断加快，此种背景下，如何保证食品安全质量，成为居民十分关注的话题之一。基于此，本文立足于食品农药残留检测角度，分析了加速溶劑萃取以及超高效液相色谱检测具体内容，以常见菌类食品为例研究了具体检测方法。
关键词：加速溶剂萃取;超高效液相色谱;食用菌
中图分类号：S-3
文献标识码：A
DOI：10.19754/j.nyyjs.20191115010
引言
近几年，随着我国经济水平的不断提升，人们对“吃”进行了重新定义，越来越多的人要求在吃得饱的前提下吃得少、吃得好，这就需要考虑到食品安全问题。加速溶剂萃取是现阶段应用较为广泛的一种绿色分离技术，不仅操作较为简便，而且检测环节绿色化。因此，对加速溶剂萃取—超高效液相色谱检测农作物中农药残留相关内容研究有着鲜明现实意义。
1 检测农药残留
蘑菇是人们生活中较为常见的一种食品，因为其自身具有提高免疫力、抗癌、降低血糖与胆固醇等功效，所以深受人们喜爱。随着经济水平的提升，人们对于各类食用菌需求量的增加，导致一些不法商贩应用大量农药提升菌类存储时间，对居民健康造成影响。常见的农药残留物可以分为以下几种：甲基硫菌灵，主要应用在菌类种植阶段;多菌灵，其实是甲基硫菌灵的一种代谢产物，存在于菌类种植的各个阶段;环丙氨嗪，属于三嗪类农药的1种，应用目的是控制作物正常生长;三聚氰胺，也可以称之为是环丙氨嗪的一种代谢产物，只不过在代谢进行过程中需要借助植物体内脱烷基才能形成。
随着人们对食品安全的重视程度提升，以及农药用量的增加，我国对上述各类农药残留量进行了明确规定。例如：甲基硫菌灵的残留量不能超过3ng/kg等。但是这些规定都是针对各类常见蔬菜，对于食用菌并没有参考价值。
2 检测技术分析
随着科学技术的不断进步，可以应用到食品农药残留检测中的方法越来越多，但是从各类检测方法的应用情况而言，仍具有一定局限性。例如：LC–MS/MS系统在应用过程中表现出了极高的灵敏度以及应用价值，但是其应用范围较小，造成此种现象的原因在于检测价格昂贵。除此之外，传统的试样处理方法在实际应用过程中无法做到残留农药的快速分离，这对于检测精度的影响较为明显。鉴于此，在现阶段的食品检测过程中，需要研究并且开发一种适应性较强、无污染且应用简便、成本低的检测方法[1]。本文提出，应用ASE进行样品萃取，然后应用SPE进行净化，最后应用UPLC-DAD进行分析检测。此种检测方法不仅可以提升检测效率，还具有较高的灵敏度。
3 检测内容论述
3.1 仪器与试剂
仪器的选择中，超高效液相色谱仪器是必备设备之一，除此之外还需要配备溶剂萃取仪、超声波清洗机、元素型1820A超纯水机以及固相萃取装置等设备。
必备试剂有各类农药残留物的对照品，主要分为甲基硫菌灵、多菌灵、三聚氰胺以及环丙氨嗪。以上4种对照液溶度要求为：>97.7%、>97.2%、>99.5%、>99.5%。除此之外，还需要配备甲醇、超纯水、盐酸以及丙酮等。
检测应用的流动相A为甲醇溶液;流动相B为融合溶液，由乙酸铵+水+三氟乙酸调节而成，最终pH控制在3.8。
萃取溶剂主要是由丙酮（100mL）和甲醇，最终需要定容在500mL，pH控制在3.0。
标准储备液：0.01g甲基硫菌灵以及多菌灵溶剂应用甲醇，最终定容到100mL;0.02g环丙氨嗪以及三聚氰胺同样应用甲醇进行定容，定容规格与上述相同。工作液：结合实际需求进行工作液配置，配置用试剂为甲醇和水。
3.2 样品萃取与净化
本次实验中，所有应用到的食用菌样品全部都是常见菌类品种，从超市随机采购。采购之后，将食用菌进行匀浆处理，并且进行避光存储，存储温度为4℃。
加速溶剂萃取：在对应仪器萃取池底部设置1层直径为16.2mm的垫片，在其中放置0.5g硅藻土，目的在于保证收集瓶干净整洁，不会有多余杂质进入。样品称取量为10g，将其均匀地混合到萃取池中。萃取溶剂为丙酮、甲醇、盐酸混合液，保证萃取温度为70℃恒定，压强为10.3MPa恒定。进行初期的静态萃取，时间为5min，一共需要循环2次。之后以10000r/min的速度进行离心，离心时间为10min，可以得到检测应用的上清液，将上清液转移到梨形瓶进行旋转蒸发处理，最后应用3∶7比例的甲醇水溶液进行定容，定容规格为3mL。
固相萃取净化：将固相萃取小柱应用甲醇溶液进行活化处理，应用清水进行平衡，加入待测样品。观察待测样品流动情况，在其完全通过固相萃取小柱之后，应用盐酸与甲醇进行清理，上述过程中所有流出液体需要全部丢弃。洗脱过程中应用的溶剂为氨水甲醇溶液，此过程需要对洗脱液进行收集，并且应用氮气将洗脱液吹干。应用3∶7的甲醇水溶液定容，待液相检测（以上所有溶液均为3mL）。
3.3 超高效液相分析
应用色谱柱进行检测，要求色谱柱的柱温度在40℃。在检测之前进行梯度洗脱，该过程中应用到的溶剂为乙酸铵+水+三氟乙酸和甲醇。确定4种残留农药最大检测波长分别为甲基硫菌灵264nm、多菌灵280nm、环丙氨嗪240nm、三聚氰胺237nm。保证外部条件最佳，对残留农药进行峰值、峰面积、工作曲线测定。
4 结果分析
4.1 检测波长分析
规定色谱条件一致，检测4类残留农药标准液，应用仪器在190～400mm波长范围内进行测试。检测结果表明，TM、CAR、CYR、MEL分别在280nm、264nm、240nm、237nm时存在有特征吸收峰，比对结果为四者在237nm处均有响应，并且干扰并不大;最终确定，CYR、MEL的最佳波长参数为237nm，这一检测结果与其它文献参数相同。 4.2 线性和检出限
应用流动相进行逐级稀释，最终得出甲基硫菌灵、多菌灵、环丙氨嗪、三聚氰胺浓度分别为5～500ng/mL、4～400ng/mL、3.6～360ng/mL、2.4～240ng/mL，并且保证检测条件最佳状态进峰面积测定。而对于检测线性的展示则是通过坐标轴完成，本次采用的坐标轴横纵坐标分别为分析物浓度和峰面积。通过线性检测分析可以发现，以上4种分析物都存在良好的线性关系，按照规定，最终确定上述4种分析物的检出限分别为1.7、1.2、0.72以及1.1[2]。对照相关的GB/T22388以及GC-MS，本文应用的检测方法更加便捷，并且具有良好的检测效果。
4.3 精确度
在精确度的检测过程中，保证检测环境为最佳条件，最终经测试4种分析物的日标准差基本维持在2.3%～4.5%之间，而相对标准差则维持在3.1%～6.3%之间，上述数据证明，本文应用到的检测方法具有良好重现性。
4.4 样品分析
在本次检测过程中，采集的食用菌为常见的香菇、杏鲍菇、双孢菇以及金针菇等，检测时确保萃取、净化、分析等过程没有受到外界环境条件影响，最终检测结果为：在上述食用菌中没有检測到4种分析物，也就是不存在农药残留。其中，香菇的4种分析物检测回收率在83%～99%之间，杏鲍菇在82%～105%之间，双孢菇以及金针菇在83%～98%、85%～97%之间。
4.5 检测结果分析
本文检测过程中所提出的ASE-SPE结合UPLC-DAD方法，在实际应用过程中，成功的检测出采购蘑菇样品中甲基硫菌灵、多菌灵、环丙氨嗓、三聚氰胺农药残留量。从检测应用情况以及具体表现角度而言，此种方法具有很好的立足点，较高的灵敏度，精密度和较低的溶剂消耗，4种分析物能够在ug/kg水平上检测药物的残留[3]。因此，该方法可以用于蘑菇样品中甲基硫菌灵、多菌灵、环丙氨嗦和三聚氰胺的常规检测，并且可以发挥重要作用。
5 结论
作为一种绿色检测技术，加速溶剂萃取方法在现阶段的食品检测中可以发挥重要作用。本文以上内容以超市中常见的菌类食品为例，通过检测证明，该类方法可以精准的确定出菌类食品常见甲基硫菌灵以及多菌灵等农药残留量，并且检测流程较为简单，不会对外界环境造成二次污染，可以进一步完善食品检测工作。
参考文献
[1] 黄武，章晶晶，刘辉，孙良娟，孙艳波，庞晓林.QuEChERS结合在线凝胶渗透色谱-气相色谱-质谱联用法快速检测水产品中农药残留[J].食品安全质量检测学报，2016，7（02）：746-754.
[2]刘培，李伟，武寒梅，谢圆丰.蔬菜农药残留检测中提取溶剂的优化试验[J].现代农村科技，2015（14）：59-60.
[3]赵红霞.超高效液相色谱—三重四极杆串联质谱（UPLC-QqQ-MS/MS）对农作物中农药多残留的检测研究[D].济南：山东大学，2013.
作者简介：
崔晓丽（1980-），女。本科，农艺师。研究方向：农产品质量安全。
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