不同检测方法在无偿献血者乙肝表面抗原弱阳性标本中的应用
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【摘 要】 目的：探讨不同检测方法-胶体金免疫层析方法（GICA）、酶联免疫吸附方法（ELISA）、核酸检测方法（NAT）以及电化学发光免疫检测方法（ECLIA）在乙肝表面抗原（HBsAg）表达为弱阳性的无偿献血者的标本诊断中的临床应用价值。方法：选取2016年1月至2018年12月在本院进行无偿献血的132份血液标本，HBsAg表达均呈弱阳性。采取ECLIA、ELISA、GICA以及NAT给予定量检测。以ECLIA法的检测结果作为标准，比较ELISA法、GICA法以及NAT法的特异度、敏感度。结果：GICA法的特异度以及灵敏度均明显低于ELISA法以及NAT法（P<0.05），ELISA法以及NAT法的特异度以及灵敏度比较接近。结论：ECLIA法、ELISA法、GICA法以及NAT法在HBsAg表达为弱阳性的无偿献血者标本的诊断中各有优缺点，相比较而言，ELISA法检测的特异度、敏感度更高。
【关键词】 HBsAg;ECLIA法;ELISA法;GICA法;NAT法
我国是感染乙肝病毒的高发地区，据病理学统计，2010年全球HBsAg阳性人数大约为2.48亿，其中，中国所占的比例高达45%[1]。乙型肝炎病毒感染是社会上一个比较敏感的问题，感染者在学习、生活和工作中，尤其是一些特殊的岗位以及行业会受到限制。因而，准确诊断是否感染乙型肝炎病毒具有重要的临床意义。本研究主要探讨了ECLIA法、ELISA法、GICA法以及NAT法在HBsAg表达为弱阳性的无偿献血者标本诊断中的应用价值。
1 资料与方法
1.1 标本来源
选取2016年1月至2018年12月在本院进行无偿献血的132份血液标本，标本均未出现脂血、黄疸和溶血现象，而且HBsAg表达均呈弱阳性。
1.2 研究方法
ELISA法：对献血者的标本采用嘉兴凯实生物科技有限公司全自动加样仪Latitude型给予加样，然后利用BIOBASE2000全自动酶免分析仪对后处理进行检测。ECLIA法：把献血者的标本与被氯联吡啶钌所标记的单克隆抗体、被生物素所标记的单克隆抗体以及被酶链亲和素所标记的磁性微粒共同加至反应杯内进行温育，以进一步形成复合物，使电化学发光反应得以启动，促进电化学发光的产生。GICA法：分别在15min以及30min对GICA的结果进行观察，以30min时为报告结果，并且于15min内读取测定结果，超过半小时即可判定为无效的结果。NAT法：采取转录介导扩增方法实施检测，采用苏州江东精密仪器有限公司生产的MA99-1全自动血液病毒核酸检测仪开展NAT检测。
1.3 观察指标
以ECLIA法的检测结果作为标准，比较ELISA法、GICA法以及NAT法的特异度、敏感度、阴性预测值和阳性预测值。
1.4 统计学分析
采用SPSS 19.0软件进行统计学分析，计量资料以（±s）表示，组间对比用t检验，组间率的比较用χ2检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
以ECLIA法的检测结果作为标准，ELISA法检查的特异度、灵敏度分别为89.29%（50/56）、89.47%（68/76）;NAT法检查的特异度、灵敏度分别为85.71%（48/56）、88.16%（67/76）;GICA法检查的特异度、灵敏度分别为76.79%（43/56）、69.74%（53/76）;GICA法的特异度以及灵敏度均明显低于ELISA法以及NAT法（P<0.05），ELISA法以及NAT法的特异度以及灵敏度比较接近。见表1、表2、表3。
3 讨论
近年来，随着输血技术和检验技术的迅速发展，输血的安全性得到大幅度的提高，使输血传播乙型肝炎病毒的风险性得到大大的降低，但是ELISA法检测HBsAg会受到“窗口期”较长的限制，极易出现“窗口期”感染的问题。而且乙型肝炎病毒感染存在病毒滴度低、免疫沉默性感染和病毒变异等多种因素，依然很难完全杜绝输血感染，使得临床输血仍然具有一定程度的风险[2-3]。随着临床上各种先进的免疫标记技术的广泛应用，发现有一部分的HBsAg表达为较低的浓度水平，因为检测试剂的特异度以及敏感度等指标具有差异，造成各种不同检测手段的结果各不相同，导致一定的漏检以及误诊的发生，甚至会导致医疗纠纷的发生[4]。目前临床上应用最为广泛的检测HBsAg的手段为ELISA法，由于ELISA法的特异度较高、成本低廉，而且灵敏度较高，特别适用于检测大批量的血液标本，但是同时ELISA法会受到多种因素的影响，具有极高的诊断假阳性率，使其应用受到了一定的限制[5]。GICA法在检测HBsAg时，由于具有能单份操作、所用时间较短以及简单方便等优点，有助于满足急诊检测HBsAg的需要，例如为急诊、门诊患者以及无偿献血者在现场采血前进行检验提供了更为便利的条件。
本研究结果发现，GICA法的特异度以及灵敏度均明显低于ELISA法以及NAT法（P<0.05），ELISA法以及NAT法的特异度以及灵敏度比较接近，对HBsAg弱阳性标本进行检测时会产生较高的假阳性率以及假阴性率，因此建议仅作为初筛方法开展检测。ELISA法以及NAT法的特异度以及灵敏度比较接近，由于ELISA法以及NAT法的操作差异主要在于检测对象的差异，ELISA法所检测的对象是抗体或者抗原，而NAT法所检测的对象为病毒核酸，而且ELISA法以及NAT法各有优点和缺点，因而对ELISA法以及NAT法联合使用，进行双检，能明显提高特异度以及灵敏度。
综上所述，ECLIA法、ELISA法、GICA法以及NAT法在HBsAg表达为弱阳性的无偿献血者的標本的诊断中各有优缺点，相比较而言，ELISA法检测的特异度、敏感度更高。
参考文献
[1] 安哲，李思鹏，张妮，等.乙肝病毒e抗体检测在乙肝病毒既往感染者中的临床价值[J].现代预防医学，2015，42（10）：1839-1840.
[2] 赵晓芬.乙肝病毒血清学检验采用化学发光法与酶联免疫法的效果对比[J].临床医药文献电子杂志，2016，03（04）：605.
[3] 陈雪花，雷艳君.2003～2014年安康某高校新生乙肝病毒感染及免疫接种情况调查[J].现代检验医学杂志，2017，32（32）：149.
[4] 吴洪秋，张永良，黄坚尧，等.乙肝血清学标志物定量和HBV DNA定量联合检测在乙肝病毒感染诊断中的应用[J].胃肠病学和肝病学杂志，2016，25（04）：415-418.
[5] 程育春.化学发光免疫分析技术和酶联免疫吸附试验在乙肝病毒血清学检验中的应用[J].中国实用医药，2016，11（15）：53-55.
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