浅谈用酶联免疫法与胶体金法检测乙肝表面抗原的优缺点
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【摘要】 目的 分析在慢性乙型肝炎（乙肝）表面抗原（HBsAg）检测中应用酶联免疫法与胶体金法的优缺点。方法 选取4500份血液标本进行研究， 分别采用酶联免疫法与胶体金法来检测标本的HBsAg， 对比两种检测方法的结果及优缺点。结果 4500份血液标本中， 酶联免疫法检测出305例阳性标本， 阳性率为6.78%（305/4500）;胶体金法检测出298例阳性标本， 阳性率为6.62%（298/4500）。其中， 两种检测结果同时为阳性的血液标本有295份， 酶联免疫法检测结果呈阳性而胶体金法检测结果为阴性的有10例， 胶体金法检测结果呈阳性而酶联免疫法检测结果为阴性的有3例， 两种检测结果同时为阴性的标本有4192份。采用电化学发光法对其中检测结果不一致的13例血液标本进行复查， 发现复查的结果与酶联免疫法检测结果相同， 与胶体金法比较， 酶联免疫法检测HBsAg的灵敏度更高， 差异有统计学意义（P<0.05）。结论 酶联免疫检测法有着较高的灵敏度， 但操作步骤繁琐， 比较费时， 胶体金法操作便捷、迅速， 但检测灵敏度偏低。血站在筛查献血者的HBsAg时， 可先采用胶体金法进行快速筛查， 有效缩短初筛的时间， 提高检查效率， 在大规模乙肝病毒携带筛检中可采取此种方法， 对于经胶体金法检测结果为阳性的少数患者可采用酶联免疫法展开复查， 从而将检测准确率有效提升。
【关键词】 慢性乙型肝炎表面抗原;酶联免疫法;胶体金法
DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.09.016
作为乙肝病毒外壳蛋白的一项主要成分， HBsAg也是临床开展乙肝血清标志物检查的重要指标之一[1]。现阶段， 临床在开展HBsAg检测工作时， 通常采用酶联免疫法与胶体金法， 但关于二者的优缺点及适用范围还存在一定的争议[2]。
因此， 本文以本站于2015年2月～2018年6月采集的4500份血液标本为例， 分别采用酶联免疫法与胶体金法检测标本的HBsAg， 对两种检测方法的结果及优缺点展开对比与评价， 现将结果报告如下。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 选取本站2015年2月～2018年6月采集的4500份血液標本为研究对象， 按卫生部门的相关要求， 对所有标本展开乙肝病毒携带检测， 尽可能降低漏检率及误检率。采用真空管采集所有血液标本， 并在采集当日完成检测工作。
1. 2 方法
1. 2. 1 仪器及试剂 采用型号为TECAN Hydroflex的洗板机、TECAN Surise的酶标仪各一套， 均由上海科华生物公司生产， 在使用之前均经过厂方的严格调试及校准。试剂则包括由上海科华生物公司生产、用于酶联免疫法检测的HBsAg诊断试剂盒， 由杭州艾康生物技术有限公司生产、用于胶体金法检测的HBsAg诊断试剂盒及购自卫健委临检中心的质控血清， 所有试剂均在有限期内。
1. 2. 2 检测方法 ①酶联免疫法：采用加样器吸取20 μl稀释液至微孔中至微孔中， 接着加入血清100 μl， 放置37℃左右的环境中温育1 h， 然后将酶结合物加入至微孔内， 继续温育0.5 h， 然后洗涤， 加入底物显色， 并将终止液加入其中。最后采用酶标仪比色， 将吸光度值读取出来， 并展开计算。②胶体金法：采用加样器吸取60 μl的新鲜血清， 向试纸条加样端缓慢滴入， 让血清自动通过滤膜朝检测端进行移动。放置20℃左右的环境中10 min， 最后观察检测结果。
1. 3 判定标准 酶联免疫法：样本吸光度值比临界值（S/CO）≥1时表明结果呈阳性;<1时， 表明结果为阴性。胶体金法：试纸条检测线与对照线两处同时出现了呈紫红色的两条免疫复合物线条， 表明结果呈阳性;如果只有对照线出出现一条免疫复合物线条， 表明结果呈阴性。
1. 4 统计学方法 采用SPSS22.0统计学软件进行数据统计分析。计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
4500份血液标本中， 酶联免疫法检测出305例阳性标本， 阳性率为6.78%（305/4500）;胶体金法检测出298例阳性标本， 阳性率为6.62%（298/4500）。其中， 两种检测结果同时为阳性的血液标本有295份， 酶联免疫法检测结果呈阳性而胶体金法检测结果为阴性的有10例， 胶体金法检测结果呈阳性而酶联免疫法检测结果为阴性的有3例， 两种检测结果同时为阴性的标本有4192份。采用电化学发光法对其中检测结果不一致的13例血液标本进行复查， 发现复查的结果与酶联免疫法检测结果相同， 酶联免疫法检测HBsAg的灵敏度100%（10/10）高于胶体金法的0（0/10）， 差异有统计学意义（P<0.05）。
3 讨论
现阶段， HBsAg为血站筛查献血者时一项必检指标， 常用检测方法有酶联免疫法与胶体金法。对这两种检测方法的原理展开分析， 发现其存在明显差异[3]。具体来说， 酶联免疫法采用HBsAg诊断试剂盒， 应用到了双抗体夹心酶联免疫吸附的原理， 即让抗原或抗体与某种固相载体相结合， 并保持免疫活性， 或让抗原或抗体与某种酶链接为抗原或酶标抗体， 同时保留免疫活性或酶活性。作为一种利用酶的放大及高效催化作用的标记免疫技术， 具有检测灵敏度高、结果准确、特异性强、重复性好等优势， 对HBsAg可展开定量或半定量检测;但此种检测方法存在操作步骤繁琐、比较费时的缺点[4]。胶体金法采用HBsAg诊断试剂盒， 应用到了胶体金免疫层析技术， 其中胶体金指的是氯金酸与还原剂等物质发生一定的反应， 聚合成相应大小的颗粒， 在静电的影响下， 此种颗粒会形成具有稳定性的胶体状态。胶体金在弱碱状况下会带负电荷， 与蛋白质分子正电荷基团发生静电结合， 因而不会影响到蛋白质的生物特性， 具有操作简便迅速， 试剂保存便利， 可将职业暴露事件发生率大大降低， 有效减少医务人员的工作量及面临的风险等优点， 但存在检测灵敏度偏低等不足之处[5]。
本次研究中， 以本站采集的4500份血液标本为例， 结果显示， 4500份血液标本中， 酶联免疫法检测出305例阳性标本， 阳性率为6.78%（305/4500）;胶体金法检测出298例阳性标本， 阳性率为6.62%（298/4500）。其中， 两种检测结果同时为阳性的血液标本有295份， 酶联免疫法检测结果呈阳性而胶体金法检测结果为阴性的有10例， 胶体金法检测结果呈阳性而酶联免疫法检测结果为阴性的有3例， 两种检测结果同时为阴性的标本有4192份。采用电化学发光法对其中检测结果不一致的13例血液标本进行复查， 发现复查的结果与酶联免疫法检测结果相同。与胶体金法比较， 酶联免疫法检测HBsAg的灵敏度更高， 差异有统计学意义（P<0.05）。
综上所述， 在HBsAg检测中， 酶联免疫检测法与胶体金法均为两种较可靠的检测方法， 前者有着比较高的灵敏度， 但操作步骤繁琐、比较费时， 后者操作便捷、迅速， 但检测灵敏度偏低， 因此在检测患者的HBsAg时可先采用胶体金法进行快速筛查， 有效缩短初筛的时间， 以提高检查效率， 在献血者献血前血液筛查时可采取此种方法;对于经胶体金法检测结果为阳性的少数患者可采用酶联免疫法展开复查， 从而将检测准确率有效提升。
参考文献
[1] 邬剑， 李慧玲. ELISA法和胶体金试纸条法在乙肝表面抗原检测中的应用研究. 医学信息， 2018， 31（9）：155-156.
[2] 李小云. ELISA法和胶体金免疫层析法检测乙肝表面抗原结果分析. 医学美学美容， 2015， 18（3）：225.
[3] 马连学， 李艳菊， 魏巍. 化学发光微粒免疫法和酶联免疫吸附法检测乙肝表面抗原的结果对比分析. 中国实用医药， 2014， 9（9）：89-90.
[4] 李玉亮. 浅谈应用胶体金法与酶联免疫法检测乙肝表面抗原的优缺点. 当代医药论丛， 2014， 12（16）：45-46.
[5] 汤晓琳， 方芳. 胶体金免疫层析法和ELISA法检测乙肝表面抗原的对比. 沈阳医学院学报， 2014， 16（3）：160-161.
[收稿日期：2018-09-20]
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