沙门氏菌检验及分析
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摘 要：沙门氏菌的检验工作比较复杂，对检验员的要求比较高，通过参加能力验证可以提高检验能力，发现检验中的关键点控制。文章通过沙门氏菌检验能力验证，分析沙门氏菌检验过程中存在的问题，并分析原因，提高本检验室检验能力。
关键词：沙门氏菌;检验;分析
中图分类号：R155.5 文献标志码：A 文章编号：2095-2945（2020）07-0079-02
Abstract： The inspection work of salmonella is more complex， and the requirements for inspectors are relatively high. By participating in the ability verification， we can improve the inspection ability and find the control of the key points in the inspection. Through the verification of the testing ability of salmonella， this paper analyzes the problems existing in the testing process of salmonella， and analyzes the reasons， so as to improve the testing ability of this laboratory.
Keywords： salmonella; examination; analysis
沙门氏菌属是肠杆菌科中的一个重要菌属，对人、动物或两者引起多种类型的疾病， 与人类健康和畜牧业及国际贸易的发展关系密切。沙门氏菌病是我国和世界各地的常见病和多发病。目前全球已知的沙门氏菌属，有的专对人类致病，有的只对动物致病，也有对人和动物都致病的。并且能够在短时间内大量繁殖。伤寒、急性肠胃炎、菌血症和败血症等疾病皆是由沙门氏菌感染所引起的。严重致死病例多见于老人、幼童及免疫系统有缺陷的易感人群[1]。在世界各地的食物中毒中，沙门氏菌的食物中毒位居第二[2]。沙门氏菌属菌型繁多，抗原复杂，目前从世界各地检出的沙门氏菌菌型近两千个（包括亚利桑那菌在内），食品安全国家标准《食品安全国家标准 食品中致病菌限量》规定[3]，食品微生物沙门氏菌的限量指标采用采样方案n=5，c=0，m=0/25，M=-，即检验的5个样品沙门氏菌不得检出。在其他食品检验标准中沙门氏菌均不得检出。在沙门氏菌的检验工作中，生化鉴定存在一定的难度，在生化鉴定过程中需要操作者有较好的工作经验。提高微生物检验员的检验技能，提升实验室能力，参加能力验证是比较有效的手段，是识别实验室存在的问题并启动改进措施，提高实验室的检验能力等[4]。食品中沙门氏菌的检验参照国标《食品安全国家标准食品微生物学检验 沙门氏菌检验》[5]。
1 材料与方法
1.1 材料
待测样品为白色粉末，西林瓶包装，由中国检科院提供。
1.2 培养基及试剂
营养琼脂培养基（NA）、缓冲蛋白胨水（BPW）、四硫酸钠煌绿（TTB）增菌液、亚硒酸盐胱氨酸（SC） 增菌液、亚硫酸铋（BS）琼脂、木糖赖氨酸脱氧胆盐 （XLD）琼脂、三糖铁（TSI）琼脂培养基及沙门氏菌属生化试剂鉴定盒，均购自北京陆桥技术有限责任公司。
1.3 仪器设备
灭菌锅（施都凯公司，MJ78A）、生化培养箱（美墨尔特，IPP260），生物安全柜（海尔，HR50-IIA2）。
2 方法
2.1 增菌
能力验证作业指导书稀释样品到无菌BPW中进行前增菌，放置（36±1）℃培养6-18h。为观察沙门氏菌在BPW中的生长情况，样品杂菌生长对检验结果的影响。本次实验设置BPW培养6小时、8小时、10小时、12小时、18小时，这5个是阶段培养物接种进行选择性培养。即吸取1mlBPW培养物到转种10ml的TTB中（42±1）℃培养24h，同时吸取1mlBPW培养物到10mlSC中（36±1）℃培养24h。
2.2 分离
将上述BPW不同生长时段转接的选择性增菌液划线分离于XLD、BS平板。BS 平板（36±1）℃培养48h，HE平板（36±1）℃培养24h。
2.3 鉴定
将在XLD、BS上的可以菌落进行生化鉴定和血清学实验。
3 结果与分析
（1）沙门氏菌增菌实验不同培养时间接种到TTB、SC中的生长情况见表1。
从表1可以看出在BPW中培养6h后转接到SC中，SC培養24h略显浑浊，随着在BPW中前增菌的时间增长，转接到SC中也浑浊明显。而在BPW前增菌6h、8h、10h、12h、16h转接到TTB中培养24h，TTB中均为澄清。
（2）转接TTB、SC培养24h后划线HE、BS平板，结果如表2，表3。
（3）挑取典型菌落划线到营养琼脂上后，接种到三糖铁斜面上，在斜面上的现象是斜面产碱底层产酸，产H2S，产气。制备菌悬液接种到沙门氏菌生化鉴定盒进行生化分析。结果如表4。
革兰氏染色：从营养琼脂上挑取一株菌，进行革兰氏染色，通过染色后镜检为红色，无芽孢。说明我们检验的目标菌为革兰氏阴性菌。
（4）血清分析
在洁净的玻片上滴加一滴生理盐水，将待试培养物混合于生理盐水滴内，使成为均一性的混浊悬液，将玻片轻轻摇动30s～60s，在黑色背景下观察反应，出现凝结，需同时做生理盐水空白对照。
4 讨论
通过生化分析和血清学分析判断为沙门氏菌属。
（1）在进行沙门氏菌的检验中BPW的前增菌，我们选择了培养6h、8h、10h、12h、18h，我们发现BPW培养时间长短对本次实验影响不大。但是BPW提供丰富的营养使目标菌复苏，所以BPW的培养时间不能太短，不然目标菌没有复苏好;也不能时间太长，不然杂菌也会相应增多，增加目标菌的鉴别难度。我们在试验中可以选择培养18h，避免漏检。
（2）在生化分析从营养琼脂纯培养制备菌悬液，麦氏浓度控制在0.5左右，麦氏浓度太低或太高都会造成判断的失误。
（3）前增菌后必须转接到TTB、SC中，TTB澄清的也必须同时接种BS和HE（或XLD、沙门氏菌显色培养基）。
（4）不同培养基选择性强弱不同，一种培养基不可能适合所有的沙门氏菌，所以要同时使用两种以上的培养基，必须用一个 BS，同时再用一个 XLD或 HE或显色培养基，形成互补，提高检出率，以防漏检。BS平板的选择性比较强，最好现用现配，培养时间延长至40-48h，甚至更久。
（5）由于选择性培养基含有抑菌剂，所以生长出的菌苔生化特性不是很好，会影响山梨醇、甘露醇接种前后颜色变化的判断，极易出现似黄非黄，似绿非绿这样模棱两可的结果。所以应尽量选择营养琼脂平板上的新鲜菌苔，如为营养琼脂斜面，则选用斜面中段的菌苔，进行生化试验及血清学试验。
参考文献：
[1]王学硕，崔生辉，邢书霞，等.餐饮食品中沙门氏菌的危害分析、污染调查与防控[J].中国药事，2013，27（9）：974-979.
[2]杨正时，房海.人及动物病原细菌学[M].石家庄：河北科学技术出版社，2003：497-502.
[3]GB29921-2013食品安全国家标准食品中致病菌限量[S].
[4]舒鹃娟，张伟冲，袁峰，等.食品微生物的检测能力验证[J].上海预防医学，2014，26（3）：154-157.
[5]GB4789.4-2016食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验[S].
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