乳腺癌Dab1、E-cad的表达及其在上皮间质转化中的作用

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　　摘要：目的  探討乳腺癌残障蛋白-1（Dab1）与E-钙粘蛋白（E-cad）在乳腺癌中的表达及其与上皮间质转化（EMT）的相关性。方法  收集2018年3月～2019年3月佳木斯大学附属第一医院病理科乳腺癌组织与癌旁组织各80例，采用免疫组织化学方法检测乳腺癌Dab1和E-cad的表达，并分析其与患者临床病理特征的关系。结果  Dab1在乳腺癌组织中的阳性表达率为45.00%（36/80），在癌旁组织中的阳性表达率为75.00%（60/80）;E-cad在乳腺癌组织中的阳性表达率为60.00%（48/80），在癌旁组织中的阳性表达为85.00%（68/80），差异均有统计学意义（P<0.05）;不同年龄、月经史、肿瘤大小间Dab1、E-cad阳性率比较，差异无统计学意义（P>0.05）;不同TNM分期、分化程度及淋巴结转移情况间Dab1、E-cad阳性率比较，差异有统计学意义（P<0.05）;Spearman相关分析显示，Dab1和E-cad呈正相关（r=0.226，P<0.05）。结论  Dab1、E-cad在乳腺癌中异常表达，二者呈正相关，均与乳腺癌临床分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移相关，可作为判断乳腺癌预后的指标。
　　关键词：残障蛋白-1;E-钙粘蛋白;上皮间质转化;乳腺癌;免疫组织化学
　　中图分类号：R737.31                                文献标识码：A                                 DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.04.024
　　文章编号：1006-1959（2020）04-0080-03
　　Abstract：Objective  To investigate the expression of breast cancer disability protein-1（Dab1） and E-cadherin（E-cad）in breast cancer and their correlation with epithelial-mesenchymal transition （EMT）.Methods  From March 2018 to March 2019， 80 cases of breast cancer tissues and adjacent tissues from the Department of Pathology of the First Affiliated Hospital of Jiamusi University were selected.The expressions of Dab1 and E-cad in breast cancer were detected by immunohistochemistry，and their correlation with the relationship between the clinicopathological characteristics of patients.Results  The positive expression rate of Dab1 in breast cancer tissues was 45.00% （36/80），and the positive expression rate in adjacent tissues was 75.00%（60/80）.The positive expression rate of E-cad in breast cancer tissues 60.00%（48/80），the positive expression in the adjacent tissues was 85.00%（68/80），the differences were statistically significant（P<0.05）;There was no significant difference in Dab1， E-cad positive rates between different ages，menstrual history，and tumor size（P>0.05）;Dab1，E-cad positive rates were different among different TNM stages，degrees of differentiation， and lymph node metastasis，the difference was statistically significant（P<0.05）;Spearman correlation analysis showed that Dab1 and E-cad were positively correlated （r=0.226，P<0.05）.Conclusion  Dab1 and E-cad are abnormally expressed in breast cancer.Both of them are positively correlated，and both are related to the clinical stage of breast cancer，the degree of tumor differentiation，and lymph node metastasis.Therefore，the two can be used as indicators to judge the prognosis of breast cancer. 　　Key words：Disability protein-1;E-cadherin;Epithelial-mesenchymal transition;Breast cancer;Immunohistochemistry
　　乳腺癌（breast cancer）现已成为威胁女性健康的首要恶性肿瘤[1]。复发、局部浸润、远处转移仍是其治疗失败、造成死亡的主要原因。乳腺癌转移是一个具有复杂步骤的生物学过程，相关研究表明该过程与上皮间质转化（epithelial mesenchymaltransition，EMT）有关[2]。乳腺癌细胞在经历EMT之后，其侵袭性增强，继而浸润至周围基质中，形成促进肿瘤生长与转移的微环境，它与肿瘤侵袭、转移及干细胞特征密切相关[3]。E-钙粘蛋白（E-cadherin，E-cad）是其特征性分子，其表达下调预示肿瘤发生着EMT现象。近年来研究表明残障蛋白-1（Disabled-1，Dab1）与肿瘤进展有关，其表达情况与患者的肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移亦有关，这预示着Dab1蛋白可以促进乳腺癌的浸润与转移。目前，有关Dab1蛋白与乳腺发生EMT的研究鲜有报道，本研究通过联合检测Dab1与E-cad在乳腺癌中的表达，探讨乳腺癌中Dab1、E-cad的表达与EMT的相关性，以期为临床判断乳腺癌预后疗效提供参考。
　　1材料与方法
　　1.1材料  收集2018年3月～2019年3月佳木斯大学附属第一医院病理科乳腺癌组织、癌旁组织各80例。
　　1.2试剂  兔抗人Dab1抗体，兔抗人E-cadherin，购于北京博奥森生物技术有限公司;PS法试剂盒、DAB显色试剂，PBS憐酸盐缓冲液、石蜡切片机、电烤箱、恒温水浴箱、冰箱、光学显微镜、计算机病理图文分析系统由佳木斯大学附属第一医院病理科提供。
　　1.3免疫组化方法  将石蜡块切成4 μm的切片，置于60℃烤箱烤片，常规二甲苯脱蜡，乙醇水化;用PBS与蒸馏水冲洗3次，3 min/次;置于EDTA抗原修复液（pH=8.0）高温高压修复40 min，冷却至室温;用3%过氧化氢灭活、封闭内源性生物素;滴加山羊血清封闭抗原，滴加稀释浓度为1∶600的Dab1、滴加稀释浓度为1∶200的E-cad抗体，孵育1 min;用PBS冲洗3次，3 min/次;滴加二抗，孵育1 min，再PBS冲洗3次3次，3 min/次;滴加显色剂，显微镜下控制显色，用蒸馏水冲洗，苏木精复染细胞核;树胶封片，光学显微镜下观察结果。
　　1.4结果判定  由2位病理科医师进行判定，采用双定量评分法进行评定：①阳性细胞所占百分比：分为5个等级，分别为0分、1分、2分、3分、4分，其阳性细胞数分别<10%、10%～25%、26%～50%、51%～75%、>75%。②染色程度評分：分为3个等级，分别为淡黄色、棕黄色、棕褐色，分别为：1分、2分、3分。<3分为阴性（-），≥3分为阳性（+）。按分数将表达程度分4个等级：分别为0～2分、3～4分、5～8分、>9分，对应阴性（-）、低表达（+）、中表达（++）、高表达（+++），其中低、中、高表达均按阳性记。
　　1.5统计学方法  采用SPSS 20.0软件进行统计学分析，Dab1和E-cad在乳腺癌组织和癌旁组织表达比较采用？字2检验，Dab1和E-cad的相关性采用Spearman等级相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。
　　2结果
　　2.1 Dab1蛋白和E-cad蛋白的表达  Dab1和E-cad在乳腺癌组织和癌旁组织中阳性产物主要存在于胞质内，均为黄色或棕黄色颗粒（图1、图2），Dab1和E-cad在乳腺癌组织中的阳性表达率分别为45.00%（36/80）和60.00%（48/80），在癌旁组织中的阳性表达率分别为75.00%（60/80）和85.00%（68/80），差异有统计学意义（P<0.05）。
　　2.2 Dab1和E-cad的表达与临床病理因素的关系  不同年龄、月经史、肿瘤大小间Dab1、E-cad阳性率比较，差异无统计学意义（P>0.05）;不同TNM分期、分化程度及淋巴结转移情况间Dab1、E-cad阳性率比较，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。
　　2.3乳腺癌中Dab1和E-cad表达的相关性分析  Spearman相关分析显示，Dab1和E-cad在乳腺癌组织中呈正相关（r=0.226，P<0.05）。
　　3讨论
　　目前，乳腺癌发病率逐年升高，异质性、转移、复发及死亡仍然是乳腺癌治疗失败的主要原因，因此，积极寻找肿瘤相关因子十分重要。乳腺癌的转移、复发是一个很复杂、多步骤的过程，其中EMT在肿瘤的发生发展中扮演着重要的角色，故积极寻找EMT相关蛋白具有十分重要的意义。
　　本研究结果显示，E-cad在乳腺癌组织中的表达较癌旁组织中的阳性表达率低，这说明E-cad的低表达促进组织发生癌变，在乳腺癌的发生过程中起着促进作用。有研究表明[4]，乳腺癌组织95%来源于由上皮细胞组织。E-cad是一种钙粘蛋白[5]，主要作用是稳定正常组织的上皮细胞，如E-cad发生异常，组织也容易癌变，这也充分表明E-cad在正常乳腺组中发挥着重要的抑癌作用，其低表达促进乳腺癌的发生。本研究结果显示，在高、中、低分化的组织中，低分化组织中E-cad阳性率更低，这就说明E-cad的阳性表达率越低，肿瘤的恶性程度越高，没有了E-cad的稳定性保护，癌组织恶性程度增加，这可以作为判断组织良恶性的指标。本研究结果还发现E-cad的表达缺失与乳腺癌的淋巴结转移有关，这说明E-cad的缺失证实存在着EMT现象，从而使癌细胞更容易获得活动的能力，沿着血道、淋巴道向远处转移。有研究表明[6]，E-cad表达降低预示着细胞间的连接性遭到破坏，导致肿瘤细胞向局部浸润或有远处转移。一般认为乳腺癌细胞在发生EMT进入血管后，形成循环肿瘤细胞（circulating tumor cells，CTCs），癌细胞获得间质表型，突破基底膜向远处转移，同时，CTCs回到原发灶，增强原发病灶向周围组织浸润，加快肿瘤进展速度[7]，本研究与上述研究结论基本一致，进一步证实上皮稳定因子E-cad的缺失或功能遭到破坏，癌细胞的移动能力大大提高，促进EMT现象的发生，更易通过局部转移，沿着淋巴道、血道向远处的器官转移，形成新的转移灶，危及患者生命。 　　Dab1的缺失通常会造成精神疾病的发生[8，9]，其的低表达与脑胶质瘤与子宫内膜癌的发展有关，是一个潜在的抑癌基因。本研究结果显示，Dab1在乳腺癌中的表达较癌旁正常组织是下调的，这说明Dab1参与了乳腺癌的发生，并可以促进乳腺癌的发生发展，更加证实它的低表达可以促进乳腺癌的发生发展，并且这是一个抑癌基因。本研究还发现在分化差的乳腺组织中Dab1的阳性表达更低，这就说明正常的乳腺细胞在失去Dab1的调控的情况下，就会不断地增殖、更新，甚至失去凋亡的能力，导致低分化组织的出现，因此，Dab1阳性率越低的乳腺癌组织分化越差。有研究表明[10]，Dab1在乳腺癌组织中的含量与乳腺癌细胞的恶化程度负相关，本研究与上述研究结论基本一致。Dab1在乳腺癌中的表达随着临床分期的增高而表达下降，这表明Dab1的表达情况影响着乳腺癌的预后，临床分期的高低决定了乳腺癌患者的辅助治疗方案的选择。Spearman相关分析显示，Dab1和E-cad在乳腺癌组织中呈正相关（r=0.226，P<0.05），这表明Dab1与E-cad共同促进了肿瘤发生EMT现象。
　　综上所述，Dab1的表达与乳腺癌局部浸润、转移有关，并与E-cad二者共同促进EMT的发生，但Dab1促进肿瘤发生EMT的机制还需进一步研究，逐步完善。本实验尚存在不足之处，操作可能存在一定误差，样本量较少，仍需大量临床研究。
　　参考文献：
　　[1]Dasgupta P，Aitken JF，Pyke C，et al.Competing mortality risks among women aged 50-79 years when diagnosed with invasive breast cancer，Queensland，1997-2012[J].Breast，2018（41）：113-119.
　　[2]Wei Z，Shan Z，Shaikh ZA.Epithelial-mesenchymal transition in breast epithelial cells treated with cadmium and the role of Snail[J].Toxicology and Applied Pharmacology，2018，344（1）：46-55.
　　[3]劉志娴，魏尔清，卢韵碧.上皮—间质转化在肿瘤发生发展中的作用研究进展[J].浙江大学学报（医学版），2015，44（2）：211-216.
　　[4]郭鱼波，王春晖，裴晓华.乳腺癌细胞上皮间质转化的分子机制及其防治的研究进展[J].中国肿瘤，2018，27（12）：933-943.
　　[5]雷珍，钟锡明，周岐，等.p53，Ki-67及E-钙粘蛋白在三阴性乳腺癌中的表达及预后[J].临床与病理杂志，2017（2）：308-314.
　　[6]da Cunha IW，Souza MJ，da Costa WH，et al.Epithelial-mesenchymal transition（EMT）phenotype at invasion front of squamous cell carcinoma of the penis influences oncological outcomes[J].Urol Oncol，2016，34（433）：e19-e26.
　　[7]Ortega FG，Alvarez-Cubero MJ，Nadal R，et al.EMT and EGFR in CTCs cytokeratin negative non-metastatic breast cancer[J].Oncotarget，2014，5（17）：7486-7497.
　　[8]张建华.DCC介导的Dab1磷酸化参与调控新皮质神经元辐射迁移的研究[D].东北师范大学，2018.
　　[9]王琼.Reelin-dab1信号转导通路在铝致Aβ代谢异常中的作用及其机制研究[D].山西医科大学，2018，31（8）：3278-3281.
　　[10]王同玫，张一奇，文普帅，等.乳腺癌组织中Dab1蛋白表达及其临床相关性研究[J].中国现代医学杂志，2018，28（15）：32-36.
　　收稿日期：2019-11-26;修回日期：2019-12-02
　　编辑/李国苗
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