灯盏花素杂质化学成分研究
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【摘 要】 目的：研究灯盏花中提取分离所得的灯盏花素原料药的化学成分。方法：采用大孔吸附树脂和Sephadex LH-20 等色谱方法进行分离纯化，应用波谱学方法鉴定化合物的结构。结果：分离得到4个化合物。分别鉴定为4'-羟基黄芩素（1），4'-羟基黄芩素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（2），芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷（3），6-羟基山奈酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷（4）。结论：4个化合物首次从灯盏花素原料药中分得。
【关键词】 灯盏花素;化学成分;黄酮
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2020）3-0033-03
Abstract：Objective To study the chemical constituents of breviscapine extracted from Erigeron breviscapus.Methods The chemical constituents were isolated by column chromatography with macroporous adsorption resin and Sephadex LH-20. Their structures were identified on the basis of spectroscopic analysis.Results Four ompounds were isolated and identified as 4'-hydroxyscutellarin（1），plantagin（2），apigenin-7-O-β-D-glucuronide（3），6-hydroxykaempferol-7-O-β-D-glucuronopyranoside（4）.Conclusion Four ompounds were isolated from breviscapine for the first time.
Keywords：Breviscapine;Chemical Components;Flavonoids
灯盏花素为菊科植物短葶飞蓬（Erigeron breviscapus （Vant.） Hand. Mazz.）中提取分离得到的原料药，其是一个混合物，由野黄芩苷（灯盏花乙素）与其他成分组成，2015版《中国药典》一部灯盏花素标准中，规定含野黄芩苷不得低于90.0%（供口服用）或98.0%（供注射用）[1]，除对野黄芩苷（灯盏花乙素）有含量规定外，对其它成分没有相关限度检测。灯盏花素对心脑血管以及肝、肾、肺损伤具有保护作用。大量研究表明[2]，其保护缺血再灌注脑组织的可能机制为保护神经元与防治细胞毒性、调节血管内皮功能、缓解脑血管痉挛、改善微循环，降低血脂、调节免疫及减轻炎性反应、抗自由基损伤、抑制血小板凝集等作用。
目前，以灯盏花素为原料制成的制剂有片剂、注射剂和注射粉针剂等，临床应用较广。为了使灯盏花素原料药的物质基础和杂质成分更加清楚，对灯盏花素中野黄芩苷（灯盏花乙素）之外的成分进行分离，使灯盏花素为原料药制成的制剂产品物质基础更加清楚，为产品质量标准进一步提升及提高产品安全性打下基础。本实验从灯盏花素中进行分离，最终分离得到4个化合物，经光谱鉴定为4'-羟基黄芩素，芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷，4'-羟基黄芩素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，6-羟基山奈酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷。
1 儀器与材料
NMR测试使用Bruker DRX-500和AV-400核磁共振波谱仪;Bruker HCT Esquire 3000离子阱质谱仪;大孔吸附树脂HPD-100（沧州宝恩吸附材料科技有限公司）和凝胶Sephadex LH-20，旋转蒸发仪为Buchi R210（Buchi公司）;样品检测使用GF254 TLC板（青岛海洋化工）和Waters 600高效液相色谱仪;甲醇、乙醇等均为工业纯试剂，灯盏花素由云南植物药业有限公司原料车间提供。
2 提取分离
取灯盏花素1kg，用3倍量的水，加磷酸氢二钠溶液至完全溶解，滤过，滤液过大孔吸附树脂，依次用水，10%、20%、30%、40%和60%乙醇梯度洗脱，经液相检测合并得到10%～30%乙醇洗脱段、40%乙醇洗脱段、60%乙醇洗脱段组分，分别合并浓缩至小体积，大孔吸附树脂60%乙醇洗脱段浓缩液经反复凝胶柱层析分离，依次用水、甲醇∶[KG-*3/5]水为10∶[KG-*3/5]90、20∶[KG-*3/5]80、30∶[KG-*3/5]70，40∶[KG-*3/5]60的洗脱剂梯度洗脱，40∶[KG-*3/5]60洗脱段经液相检测合并相同组分，浓缩至小体积，用磷酸调pH=2，过滤，干燥，得到4'-羟基黄芩素（85mg）;大孔吸附树脂40%乙醇洗脱段浓缩液经反复凝胶柱层析分离，依次用水、甲醇∶[KG-*3/5]水为10∶[KG-*3/5]90、20∶[KG-*3/5]80、30∶[KG-*3/5]70、40∶[KG-*3/5]60的洗脱剂梯度洗脱，30∶[KG-*3/5]70洗脱段经液相检测合并相同组分，浓缩至小体积，用磷酸调pH=2，过滤，干燥，得到芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷（124mg）;大孔吸附树脂10%～30%乙醇洗脱段浓缩液经反复凝胶柱层析分离，依次用水、甲醇：水为10∶[KG-*3/5]90、20∶[KG-*3/5]80、30∶[KG-*3/5]70、40∶[KG-*3/5]60的洗脱剂梯度洗脱，20∶[KG-*3/5]80洗脱段经液相检测合并相同组分，浓缩至小体积，用磷酸调pH=2，过滤，干燥，得到4'-羟基黄芩素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（37mg）;10∶[KG-*3/5]90洗脱段经液相检测合并相同组分，浓缩至小体积，用磷酸调pH=2，过滤，干燥，得到6-羟基山奈酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷（47mg）。 3 结构鉴定
化合物1 黄色粉末，溶于甲醇;ESI--MS：m/z 285[M-H] -;详细的NMR数据归属见表1，通过与文献数据仔细比对，最终确定该化合物为4'-羟基黄芩素，即4'-hydroxyscutellarin[3]。
化合物2 黄色粉末，微溶于甲醇;ESI+-MS：m/z 471[M+Na]+;详细的NMR数据归属见表1，通过与文献数据仔细比对，最终确定该化合物为4'-羟基黄芩素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，即plantagin[4-5]。
化合物3 淡黄色粉末，溶于甲醇;ESI--MS：m/z 445[M-H] -;详细的NMR数据归属见表1，通过与文献数据仔细比对，最终确定该化合物为芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷（灯盏甲素），即apigenin-7-O-β-D-glucuronide[5-6]。
化合物4 黄色粉末，微溶于甲醇;ESI--MS：m/z 477 [M-H] -;詳细的NMR数据归属见表1，通过与文献数据仔细对比，最终确定该化合物为6-羟基山奈酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷，即6-hydroxykaempferol-7-O-β-D-glucuronopyranoside [7]。
参考文献
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[6]ZHANG W D ，CHEN W S，WANG Y H，et al. Studies on the Flavone Glycosides from the Extract of Erigeron breviscapus[J]. Chin Tradit Herbal Drugs， 2000（31）：565-566.
[7]DERYA G，OEZGEN A C，CANAN K，et al. Phenolic Glycosides with antiproteasomal activity from Centaurea urvillei DC. subsp. Urvillei[J]. Carbohydrate Research， 2010（345）：2529-2533.
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