灯盏细辛乙醚部位化学成分研究

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　　摘 要：[目的]为进一步明确灯盏细辛药材药效作用的物质基础。[方法]本文采用硅胶、聚酰胺柱层析和重结晶等方法灯盏细辛乙醚提取物进行分离，并根据化合物的理化性质及1H-NMR、13C-NMR、HMBC、HR-MS等方法分析、鉴定化合物结构。[结果]从灯盏细辛乙醚提取部位中分离和鉴定出4个化合物，24（s）-3β-羟基豆甾-5-烯-7-酮（化合物1）、染料木素（化合物2）、3'，4'-二甲氧基槲皮素（化合物3）、β-谷甾醇（化合物4）。其中化合物1、2均为首次从灯盏细辛药材中分离得到。[结论]研究结果丰富了灯盏细辛的化学成分内容，为今后的开发提供了科学依据。
　　关键词：灯盏细辛;乙醚部位;组分分离;首次;结构鉴定
　　Abstract：[Objective]To further determine the material basis of the pharmacodynamics of Erigeron breviscapus.[Method]the chemical constituents were repeated by silica，gelpolyamide column chromatography and recrystallization，and the structures of compounds from the ether extraction were identified on the basis of physico-chemical characteristics by1H-NMR，13C-NMR，HMBC，HR-MS spectrum.[Result]4 compounds were isolated and elucidated from the ether extraction from Erigeron breviscapus，which were 24（s）-3β-hydroxystigmast-5-en-7-one（1），genistein（2），3'，4'-trimethoxyquercetin（3），β-sitosterol（4）.[Conclusion]Compound 1 and 2 were separated from Erigeron breviscapus for the first time.The results not only enriched its chemical constituents of Erigeron breviscapus，but also would provide material basis for its development in the future.
　　Key words：Erigeron breviscapus;ether extraction;constituent isolation;first time;structure identification
　　灯盏细辛，又名灯盏花，为菊科飞蓬属植物短葶飞蓬（Erigeron breviscapus Hand.-Mazz.）的干燥全草。该药材最早收载于《滇南本草》，《中华人民共和国》2015版一部亦有收载。[1]传统中医认为灯盏细辛的功效为：解表散寒，祛风活络，除湿止痛;临床上常用于用于治疗风寒感冒，风湿痹痛，半身不遂等症。众多专家和学者先后从灯盏细辛药材分离出多种化学成分，但大多数化学成分是从乙酸乙酯部位、石油醚部位、正丁醇部位分离出来的。[2、3]为了更好地开发利用灯盏细辛药材，本文以干燥处理后的灯盏细辛全草为材料，经过80%乙醇提取、系统溶剂萃取、薄层层析对灯盏细辛药材的化学成分进行分离及结构鉴定，共分离和鉴定出4个化合物。
　　1 仪器与试药
　　1.1 仪器
　　Photolysis TOF-MS 型高质量质谱仪（英国Kore公司），DPX-400核磁共振仪（瑞典Bruker公司）;TMS内标，X6型熔点测定仪（天津广普光学仪器有限公司），RE-52A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂生产），BPG-9030BH型电热恒温鼓风干燥箱（上海和呈仪器制造有限公司），SHB-Ⅲ型台式循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司），HH-2数显恒温水浴锅（常州澳华仪器有限公司）。
　　1.2 试剂
　　柱层析填料Toyopearl HW-40（日本TOSOH公司），Pharmadex LH-20安玛硅胶H（青岛海洋化工厂），薄层层析硅胶G（青岛海洋化工厂），所用化学试剂均为分析纯（天津市化学试剂三厂）。
　　1.3 药材
　　研究所用的灯盏细辛药材采自云南省红河自治州泸西县，经湖南省食品药品检验研究院王华副主任中药师鉴定为菊科植物短葶飞蓬（Erigeron breviscapus）的全草。
　　2 方法与结果
　　2.1 提取与分离
　　取灯盏细辛药材10.0kg，80%乙醇连续回流提取2次，第一次加80%乙醇8倍量回流2h，第二次加80%乙醇5倍量回流2h，分别过滤，合并滤液，浓缩至稠膏至无醇味，称其重量为5604g，依次以乙醚、乙酸乙酯萃取，分别得到乙醚部位（984g），乙酸乙酯部位（204.6g）。将乙醚部位采用石油醚-乙酸乙酯（90：10→5：95）依次梯度洗脱，收集洗脱液。以薄层色谱法（TLC）检测洗脱液，并利用聚酰胺、Sephadex LH-20柱层析等方法对各部位进行分离纯化得单体化合物。
　　2.2 结构鉴定
　　从灯盏细辛乙醚部位总共分离得到5个化合物，利用传统的理化鉴定法结合现代各种光谱技术先后鉴定了这些化合物的结构。
　　化合物1：黄色油状物，易溶于乙醚，与溴水反应为阳性。HR-ESI-MS（m/z）：430.2[M]+;1H-NMR（500MHz，CDCl3）δ：3.65（1H，m，H-3），2.07（2H，m，H-4），5.72（1H，d，J=2.0Hz，H-6），2.38（1H，m，H-8），0.73（3H，s，CH3-18），0.91（3H，s，CH3-19），0.86（3H，d，J=5.9Hz，CH3-21），0.84（3H，d，J=6.8 Hz，CH3-26），0.81（3H，d，J=6.8 Hz，CH3-27），1.15（3H，s，CH3-29）;13C-NMR（CDCl3）δ：36.2（C-1），31.7（C-2），71.1（C-3），41.4（C-4），163.9（C-5），125.9（C-6），201.9（C-7），44.8（C-8），48.9（C-9），38.3（C-10），20.9（C-11），36.5（C-12），42.9（C-13），50.8（C-14），25.6（C-15），29.8（C-16），53.7（C-17），12.7（C-18），16.8（C-19），35.4（C-20），18.6（C-21），33.5（C-22），26.8（C-23），47.1（C-24），30.3（C-25），19.1（C-26），18.3（C-27），22.2（C-28），11.9（C-29）。以上數据与文献报道[4、5]的基本一致，故鉴定化合物1为24（s）-3β-羟基豆甾-5-烯-7-酮。 　　化合物2：树枝状结晶，熔点（mp.）为297～298℃。HR-ESI-MS（m/z）：270.16[M]+;1H-NMR（500MHz，DMSO-d6）δ：826（1H，s，H-2），6.15（1H，d，J=2.1Hz，H-6），6.29（1H，d，J=2.0Hz，H-8），7.42（2H，t，J=8.6Hz，H-2’，6’），6.72（2H，t，J=8.6Hz，H-3’，5’），12.88（1H，s，5-OH），10.69（1H，s，7-OH），948（1H，s，4’-OH）;13C-NMR（250MHz，DMSO-d6）δ：152.9（C-2），124.6（C-3），157.8（C-4），163.1（C-5），98.5（C-6），162.9（C-7），93.6（C-8），156.9（C-9），105.3（C-10），123.2（C-1’），131.1（C-2’，6’），114.9（C-3’，6’）158.6（C-4’）。以上数据与文献报道[6]的一致，故鉴定化合物3为染料木素。
　　化合物3：黄色粉末状固体，盐酸-镁粉（Mg-Hcl）为阳性，揭示可能为黄酮类化合物。HR-ESI-MS（m/z）：330.1[M]+;1H-NMR（500MHz，CDCl3）δ：6.48（1H，s，H-6），6.23（1H，s，H-8），765（1H，d，J=1.8Hz，H-1’），7.77（1H，m，H-6’），6.41（1H，d，J=8.7Hz，H-5’），3.86（3H，s，4’-OCH3），3.93（3H，s，3’-OCH3），12.81（1H，s，3-OH）;13C-NMR（100 MHz）δ：126.8（C-1），157.3（C-2），138.7（C-3），173.9（C-4），163.4（C-5），98.9（C-6），165.2（C-7），95.1（C-8），158.1（C-9），106.1（C-10），124.2（C-1’），112.1（C-2’），150.4（C-3’），153.1（C-4’），111.9（C-5’），123.6（C-6’），55.8（3’-OCH3），55.6（4’-OCH3）。以上数据与文献报道[7]的一致，故鉴定该化合物为3’，4’-二甲氧基斛皮素。
　　化合物4：白色粉末，mp.138～140℃，硫酸-茴香醛反应显紫色。EI-MS（m/z）：414.7（M+）。1HNM R（CDCl3）δ：3.49（1H，m，H-3），5.31（1 H，m，H-6），0.63（3H，s，H-18），1.01（3H，s，H-19），0.94（3H，d，J=6.3 Hz，H-21），0.82（3H，d，J=6.3 Hz，H-27），0.86（3H，t，J =7.2Hz，H-29）。13C-NMR（CDCl3）δ：36.8（C-1），31.2（C-2），71.5（C-3），41.9（C-4），141.1（C-5），121.9（C-6），31.3（C-7），31.7（C-8），49.8（C-9），36.2（C-10），20.1（C-11），40.2（C-12），42.1（C-13），57.2（C-14），22.9（C-15），27.8（C-16），56.2（C-17），11.9（C-18），19.6（C-19），36.3（C-20），18.4（C-21），35.1（C-22），25.8（C-23），45.5（C-24），28.8（C-28），11.9（C-29）。以上數据文献报道[8]的一致，故鉴定化合物5为β-谷甾醇。
　　3 讨论
　　本实验采用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱和TLC法对灯盏细辛乙醚提取物进行了系统的化学成分研究，丰富了灯盏细辛的化学成分内容。研究结果表明从灯盏细辛乙醚提取物分离得到6个化合物，其中3个化合物为脂肪族类化合物，2个化合物为黄酮类化合物，1个化合物为萜类（薁类）化合物。现代药理学研究表明，新发现染料木素可以抑制软骨细胞的凋亡，从而缓解关节软骨的退变。新发现的化合物是否与灯盏细辛抗癌、抗炎作用有关，还待于进一步科学的研究。
　　参考文献：
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　　作者简介：李君（1983-），男，生药学硕士，副教授，现为湘潭医卫职业技术学院教师，主要从事中药化学成分研究及质量标准研究。
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