康复新液对乙醇致大鼠急性胃溃疡的保护作用

来源:用户上传      作者:陶柱萍 郭锐 王雪雪 厉颖 刘卫红 高鹏飞

　　摘要 [目的]探討康复新液对无水乙醇致大鼠急性胃溃疡的保护作用及机制。[方法]采用无水乙醇灌胃SD大鼠，制备急性胃溃疡模型，将大鼠按体质量随机分为空白组、模型组（无水乙醇10 g/kg）和康复新液给药组（无水乙醇10 g/kg+康复新液6 mL/kg）。给药后，观察各组大鼠的胃黏膜形态学变化和溃疡指数，测定大鼠胃组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）的含量。[结果]与空白组相比，模型组胃组织损伤严重，溃疡指数、MDA水平明显升高;SOD、GSH水平显著降低（P<0.01）。与模型组相比，康复新液给药组胃组织损伤程度减轻，溃疡指数和MDA水平降低（P<0.05），SOD、GSH水平升高（P<0.01）。[结论]康复新液对无水乙醇引起的急性胃溃疡有一定的保护作用，其机制可能与减少氧自由基生成、促进氧自由基清除和抑制脂质过氧化、增加氧化应激有关。
　　关键词 康复新液;无水乙醇;急性胃溃疡;抗氧化;保护作用
　　中图分类号 R285.5文献标识码 A
　　文章编号 0517-6611（2020）07-0190-03
　　doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.07.054
　　Protective Effect of Kangfuxin Solution on Rats with Ethanolinduced Acute Gastric Ulcer
　　TAO Zhuping1，GUO Rui2，WANG Xuexue1 et al （1.School of Pharmacy，Dali University，Dali，Yunnan 671000;2.Chongqing Chemical Industry Vocational College，Chongqing 400020）
　　Abstract [Objective] The research aimed to investigate the protective effects of Kangfuxin solution on ethanolinduced acute gastric ulcer in rats.[Method]The models of acute gastric ulcer were established using absolute ethanol.The rats were randomly divided into control group，model group （absolute ethanol 10 g/kg），Kangfuxin solution group （absolute ethanol 10 g/kg+Kangfuxin 6 mL/kg） according to its body weight.The morphological changes of gastric mucosa and ulcer index were observed，the activity of superoxide dismutase （SOD） and the contents of malondialdehyde （MDA） and glutathione （GSH） in gastric tissue of rats were checked.[Result]Compared with normal group，the gastric tissue injury was serious，the ulcer index and and the contents of MDA in model group were increased，whereas the level of SOD and GSH were decreased，which presented statistical significant differences （P<0.01）.Compared with the model group，the degree of gastric tissue injury was alleviated，the ulcer index and the contents of MDA was reduced significantly （P<0.05），and the level of SOD and GSH were elevated obviously （P<0.01） in the Kangxin solution group （P<0.01）.[Conclusion]Kangfuxin solution has protective effect on ethanolinduced acute gastric ulcer，which may be related to reducing the production of oxygen free radicals，promoting the scavenging of oxygen free radicals，inhibiting lipid peroxide and increasing oxidative stress. 　　Key words Kangfuxin solution;Ethanol;Acute gastric ulcer;Antioxidation;Protective effect
　　基金项目 国家自然科学基金项目（81260676，81960712）;云南省地方本科高校（部分）基础研究联合专项项目（2018FH001-097）;云南省教育厅科学研究基金重点项目（2013Z154）。
　　作者简介 陶柱萍（1994—），女，云南宣威人，硕士研究生，研究方向：代谢组学。通信作者，副教授，博士，硕士生导师，从事代谢组学研究。
　　收稿日期 2019-12-01
　　随着现代社会的发展，带来生活节奏加快、社会交往增多、生活压力增大等情况，导致人们胃溃疡的发病率日益升高，尤其是饮酒所引起的急性胃溃疡在临床日益常见;据有关资料，我国部分地区胃溃疡发病率高达6.07%，复发率为60%～80%[1-2]。乙醇对胃黏膜损害很大，通过消耗黏液和碳酸氢盐而破坏黏膜保护层;也可通过微粒体氧化酶在醇代谢过程中产生乙醛，导致抗氧化酶活性受损，加剧胃黏膜损伤[3]。胃黏膜损伤导致氧自由基清除率降低、胃黏膜中的氧自由基增加，进而引起脂质过氧化增加，损伤细胞和细胞膜及影响黏膜供血，从而进一步加剧溃疡的形成[4]。
　　康复新液由美洲大蠊干燥虫体的提取物制成，具有改善局部微循环、抗炎消肿、促进表皮细胞生长和肉芽组织的增生、加速坏死组织脱落、修复各种溃疡和创面的作用[4-5]。研究发现，康复新液对急性乙醇性胃溃疡有一定的保护作用[5]，但其作用机制尚不清楚。该试验通过观察大鼠的胃黏膜形态学变化和胃溃疡指数，检测胃组织中超氧化物歧化酶（SOD）、还原型谷胱甘肽（GSH）及丙二醛（MDA）的水平，探讨康复新液对乙醇致大鼠急性胃溃疡的影响及可能的作用机制，为康复新液的临床应用提供理论依据。
　　1 材料与方法
　　1.1 试验材料
　　1.1.1 药品及试剂。
　　康复新液（昆明赛诺制药股份有限公司）;氯化钠（天津市福晨化学试剂厂）;无水乙醇（国药集团化学试剂公司）;SOD、GSH、MDA生化指标试剂盒均购自卡迈舒生物科技有限公司。
　　1.1.2 仪器。
　　METTLER AE240分析天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司;SIGMA 3-15低温高速离心机，西格玛实验室离心机公司;MICCRA D-1组织破碎仪，迈卡莱客（广州）工业技术有限公司;VORTEX-5涡旋仪，海门市其林贝尔仪器制造有限公司。
　　1.1.3 实验动物。
　　SPF级雄性SD大鼠，体重220～250 g，购自昆明楚商科技有限公司，动物许可证号：SYXK（滇）K2012-0002，所有大鼠在清洁级环境中常规饲养。
　　1.2 试验方法
　　1.2.1 动物分组与给药。
　　将18只SD大鼠，适应性饲养7 d后，随机按体质量分为3组，即空白组、模型组、康复新液给药组。在禁食不禁水12 h后，模型组和康復新液给药组一次性灌胃无水乙醇（10 g/kg）建立胃损伤模型;造模后1 h，给药组一次性给予康复新液（6 mL/kg）进行治疗;给药后1 h处死大鼠。
　　1.2.2 样本的收集和处理。
　　1.2.2.1 溃疡指数的计算。
　　将大鼠胃组织取出后，进行拍照评分，并计算溃疡指数。胃损伤指数评定参照文献[6]，标准为：黏膜皱褶消失（0、1、2、3）;出血性区域（0、1、2、3）;溃疡（0、2、4、6）;穿孔（0、10）;溃疡指数是所有病变的分数之和。
　　1.2.2.2 胃组织生化指标的检测。取3份胃组织0.1 g，分别加入预冷的生理盐水匀浆，制成匀浆液。将匀浆液离心后，取上清于-80 ℃保存，用于SOD、GSH、MDA生化指标检测。
　　1.3 统计学方法 所测得的试验数据用SPSS 17.0软件进行分析和处理，处理后的试验结果以平均值±标准差（±S）的方式表示，用随机单因素的方差分析ANOVA，各组之间的比较用LSD（least significant difference）法。以P<0.05表示各组间结果具有显著性差异。
　　2 结果与分析
　　2.1 大鼠胃黏膜组织形态观察比较
　　如图1所示，空白组大鼠胃壁完整、未见到明显损伤，模型组大鼠胃部可以看到明显的充血肿胀，而康复新液给药组大鼠相对模型组损伤程度明显减轻。
　　2.2 溃疡指数
　　从图2可以看出，与空白组比较，模型组的溃疡指数具有显著差异（P<0.01）;与模型组相比，康复新液给药组溃疡指数明显减少（P<0.05），表明康复新液可以减轻急性胃溃疡症状，有一定的保护作用。
　　2.3 胃组织生化指标
　　采用试剂盒测定大鼠胃组织匀浆中SOD、GSH与MDA，结果如图3所示。与空白组相比，模型组大鼠的SOD活性和GSH含量明显降低（P<0.01），MDA含量显著升高（P<0.01）。与模型组相比，康复新液给药组大鼠的SOD活性、GSH含量均显著升高（P<0.01），而MDA含量明显降低（P<0.05）。
　　3 讨论与结论
　　该试验选用无水乙醇灌胃致急性胃溃疡的动物模型，灌入的乙醇直接破坏胃表面的保护屏障，导致胃壁血液循环障碍，胃黏膜损伤;其病理特点与人胃黏膜损伤相似，且具有操作简便、成模速度快、试验重复性好等优点[2]。急性乙醇性胃溃疡的发生与胃黏膜血流量减少及氧自由基增加诱发的脂质过氧化反应有关，其中氧自由基的增多是重要因素[7];机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作用，并由此形成脂质过氧化物[8]。 　　SOD是机体内一种重要的内源性氧自由基清除剂，在抗氧化方面起着重要作用，能有效地清除氧自由基，中断氧自由基的连锁反应，保护细胞免受损伤，其活性的高低也间接反映了机体清除氧自由基的能力[4，9-10]。SOD可以将超氧化物（O2-）还原为过氧化氢（H2O2），然后过氧化氢酶将过氧化氢转化为水，并具有修复细胞的功能[11]。胃黏膜受到损伤时，胃黏膜及血液中的氧自由基增多，促使体内SOD被大量消耗[12]。经康复新液给药治疗后，胃组织中的SOD活性明显升高，可清除机体过多的自由基，从而减轻机体的氧化应激损伤，并能稳定细胞膜，起到保护胃黏膜的作用。
　　GSH是细胞抗氧化防御系统中最重要的物质之一，可以保护胃黏膜组织免受自由基物质的损害;其作用承接SOD，能将胃组织氧化产生的过氧化物转化为低毒无害的物质。GSH主要在谷胱甘肽过氧化物酶的作用下与H2O2反应，消除H2O2生成H2O，自身则转化为氧化型谷胱甘肽（GSSG），而GSSG则可在谷胱甘肽还原酶的作用下还原成GSH;此外，GSH还可在谷胱甘肽转硫酶的作用下，与许多有害化合物及其活性代谢物的结合，从而分解有害的内源性、外源性化合物，并促进这些化合物的分解[13]。GSH的降低会使细胞面临氧化损伤的风险。在该试验中，给予无水乙醇后大鼠胃组织中GSH水平显著降低，说明在无水乙醇的作用下胃组织产生了严重的氧化损伤，并可能产生了一些相应的有害化合物;给药后GSH水平有恢复正常的趋势，提示康复新液具有抗胃溃疡的作用。
　　MDA是多不饱和脂肪酸过氧化的主要产物，也是氧化应激的生物标志物，可以破坏核酸、蛋白等生物大分子，造成机体损伤和疾病的发生，其产生还可以破坏细胞膜结构，加剧膜的损伤，导致细胞肿胀坏死;其含量是反映机体内氧自由基和脂质过氧化代谢的重要指标，可间接反映出细胞受损的程度[3，14-15]。乙醇致急性胃溃疡的胃组织中SOD活性的降低，可促使氧自由基在胃黏膜中积聚，从而引发链式脂质过氧化反应，使MDA含量升高，进一步加重胃黏膜的损伤[10]。试验结果显示，康复新液给药，降低了无水乙醇造成的MDA升高，进一步表明康复新液能降低脂质过氧化，增加机体氧化应激能力，抑制胃黏膜损伤的发生和发展，从而对乙醇引起的胃黏膜损伤进行保护。
　　综上所述，康复新液能降低乙醇诱导的溃疡损伤指数和胃组织中MDA含量的增加，升高SOD活性和GSH含量，
　　从而改善胃黏膜损伤。其机制可能与减少氧自由基生成、
　　促进氧自由基清除和抑制脂质过氧化作用、增加氧化应激有关。
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