高效液相色谱法同时测定蔬果中6种农药残留方法确认
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摘要：本文描述了用高效液相色谱法同时测定蔬果中的吡虫啉、多菌灵、除虫脲、灭幼脲、辛硫磷、阿维菌素6种农药残留的方法确认。结果表明，此方法标准曲线相关系数为0.99917～0.99999，方法检出限为0.006mg/kg～0.01mg/kg，相对标准偏差在0%～4.88%之间，平均加标回收率在97.8%～104%之间。本文提供了一种简便、高效的多农药残留检测方法，适用于大批量样品分析。
关键词：高效液相色谱;农药残留;同时测定;方法确认
中图分类号：TS255.7 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/j.cnki.jlny.2019.24.038
1 仪器与材料
1.1 仪器设备
高效液相色谱仪带紫外检测器： LC 1260;电子分析天平： PL602E/02;匀浆机： FA25;水浴锅： XMTD-204;氮吹仪： TTL-DCII。
1.2 试剂材料
吡虫啉、除虫脲、灭幼脲、辛硫磷、阿维菌素标准品：农业部环境质量监督检验测试中心（天津），1000mg/L;多菌灵标准品：农业部环境质量监督检验测试中心（天津），500mg/L;乙腈、甲醇、二氯甲烷：色谱纯;水：纯净水;氯化钠：140℃烘烤4h;氨基柱;有机滤膜：孔径0.22μm;黄瓜。
2 方法
2.1前处理方法
将蔬菜水果样品充分粉碎混匀。称取35.0g，加70.0mL乙腈，高速匀浆1min～2min，经滤纸过滤，将滤液完全收集到装有6g氯化钠的100mL具塞量筒內，剧烈震荡使其充分萃取，室温下静置20min～30min，吸取10.0mL上层有机相溶液，转移至50mL烧杯中，放入水浴锅中70℃蒸发至近干，加入2.0mL甲醇+二氯甲烷（5+95），待净化。
用4.0mL甲醇+二氯甲烷（5+95）预淋洗氨基柱，弃去淋洗液，立即加入待净化溶液，将洗脱液收集到50mL烧杯中，用4.0mL甲醇+二氧甲烷（5+95）洗烧杯继续洗脱，重复一次。将盛有10ml洗脱液的烧杯放入水浴锅中，温度37℃，蒸发近干，用甲醇+水（3+2）准确定容至5.0mL。混匀后，过有机滤膜，待测。
2.2 高效液相色谱仪测定条件
色谱柱：C18（3.0mm×250mm）;流动相：甲醇+乙腈（7+3），水;柱箱温度：40.0℃;进样体积：10μL;流速：0.8ml/min;外标法定量。
流动相时间程序：0.00min，水相+有机相（40+60）;7.00min，水相+有机相（40+60）;13.00min，水相+有机相（20+80）;19.00min，水相+有机相（10+90）;30.00min，水相+有机相（5+95）;30.01min，水相+有机相（60+40）;35.00min，水相+有机相（60+40）。
3 方法确认实验内容
3.1 线性及校准确认实验
3.1.1 分析步骤 将农药标准溶液用甲醇稀释配制成浓度分别为0.0mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L的混合标准溶液。按照2.2条件测定，测定结果以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程与相关系数。
3.1.2 结果 吡虫啉线性方程为y=64.5x，r=0.99917;多菌灵线性方程为y=30.7x，r=0.99990;除虫脲线性方程为y=39.6x，r=0.99997;灭幼脲线性方程为y=41.4x，r=0.99999;辛硫磷线性方程为y=32.4x，r=0.99995;阿维菌素线性方程为y=29.8x，r=0.99972。
3.2 方法检出限和方法定量限确认实验
3.2.1 分析步骤 在黄瓜样品中加入一定量的标准溶液，制成一系列低浓度的加标样品，经2.1前处理方法处理，按2.2条件测定。记录待测农药的信噪比，当信噪比为3∶1时，则该溶液浓度为方法检出限，当信噪比为10∶1时，则该溶液浓度为方法定量限。
3.2.2 结果 吡虫啉、多菌灵、除虫脲、灭幼脲、辛硫磷、阿维菌素的方法检出限分别为0.006mg/kg、0.01mg/kg、0.008mg/kg、0.008mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg，方法定量限分别为0.02mg/kg、0.035mg/kg、0.025mg/kg、0.025mg/kg、0.025mg/kg、0.03mg/kg。
3.3 方法精密度试验
3.3.1 分析步骤 在黄瓜样品中按下述方法进行加标：吡虫啉、多菌灵、除虫脲、灭幼脲、辛硫磷、阿维菌素6种农药设置一倍定量限、两倍定量限、十倍定量限3个添加水平，每个浓度做6个平行。经2.1前处理方法处理，按2.2条件测定，计算RSD。
3.3.2 结果 一倍定量限、两倍定量限、十倍定量限3个添加水平下，吡虫啉的RSD分别为2.38%、0.99%、3.01%;多菌灵分别为1.17%、1.17%、1.59%;除虫脲分别为2.99%、1.48%、2.99%;灭幼脲分别为2.01%、1.04%、0%;辛硫磷分别为2.04%、1.66%、2.15%;阿维菌素分别为4.88%、0.87%、1.76%。
3.4 方法加标回收试验
3.4.1 分析步骤 在黄瓜样品中按下述方法进行加标：6种农药设置一倍定量限、两倍定量限、十倍定量限3个添加水平，每个浓度做1个空白样品和3个加标平行样品。经2.1前处理方法处理，按2.2条件测定，计算加标回收率平均值。
3.4.2 结果 一倍定量限、两倍定量限、十倍定量限3个添加水平下，吡虫啉的平均加标回收率分别为110%、103%、103%;多菌灵分别为100%、101%、99%;除虫脲分别为101%、101%、100%;灭幼脲分别为103%、100%、100%;辛硫磷分别为104%、103%、104%;阿维菌素分别为97.8%、100%、97.8%。
4 结果与讨论
本文建立了高效液相色谱法同时测定蔬菜水果中吡虫啉、多菌灵、除虫脲、灭幼脲、辛硫磷、阿维菌素的含量，并进行了方法确认。结果表明，应用此方法同时测定6种农药分离效果好，标准曲线相关系数高、方法检出限及方法定量限低、方法精密度高、方法加标回收率良好。符合《实验室质量控制范围 食品理化检测》（GB/T 27404-2008）检测方法确认的技术要求。本方法具有前处理过程简单、可操作性强的特点，可以快速、准确的同时测定大批量蔬果中6种农药的残留量，在一定程度上有助于提升实验室农残检测的工作效率。
参考文献
[1]GB/T 27404-2008，实验室质量控制范围 食品理化检测[S].
[2]刘谦，颜红，等.蔬菜、水果中的吡虫啉、多菌灵和5种氨基甲酸酯类农药残留测定[J].农药科学与管理，2013，34（02）：24-28.
作者简介：张佳音，硕士研究生，实习研究员，研究方向：农产品检测;王越，硕士研究生，助理研究员，研究方向：农产品检测。
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