G6PD酶活性测定在地中海贫血初筛中的应用研究
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【摘要】 目的 探讨G6PD酶活性测定在地中海贫血初筛中的应用价值。方法 分别采用全自动生化分析仪以及全自动血细胞分析仪检测进行初筛人群的G6PD酶活性和红细胞MCV,同时分别采用聚合酶链反应以及反向点杂交检测初筛人群的α地贫基因缺陷以及β地贫基因缺陷。结果 正常人群、α地贫组以及β地贫各组间G6PD酶活性差异有统计学意义。结论 G6PD酶活性测定可以应用于地中海贫血的初筛。
【关键词】 G6PD酶活性;地中海贫血;初筛
Study on application of G6PD activity detection in thalassemia screening
ZHANG Yan-fang,PENG Jian-ming,CHEN Yan-ling,et al.Department of Clinical Laboratory and Pediatric,Boai Hospital of Southern Medical University Zhongshan 528403,China
【Abstract】 Objective To explore the application value of G6PD activity detection in thalassemia screening.Methods Applying chemistry analyzer and hematology analyzer to detect G6PD activity and RBC MCV for screeningrespectively,meanwhile,Applying PCR and reverse dot-blotting to confirm samples′genotype ofthalassemia.Results There were significant differencebetweenthe groups ofnormal、αthalassemia and βthalassemia in G6PD activity.Conclusion G6PD activity can apply in thalassemia screening.
【Key words】 G6PD activity;Thalassemia;Screening
地中海贫血(简称地贫)是我国南方各省最常见、危害最大的遗传病,人群发生率高达 10%以上,以广东、广西为主。本病的发生是由于血红蛋白分子中的珠蛋白肽链结构异常或合成速率异常,造成肽链不平衡而产生以溶血性贫血为主的症状群。地中海贫血的诊断分为初筛和确诊两种,筛查的方法有MCV和血红蛋白电泳,确诊采用基因诊断的方法。
G6PD酶是体内参与葡萄糖无氧代谢的一种氧化还原酶,主要存在于红细胞的膜上,对于红细胞膜的稳定性具有重要作用,一旦缺乏,则可能导致红细胞被破坏而溶血。目前对G6PD的研究主要集中在G6PD酶活性缺乏的研究上。但我们在日常工作中发现许多地中海贫血患者的G6PD酶活性增高,显示G6PD酶活性增高与地中海贫血之间存在一定的相关性。目前较少人对G6PD活性增高进行研究,只有陈冬等[1]对G6PD活性增高与地中海贫血的相关性进行了初步的研究,发现两者之间存在一定的相关性。本文拟进一步分析G6PD活性在地中海贫血初筛中的应用价值。
1 资料与方法
1.1 资料 735例无地贫基因者以及地贫基因携带者均来自来本院进行免费婚检的适婚男女(年龄21~38岁)。无地贫基因组383 例,地贫基因携带者组352例。
1.2 方法
1.2.1 G6PD酶活性检测 采用广州科方公司试剂盒,将肝素抗凝全血样本4000 r/min离心5 min后吸取20 ul压积红细胞到1 ml裂解液中,溶解后放入西门子ADVIA2400生化分析仪中进行检测。
1.2.2 MCV测定 采用雅培CD1700血细胞检测仪进行检测。MCV小于80 fl为初筛阳性[2]。
1.2.3 α地贫基因检测 采用深圳益生堂公司试剂盒,采用PCR方法进行检测。
1.2.4 β地贫基因检测 采用深圳益生堂公司试剂盒,采用反向点杂交方法进行检测。
1.3 统计学方法 两组间G6PD活性检测结果的差异采用t检验进行比较,数据分析采用SPSS 13.0统计软件。 计算检测结果对地中海贫血诊断的敏感性和特异性等指标。
2 结果
2.1 正常人群、α地贫组以及β地贫组间G6PD酶活性检测结果比较 α地贫组、β地贫组以及α+β地贫组与无地贫基因组比较,G6PD酶活性均存在显著性差异(P<0.001),α地贫组以及β地贫组均显著高于无地贫基因组,α地贫组与β地贫组两组比较G6PD酶活性具有显著性差异(P<0.001),β地贫组显著高于α地贫基因组。α+β地贫组与α地贫组两组比较G6PD酶活性没有显著性差异。见表1。
2.2 G6PD酶活性以及MCV应用于地中海贫血初筛的评价 以G6PD>2800 U/L、MCV<80fl为地中海贫血初筛阳性标准,比较G6PD、MCV以及MCV结合G6PD应用于地中海贫血初筛的价值。可见虽然单独应用G6PD,其灵敏度以及特异性均小于MCV,但G6PD可以作为MCV的补充,如果MCV>80 fl,但G6PD>2800 U/L也判断初筛阳性,则可极大的提高初筛的灵敏度,而特异性仅下降少许。
3 讨论
3.1 地贫各组G6PD活性均高 地中海贫血以及G6PD缺乏均为南方各省的常见遗传性疾病,在一般的体检中,均同时检测MCV以及G6PD酶活性以进行初筛。从本文表1可见,α地贫组G6PD酶活性为(3283±794)U/L,β地贫组G6PD酶活性为(3955±892)U/L,α合并β地贫组G6PD酶活性为(3532±699)U/L,各组与无地贫基因组(2785±610)U/L比较,G6PD酶活性均存在显著性差异。导致这种差异的原因,陈冬等[1]认为很可能是由于地贫患者体内慢性溶血所至新生RBC增多导致G6PD活性增高,因慢性溶血造成外围血红细胞年轻化,而G6PD酶为胞龄依赖酶[3],由此可见G6PD活性与体内新生RBC增多成正相关关系。但也可能与红细胞的大小有一定关系,地中海贫血患者的红细胞普遍较小,导致单位体积内红细胞数目以及红细胞膜表面积增高,而G6PD存在于红细胞的膜上,从而导致G6PD活性的增高。
3.2 应用价值 虽然单独应用G6PD,其灵敏度以及特异性均小于MCV,但G6PD可以作为MCV的补充,如果MCV>80fl,但同时G6PD>2800 U/L也判断初筛阳性,则可极大的提高初筛的灵敏度,如本文中灵敏度从91%提高到95%,而对特异性的影响也不大,这对于一个以初筛为目的的检验项目是非常有用的。
地中海贫血患者的G6PD活性增高使作者注意到另一个问题,即G6PD缺乏患者合并地贫时对G6PD缺乏诊断的影响,特别是对于女性杂合子的影响,因为许多女性杂合子的G6PD酶活性水平仅仅稍微低于参考范围下限,而地贫会导致G6PD假性增高,这是许多检验人员需要注意的问题。这需要进一步加深这一方面的研究,减少G6PD缺乏患者合并地贫时诊断的干扰。
参考文献
[1] 陈冬,陈和平,梁玲,等.G6PD活性检测在地中海贫血诊断中的意义中国优生与遗传杂志,2007,1:27-28.
[2] 姚红霞.地中海贫血的诊治进展.中国热带医学,2005(5)8:1725-1726.
[3] 阮林海.年轻红细胞采集极其临床应用.临床血液学杂志,1994,7(1):36.
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