藿香正气水调节小鼠肠道菌群失调的作用研究
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【摘 要】 目的：通過小鼠菌群失调模型研究藿香正气水调节肠道菌群失调的作用。方法：按7.2 mg·g-1剂量灌胃给予小鼠盐酸林可霉素，每天2次，连续5d，建立小鼠肠道菌群失调模型。将造模成功的小鼠随机分为藿香正气水组、乳酶生组、模型对照组，另选取健康小鼠作为空白对照组。藿香正气水组小鼠分别灌胃3.0mL·kg-1、1.5mL·kg-1、0.75mL·kg-1的藿香正气水溶液，乳酶生组小鼠灌胃0.132mg·g-1，2次/d，连续给药7d。模型组、空白对照组小鼠灌胃同体积的生理盐水。于末次给药12h后取小鼠的新鲜粪便，检测肠道菌群（肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌和乳杆菌）的变化。结果：藿香正气水高、中、低剂量组小鼠肠道的有益菌——双歧杆菌和乳杆菌数量明显上升;中、高剂量组与模型对照组比较，差异具有统计学意义（P<0.05），与空白对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：藿香正气水能扶植肠道正常菌群的生长，促进有益菌（双歧杆菌和乳杆菌）的增殖，具有调节肠道菌群失调的作用。
【关键词】 藿香正气水;菌群失调;藿香
【中图分类号】R285.6 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2019）24-0034-03
Effect of HuoXiangZhengQiShui on Modulation of Intestinal Flora in Mice
YANG Run1 YE Zhiliang2 CHEN Chongli 2*
1. Department of Gastroenterology， Ganzi Tibetan Autonomous Prefecture People’s Hospital， Kangding 62600， China
2. Affiliated Hospital of Chengdu University of Chinese Medicine， Chengdu 61105， China
Abstract：Objective To study the role of Huoxiangzhengqishui in regulating the imbalance of intestinal microflora.Methods To establish an intestinal flora imbalance model in mice， the mouse was intragastrically administrated lincomycin hydrochloride at a dose of 7.2mg·g-1， twice a day for 5 consecutive days. The successful model mice were randomly divided into HuoxiangZhengqiShui group， lactase group， model control group， and another healthy mice as blank control group. Huoxiangzhengqishui group were ig 3.0kg·kg-1， 1.5mL ·kg-1， 0.75mL·kg-1 of Huoxiangzhengqishui aqueous solution， lactation group were ig 0.132 mg·g-1， 2 times a day， continuous administration 7d. Model group and control group were ig the same volume of saline. The fresh stools of mice were taken 12 hours after the last administration， and the changes of intestinal flora （Enterobacteriaceae， Enterococcus， Bifidobacterium and Lactobacillus） were detected. Results The number of beneficial bacteria——Bifidobacterium and Lactobacillus in intestinal tract were significantly increased in Huoxiangzhengqishui high， medium and low dose groups; the middle and high dose groups were significantly different from the model control group （P<0.05）， Compared with the blank control group， there was no significant difference （P>0.05）.Conclusion Huoxiangzhengqishui can support the growth of normal intestinal flora and promote the proliferation of beneficial bacteria （Bifidobacterium and Lactobacillus）， which can regulate the imbalance of intestinal flora.
Key words：Huoxiangzhengqishui;Flora imbalance; Agastache rugosa 人肠道菌群数量庞大，正常情况下，肠道菌群和宿主、外界环境建立起一个动态的生态平衡，对人体的健康起着重要作用，任何打破其内外环境的举措都可导致菌群失调，表现为肠道菌群的种类、数量、比例、定位和代谢特征的变化[1]。机体内的菌群生态平衡遭到破坏后可引起二重感染或重叠感染，使机体的生态平衡遭到严重破坏，从而引发腹泻、腹胀等临床症状。临床上菌群失调多见于大剂量使用抗生素和慢性消耗性疾病，部分中药及中成药具有扶植正常菌群生产的作用，可调节菌群失调，从而达到治疗或改善临床症状的作用[2-5]。本院有大量采用藿香正气水治疗菌群失调型腹泻的临床案例，为探讨其作用机制，笔者设计本实验以观察其对菌群失调的影响。
1 实验材料
1.1 实验动物 SPF级昆明种小鼠60只，雌雄各半，体重18～22g。由四川省中医科学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK（川）2013-19，饲养温度18～22℃，相对湿度58%～62%，喂食颗粒标准饲料，自由饮水和摄食，每2天更换1次垫料，正常饲养3d后供试，实验前小鼠饮水、进食正常，状态良好。
1.2 药品与试剂 乳酶生片（批号160408，桂林南药股份有限公司）;盐酸林可霉素针剂（批号160611，天津金耀氨基酸有限公司）;藿香正气水（160607，太极集团有限公司）;Anaero Gen 2.5 litre（英国Oxoid）;琼脂粉、牛肉浸膏、蛋白胨、酵母浸膏（广东环凯生物科技有限公司）;L-半胱氨酸（上海伯奥生物科技有限公司）;伊红美兰培养基（EMB）、改良MRS培养基、改良MC培养基、EC培养基;其余试剂均为分析纯。
2 试验方法
2.1 盐酸林可霉素诱导小鼠肠道菌群失调模型的建立[6-8] 造模前对小鼠禁食不禁水12h，然后灌胃0.30g/mL盐酸林可霉素，0.6mL/次（小鼠每克体重给药7.2mg），2次/d，连续5d，造成小鼠菌群失调。正常对照组给予同体积的生理盐水。于末次给药12h后取小鼠新鲜粪便进行细菌数检测，观察造模情况。与正常对照组比较，若球菌和杆菌数量变化显著，则认为造模成功。
2.2 分组及处理 取造模成功的小鼠50只随机分为藿香正气水高剂量组、藿香正气水中剂量组、藿香正气水低剂量组、乳酶生组和模型组，每组10只，分别给予灌胃 3.0mL·kg-1、1.5mL·kg-1、0.75mL·kg-1的藿香正气水溶液，0.132mg·g-1乳酶生片，均用生理盐水补足到相同给药体积（0.2mL/20g），2次/d，连续给药7d。模型对照组、正常对照组小鼠灌胃同体积的生理盐水。于末次给药12h后取小鼠的新鲜粪便进行细菌数检测。
2.3 粪便的菌群检测[8] 于末次给药12h后通过按压小鼠腹部的方式迫使小鼠排便，收集约1g的新鲜粪便，置带有玻璃珠的无菌小瓶中，以1∶10（W/V）比例加入无菌生理盐水，震荡均匀，作为第一稀释浓度。然后用生理盐水连续10倍稀释至10-7。选用10-6、10-7两个浓度的供试液，取10μL均匀涂布于EMB、EC、MRS、MC平板上。EMB、EC于37℃需氧培养24h，MRS、MC厌氧培养48～72h后观察结果。根据菌落特征以及革兰氏染色结果初步鉴定菌种，并统计菌落数。结果以每克粪便中菌落数的对数表示（lgCFU·g-1）。
2.4 统计学方法 用SPSS17.0软件处理研究数据，实验数据用（x±s）表示，各组间差异采用单因素方差分析，两组间比较采用t检验，P<0.05表示具有统计学意义。
3 实验结果
3.1 小鼠肠道菌群失调模型建立 小鼠连续给予盐酸林可霉素3d后，开始出现腹泻、精神萎靡、扎堆等现象，连续给药5d后，收集小鼠新鲜粪便，检测其细菌变化。由表1可知，模型组小鼠肠球菌、肠杆菌、双歧杆菌、乳酸菌的含量均降低，与正常对照组比较，肠球菌、双歧杆菌含量减低，具有统计学意义（P<0.05）;肠杆菌、乳酸菌含量明显减低，差异具有显著统计学意义（P<0.01）。
3.2 藿香正气水对肠道菌群失调模型小鼠细菌含量的影响 菌群失调模型小鼠通过乳酶生和不同剂量藿香正气水处理后，其肠球菌、肠杆菌、双歧杆菌和乳杆菌含量均显著上升，与模型组比较差异具有统计学意义（P<0.05），与正常對照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。由表2可知，灌胃盐酸林可霉素可制造稳定的菌群失调小鼠模型，造模成功后，模型组小鼠给予生理盐水治疗，其肠球菌、肠杆菌、双歧杆菌和乳杆菌的含量分别为（7.48±0.35） lgCFU·g-1、（8.27±0.37） lgCFU·g-1、（8.14±0.28） lgCFU·g-1、（7.22±0.27） lgCFU·g-1，与正常对照组比较，差异具有统计学意义（P<0.05），尤其是肠杆菌和乳杆菌（P<0.01）。藿香正气水能显著升高肠道菌群失调模型小鼠粪便中肠球菌、肠杆菌、双歧杆菌、乳杆菌的含量。藿香正气水低剂量组（0.75g/kg）与模型组比较，肠球菌、肠杆菌、双歧杆菌和乳杆菌含量均有所升高，但除乳杆菌外，差异均无统计学意义（P>0.05）。藿香正气水中剂量组（1.5g/kg）与模型组比较，肠球菌、肠杆菌、双歧杆菌含量明显升高，差异具有统计学意义（P<0.05），乳杆菌含量升高最为明显，差异均有显著统计学意义（P<0.01）。藿香正气水高剂量组（3.0g/kg）与模型组比较，肠球菌、肠杆菌、双歧杆菌和乳杆菌含量明显升高，差异具有统计学意义（P<0.05）。
4 讨论
目前抗菌药物是最常见引起肠道菌群失调的诱因，抗菌药物使用后将肠道内敏感细菌大量杀死，各菌种间的比例发生较大幅度的变化而超出正常范围的状态，特别是原籍菌的数量和密度下降，而外籍菌的数量和密度升高。抗菌药物所致的肠道菌群失调的主要临床症状为腹泻，本实验应用盐酸林可霉素灌胃造模后小鼠新鲜粪便的菌落数量和种类均明显下降，且给药3d开始出现腹泻症状，随后出现精神萎靡、食欲不振等症状，表明通过此法所制作的肠道菌群失调小鼠模型是可靠的，实验结果可信[9-10]。 多数细菌在同一环境中生存，相互间会形成生物拮抗，避免某一种细菌（特别是致病菌或条件致病菌）成为优势菌，最终对机体产生不良反应，如：呕吐、腹泻等临床症状[7]。藿香正气水主要由藿香、蒼术、陈皮、厚朴、白芷、茯苓、半夏、甘草、紫苏等多味中药组成，具有散寒化湿、和中祛暑的作用，常用于治疗脘腹胀痛、呕吐腹泻以及胃肠感冒等。在临床实践中，发现其对肠道菌群失调型腹泻亦具有良好疗效，为发掘其治病机理，遂设计本实验，以期能初步揭示其治疗肠道菌群失调型腹泻的方式以及物质基础。在本实验中，藿香正气水中、高剂量组均能显著改善盐酸林可霉素所致的肠道菌群失调症状，扶植肠道菌群，恢复肠道健康，表明藿香正气水具有一定调节肠道菌群失调的作用。
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（收稿日期：2019-10-15 编辑：陶希睿）
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