环氧化酶2及癌胚抗原在结肠癌分子病理研究中的作用探讨

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　　 【摘要】 目的：探究COX-2及CEA在结肠癌分子病理研究中的作用。方法：以笔者所在医院于2016年2月-2018年2月收治的60例因患结肠癌而接受手术的患者的组织标本作为研究对象，取患者的新鲜结肠癌组织，包括近、远端癌旁1、2、3 cm的肠壁组织及距肿瘤8 cm处的正常肠壁组织，使用RT-PCR技术检测CEA、COX-2在以上组织中的表达情况，探讨COX-2及CEA在结肠癌分子病理中的作用。结果：肿瘤组织、不同距离肿瘤切缘组织CEA mRNA、COX-2 mRNA 的阳性率随着远离肿瘤而降低。近、远端3 cm的肠壁组织CEA mRNA、COX-2的阳性率与正常肠壁组织差异无统计学意义（P>0.05）。结论：COX-2、CEA可能参与了结肠癌的发生、发展及浸润过程，临床应在术后进行COX-2、CEA检测，这有助于医生通过肿瘤的生物学特征做出正确的临床判断。
　　 【关键词】 癌胚抗原 环氧化酶2 结肠癌 病理
　　 doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.03.029 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2020）03-00-03
　　 [Abstract] Objective： To investigate the role of cyclooxygenase-2 （COX-2） and carcinoembryonic antigen （CEA） in the molecular pathology of colon cancer. Method： The tissue specimens of 60 patients with radical resection of colon cancer treated in our hospital from February 2016 to February 2018 were collected. Fresh colon cancer tissues， distal and proximal adjacent 1， 2 cm and 3 cm intestinal wall tissues and 8 cm normal intestinal wall tissues were collected. The expression of CEA and COX-2 in the above tissues was detected by RT-PCR， and COX-2 was discussed. The role of CEA in molecular pathology of colon cancer. Result： The positive rates of CEA and COX-2 in tumor tissues， incision margin tissues and distant intestinal wall tissues decreased with the distance from the tumor. There was no significant difference between the positive rates of CEA and COX-2 in proximal and distal intestinal wall tissues and that in normal intestinal wall tissues （P<0.05）. Conclusion： COX-2 and CEA may be involved in the occurrence， development and infiltration of colon cancer. Detection of COX-2 and CEA should be performed in clinic after operation， which is helpful for clinicians to make correct judgement on the biological characteristics of colon cancer.
　　 [Key words] Carcinoembryonic antigen Cyclooxygenase 2 Colon cancer Pathology
　　 First-author’s address： Yuebei People’s Hospital， Shaoguan 512025， China
　　 近幾年，结肠癌的发病率逐年升高，已经对人们的健康造成重大的威胁[1]。对于结肠癌，临床的常规治疗方式是手术切除，但手术切除创伤面较大，且术后的复发率较高，因此临床效果并不理想。目前临床对该疾病的病因尚未明确，有观点认为是由慢性溃疡引起的癌变[2]。目前，临床将组织病理学视为判断恶性肿瘤的金标准，但存在阳性表达率较低问题，随着分子生物技术的快速发展，临床迫切需要对肿瘤浸润通过分子的角度进行分析和研究，但迄今为止，针对结肠癌分子边缘的相关研究尚无定论[3-4]。本研究对肿瘤组织、不同距离肿瘤切缘组织环氧化酶2（COX-2）及癌胚抗原（CEA）进行检测，报道如下。
　　1 资料与方法
　　1.1 一般资料
　　 本次研究所选取的研究对象为笔者所在医院于2016年2月-2018年2月所收治的60例因结肠癌至笔者所在医院治疗行的根治术患者的组织标本，纳入标准：（1）资料齐全者;（2）无其他脏器系统病变者;（3）经病理学和手术检查确诊为结肠癌。排除标准：（1）术前经过其他辅助治疗者;（2）患者转院、退出研究、不愿参与本次研究或依从性不佳者。入选患者中男37例，女23例;年龄47～58岁，平均（52.34±5.36）岁，组织病理学：高分化22例，中分化23例，低分化15例，TNM分期：Ⅰ期13例，Ⅱ期17例，Ⅲ期22例，Ⅳ期8例。 　　1.2 方法
　　1.2.1 标本制备 结肠癌手术标本，肠管切开，中性福尔马林充分固定24 h，分别取肿瘤组织、近端1、2、3 cm处的组织以及远端1、2、3 cm处的组织，以及距肿瘤8 cm处的正常肠壁组织，共8处作为标本，经常规脱水、包埋，制成石蜡组织保存。
　　1.2.2 组织总RNA提取 使用QIAGEM公司FFPE RNA提取试剂盒提取RNA，紫外分光光度计检测RNA的浓度和纯度。
　　1.2.3 cDNA逆转录 使用Promega公司逆转录酶进行逆转录：取2 μl RNA样品在70 ℃保温10 min，随后加入25 mmol/L MgCl2，4 μl;10X逆转录酶2 μl;10 mmol/L dNTP 2 μl，RNA酶抑制剂0.5 μl，Oligo（dT）2 μl;AMV逆转录酶15 U，补加DEPC水至总体积20 μl;42 ℃保温15 min，逆转录反应，合成cDNA第一链。反应后，99 ℃ 5 min灭活逆转录酶。
　　1.2.4 实时荧光定量PCR 相对定量的内参基因是管家基因（β-actin），各基因的引物和探针序列如下：β-actin：上游5’-TGAGCGCGGCTACAGCTT-3’，下游5’-TCCTTAATGTCACGCACGATTT-3’，探针5’-ACC ACCACGGCCGAGCGG-3’;CEA：上游5’-GAAAGAGCAGGCAGCAGAGA-3’，下游5’-TAGTGAGCTTGGCAGTGGTG-3’，探针5’-CACAGAGAATGCATCC-3’;COX-2：上游5’-GTTCCACCCGCAGTACAGAA-3’，下游5’-AGGGCTTCAGCATAAAGCGT-3’，探针5’-TTCCATTGACCAGAGCA-3’。
　　1.3 统计学处理
　　 将实时荧光定量PCR所得数据用2-△△CT法处理，△△CT=试验组（CT目标基因-CT内参基因）-对照组（CT目标基因-CT内参基因），对照组为正常肠壁组织，目标基因为CEA、COX2，内参基因为β-actin，得出不同部位组织中CEA、COX2相对于β-actin的表达量，以1为界，大于1的为高表达，小于1的为低表达，再进行统计学分析。
　　 采用SPSS 20.0统计软件对研究数据进行分析，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
　　2 结果
　　 肿瘤组织、正常肠组织、不同距离肿瘤切缘组织CEA mRNA、COX-2 mRNA的表达情况如表1所示。随着离肿瘤距离的增加，CEA mRNA、COX-2 mRNA高表达的阳性率下降，表达水平均值降低。近端切缘1、2cm、远端切缘1、2cm处CEA mRNA、COX-2 mRNA的表达水平与肿瘤组织相比，差异无统计学意义（P>0.05）。近端切缘3 cm、远端切缘3 cm处CEA mRNA、COX-2 mRNA的表达水平与肿瘤组织相比，差异有统计学意义（P<0.05），近端切缘3 cm、远端3 cm的肠壁组织CEA mRNA、COX-2的阳性率与正常肠壁组织差异无统计学意义P>0.05。表明近端切缘3 cm、远端切缘3 cm处的CEA mRNA、COX-2 mRNA的表达水平明显低于肿瘤组织，与正常肠壁组织接近。
　　3 讨论
　　 结肠对人有重要的作用，如果罹患结肠癌，会影响患者的消化系统，对正常的学习和工作造成极大的影响，因此应尽早治疗。根据相关文献显示，结肠癌是一种较为复杂、发病部位位于结肠黏膜上的消化道疾病，结肠癌会随着病情的发展，出现多种的并发症，而手术治疗是目前应用最广泛、疗效最为可靠的治疗方式[5-7]。
　　 自1999年国内学者通过检测食管癌手术切缘组织而提出“分子切缘”概念后，临床长期从分子水平进行手术切缘的研究，而国内外关于CEA和COX-2与结肠癌分子边缘的关系的研究较少[8-10]。研究发现，CEA在结肠癌中的阳性表达率达到90%以上，而COX-2在结肠癌组织中的表达率也高于80%[11-12]。本研究中，CEA高表达阳性率达95.00%，COX-2高表达阳性率为71.67%，这与研究结果存在偏差，可能与研究例数较少有关。正常结肠组织中两指标的阳性率分别为16.67%（10/60）和21.67%（13/60），本研究发现，距离肿瘤近、远端3 cm的肠壁组织CEA mRNA、COX-2的阳性率与正常肠壁组织无显著差异（P<0.05），分别为13.33%、13.33%、20.00%、23.33%，提示远、近端距肿瘤3 cm处可能为正常肠壁组织。在远、近端1、2 cm癌旁组织及结肠癌组织中的CEA mRNA和COX-2 mRNA表达显著较高，这与在其他上皮性肿瘤中观察到的，CEA和C0X-2表达从正常组织到癌前病变到癌呈进行性升高相一致。而这一结果也提示，距离越近表达越接近肿瘤组织，提示CEA和COX-2可能参与了结肠癌的发生、发展及浸润过程，这与在其他上皮性肿瘤中观察到的CEA和COX-2表達变化相一致。
　　 综上所述，COX-2、CEA可能参与了结肠癌的发生、发展及浸润过程，可作为结肠癌分子边缘研究的分子标志物。
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　　（收稿日期：2019-10-10） （本文编辑：张亮亮）
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