HMGB1、MMP-9及VEGF-C在老年肺癌患者组织中水平变化及意义研究

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　　[摘要] 目的 探讨HMGB1、MMP-9及VEGF-C在老年肺癌患者组织中的水平变化及意义。方法 方便选取2018年1月—2019年3月该院收治的60例老年肺癌患者和36例癌旁组织（距肺癌病灶2 cm）标本作为研究对象，比較两组患者HMGB1、MMP-9、VEGF-C阳性表达情况，并探讨肺癌组织中HMGB1、MMP-9及VEGF-C表达与临床病理特征的关系。结果 肺癌组患者HMGB1、MMP-9及VEGF-C阳性表达率（63.3%、70.0%、66.7%）显著高于癌旁组（31.4%、28.6%、0.0%），差异有统计学意义（χ2=13.046、9.259、5.392，P<0.05）;肺癌组织中HMGB1、MMP-9、VEGF-C表达与性别、年龄、分化程度无关，差异无统计学意义（P>0.05）;腺癌、有淋巴结转移的HMGB1、MMP-9、VEGF-C阳性表达率（76.5%、79.4%、82.4%;85.7%、89.3%、82.1%）显著高于鳞癌、无淋巴结转移（50.0%、26.9%、50.0%;46.9%、56.3%、53.1%），差异有统计学意义（χ2=7.126、5.336、4.825、10.392、3.503、5.177，P<0.05）。 结论 肺癌组患者HMGB1、MMP-9及VEGF-C阳性表达率均显著高于癌旁组，肺癌组织中HMGB1、MMP-9、VEGF-C阳性表达与组织学分型和无淋巴结转移有关。
　　[关键词] 肺癌; 高迁移率族蛋白B1; 基质金属蛋白酶-9; 血管内皮生长因子-C
　　[Abstract] Objective To investigate the changes and significance of HMGB1， MMP-9 and vascular endothelial growth factor-C in elderly patients with lung cancer. Methods From January 2018 to March 2019， 60 elderly patients with lung cancer and 36 adjacent tissues （2 cm away from the lesion of lung cancer） were convenient selected as the study subjects. The positive expression of HMGB1， MMP-9 and VEGF-C in the two groups were compared， and the relationship between the expression of HMGB1， MMP-9 and VEGF-C in lung cancer tissues and clinicopathological characteristics was discussed. Results The positive expression rates of HMGB1， MMP-9 and VEGF-C in lung cancer group （63.3%， 70.0%， 66.7%） were significantly higher than those in para-cancer group （31.4%， 28.6%， 0.0%），the difference was statistically significant（χ2=13.046， 9.259， 5.392， P<0.05）; the expressions of HMGB1， MMP-9 and VEGF-C in lung cancer tissues were not related to sex， age and differentiation degree，the difference was notstatistically significant （P>0.05）; the positive expression rates of HMGB1， MMP-9 and VEGF-C in adenocarcinoma， lymph node metastasis （76.5%， 79.4%， 82.4%; 85.7%， 89.3%， 82.1%） were significantly higher than those of squamous cell carcinoma and non-lymph node metastasis （50.0%， 26.9%， 50.0%; 46.9%， 56.3%， 53.1%），the difference was statistically significant（χ2=7.126， 5.336， 4.825， 10.392， 3.503， 5.177， P<0.05）. Conclusion The positive expression rates of HMGB1， MMP-9 and VEGF-C in lung cancer group were significantly higher than those in adjacent group. The positive expression rates of HMGB1， MMP-9 and VEGF-C in lung cancer tissue were related to histological classification and lymph node metastasis.
　　[Key words] Lung cancer; High mobility group protein B1; Matrix metalloproteinase-9; Vascular endothelial growth factor-C 　　肺癌属于目前全球最常见的恶性肿瘤之一，其发病率及死亡率居于首位。作为肺癌的高发群体，老年人多合并基础疾病，治疗难度大，预后不理想。早期诊断、治疗老年肺癌可有效改善患者预后，提升生活质量。既往研究[1]指出，作为一种晚期炎症介质，高迁移率族蛋白B1（high mobility group box protein B1，HMGB1）參与了肺组织病变过程。MMP-9是基质金属蛋白酶（MMP） 家族中的一员，可促进肿瘤的侵袭和转移[2]。作为一种淋巴管生成因子，血管内皮生长因子（VEGF）-C可诱导血管及淋巴管的生成、生长[3]。该研究方便选取2018年1月—2019年3月该院收治的60例老年肺癌患者探讨HMGB1、MMP-9及VEGF-C在老年肺癌患者组织中的水平变化及意义，旨在为临床诊断和治疗提供参考，现报道如下。
　　1  资料与方法
　　1.1  一般资料
　　方便选取该院收治的60例老年肺癌患者作为研究对象，均经临床病理学检查确诊。纳入标准：生存期超过3个月;临床资料齐全者;患者知情同意;排除标准：既往接受过放化疗治疗者;伴有严重心、肝、肾功能障碍者;合并其他恶性肿瘤者。上述全部老年肺癌患者中男38例，女22例，年龄58～82岁，平均年龄（69.3±8.6）岁，组织学类型：鳞癌26例，腺癌34例，分化程度： 高分化18例，中分化16 例，低分化26例，有淋巴结转移28例，无淋巴结转移32例。收集36例癌旁组织（距肺癌病灶2cm）标本，全部患者中男20例，女16例，年龄61～83岁，平均年龄（68.6±6.7）岁，两组患者基线资料差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。该院伦理委员会批准该研究试验方案。
　　1.2  免疫组化
　　标本常规脱水，4%甲醛固定和石蜡包埋后连续切片，切片经二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡、梯度酒精水化、抗原热修复，冷却至室温后以磷酸盐缓冲液（PBS）进行3次冲洗，滴加3%去离子水孵育15 min，阻断内源性过氧化物酶，再以PBS冲洗3次。滴加A 试剂（封闭用正常山羊血清工作液） ，37℃下封闭15 min，再以滤纸吸去血清， 滴加一抗（VEGF-C多克隆抗体购自于北京中杉金桥生物技术有限公司，HMGB1、MMP-9多克隆抗体购自于北京博奥森生物试剂有限公司），4℃下过夜，室温放置60 min，PBS冲洗3次，再加B 试剂（生物素化二抗工作液），37℃下反应15 min， PBS冲洗3次， 滴加C试剂（链霉卵白素+辣根酶标记生物素试剂（SABC），37℃下静置20 min， PBS冲洗3次，DAB显色剂显色，再依次进行苏木素溶液复染、盐酸酒精分化及梯度酒精脱水，二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明处理，滴加中性树胶封片，晾干，以 PBS液代替一抗作为阴性对照。
　　1.3  结果判定
　　每张切片随机选取8个高倍（400倍）视野，MMP-9蛋白阳性细胞为主要定位于的细胞质呈棕黄色，具体判定如下：阳性细胞率50%及以上为3分，阳性细胞率介于10%～50%为2分，阳性细胞率低于10%为1分; 染色强度为棕黄色记3分，黄色为2分，淡黄色为1分，无染色为0分，最后得分为染色强度得分乘以阳性细胞率得分，总得分<3分则为阴性，≥3分为阳性。HMGB1、VEGF-C蛋白阳性细胞为主要定位于的细胞核及细胞质呈棕色，阳性细胞表达百分率<30%为阴性，≥30%为阳性[4]。
　　1.4  统计方法
　　数据应用SPSS 19.0统计学软件进行分析，其中计数资料采用[n（%）]表示，进行χ2检验，计量资料采用（x±s）表示，进行t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
　　2  结果
　　2.1  两组患者HMGB1、MMP-9及VEGF-C阳性表达情况比较
　　相比于癌旁组，肺癌组患者HMGB1、MMP-9及VEGF-C阳性表达率均显著升高，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。
　　2.2  肺癌组织中HMGB1、MMP-9及VEGF-C表达与临床病理特征的关系
　　肺癌组织中HMGB1、MMP-9、VEGF-C表达与性别、年龄、分化程度无关，差异无统计学意义（P>0.05）;相比于鳞癌、无淋巴结转移，腺癌、有淋巴结转移的HMGB1、MMP-9、VEGF-C阳性表达率显著升高，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。
　　3  讨论
　　作为严重威胁人类生命健康的常见恶性肿瘤之一，肺癌的致死率高，浸润性生长及转移是其主要原因，而肿瘤细胞的浸润、转移主要与蛋白的表达有关[5]。HMGB1是一种与肿瘤发生及发展密切关系的染色质蛋白，可通过提高组织纤溶酶原激活物活性增加肿瘤细胞侵袭性，与此同时，其结合配体糖基化终产物受体后可激活p42/p44、JNK等信号通路，激活MMPs家族，加速细胞外基质降解，增加肿瘤细胞侵袭及转移[6]。有学者提出肿瘤侵袭三步学说（降解、粘附、移动），肿瘤侵袭、转移的重要步骤则是降解细胞外基质，而作为细胞外基质降解过程中重要酶类的基质金属蛋白酶家族（MMPs） 参与了肿瘤侵袭及转移等病理过程。MMP-9是MMPs中分子量最大的酶，可在促进癌细胞沿缺失的基膜向周围组织浸润的同时通过促进肿瘤内毛细血管新生，进而加速肿瘤侵袭、转移及生长、扩散[7]。VEGF-C正常情况下仅在呼吸道内分泌细胞及消化道黏膜低表达，在前列腺癌、肺癌等肿瘤组织中高表达。其是一种能促进淋巴管和血管生成及生长的因子，为肿瘤的生长提供氧气及营养[8]。该研究得到肺癌组患者HMGB1、MMP-9及VEGF-C阳性表达率（63.3%、70.0%、66.7%）显著高于癌旁组（31.4%、28.6%、0.0%），差异有统计学意义（P<0.05），既往研究[4]得到肺癌患者中HMGB1、MMP-9及VEGF-C阳性表达率64.13%、70.65%、67.53%，与该研究结果一致，证实了检测上述蛋白水平可用于肺癌的诊断;另外，肺癌组织中HMGB1、MMP-9、VEGF-C阳性表达与组织学分型和无淋巴结转移有关，差异有统计学意义（P<0.05），由于相比于鳞癌，腺癌的侵袭、转移现象更为严重，同时对于存在淋巴结转移，病情严重程度加重，HMGB1、MMP-9、VEGF-C亦高表达。
　　综上所述，肺癌组织中HMGB1、MMP-9、VEGF-C高阳性表达，且表达情况与组织学分型和无淋巴结转移有关，可作为评估老年肺癌患者治疗和预后的重要指标。
　　[参考文献]
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　　[6]  袁玉亮. HMGB1在AECOPD、肺炎、肺癌患者中的表达水平及临床意义研究[J]. 国际检验医学杂志，2017，38（7）：988-990.
　　[7]  薛慧君，方圆，杨娟利，等. 非小细胞肺癌组织MMP-2、MMP-9的表达与组织学类型及临床分期的关系[J]. 现代生物医学进展，2018，18（20）：3870-3873.
　　[8]  秦跃红，王功朝，刘滨，等.星形细胞肿瘤组织中VEGF-A、VEGF-C的表达变化及其与肿瘤血管生成的关系[J].山东医药，2014，54（15）：1-3.
　　（收稿日期：2019-11-28）
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