慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗后T淋巴细胞亚群及补体C3、C4水平变化

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　　[摘要] 目的 分析慢性乙型肝炎患者在抗病毒治療前后T淋巴细胞亚群及补体C3、C4水平变化。 方法 选取我院2017年1～12月感染科收治的慢性乙型肝炎患者52例作为观察组，同时选取同期健康体检人群30 例作为对照组。分别于治疗前和治疗1、2个疗程后检测肝功能、T淋巴细胞亚群、补体C3及C4水平。 结果 治疗前，观察组患者肝功能各指标较对照组明显升高（P<0.01），CD3+、CD4+细胞及CD4+/CD8+值、补体C3、C4水平较对照组明显降低（P<0.01），而CD8+淋巴细胞明显升高（P<0.01）。治疗1个疗程后，与治疗前相比，肝功能各指标明显下降（P<0.01），CD4+细胞、CD4+/CD8+值及补体C3、C4水平均明显升高（P<0.01），CD8+细胞明显下降（P<0.01）;治疗2个疗程后，肝功能各指标、T淋巴细胞亚群、补体C3及C4水平均进一步改善（P<0.01），趋向于正常。同时，研究期间观察组患者并未出现与治疗药物相关的不良反应。 结论 慢性乙型肝炎患者处于免疫抑制状态，给予抗病毒治疗后，T淋巴细胞亚群及补体C3、C4水平得到改善，免疫功能恢复，有益于病毒清除和病情控制。
　　[关键词] T淋巴细胞亚群;补体C3;补体C4;肝功能;慢性乙型肝炎
　　[中图分类号] R512.6+2          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2019）12-0004-05
　　Changes of T lymphocyte subsets and complement C3 and C4 levels in patients with chronic hepatitis B after anti-viral therapy
　　CHEN Xiuming1   LI Yuecui2   HU Weiyue2   YING Xiaoyan2   XU Xiangwei3
　　1.Department of Blood Transfusion，Yongkang First People's Hospital in Zhejiang Province，Yongkang   321300，China;2.Department of Infectious Diseases，Yongkang First People's Hospital in Zhejiang Province，Yongkang   321300，China;3.Department of Clinical Pharmacy，Yongkang First People's Hospital in Zhejiang Province，Yongkang   321300，China
　　[Abstract] Objective To analyze the changes of T lymphocyte subsets and complement C3 and C4 levels in patients with chronic hepatitis B before and after antiviral therapy. Methods A total of 52 patients with chronic hepatitis B admitted in the Department of Infectious Diseases from January 2017 to December 2017 were enrolled in the study. At the same time， 30 healthy people in the same period were selected as the control group. Liver function， T lymphocyte subsets， complement C3 and C4 levels were measured before treatment， after 1 and 2 courses of treatment. Results Before treatment， the liver function indexes of the observation group were significantly higher than those of the control group（P<0.01）. The levels of CD3+， CD4+ cells， CD4+/CD8+， complement C3 and C4 in the observation group were significantly lower than those of the control group（P<0.01）. While CD8+ lymphocytes were significantly elevated（P<0.01）. Compared with those before treatment， liver function indexes after 1 course of treatment decreased significantly（P<0.01）， CD4+ cells， CD4+/CD8+ values and complement C3 and C4 levels were significantly increased（P<0.01）， CD8+ cells were obviously decreased（P<0.01）. After 2 courses of treatment， liver function indexes， T lymphocyte subsets， complement C3 and C4 levels were further improved（P<0.01）， which tended to be normal. At the same time， patients in the observation group did not develop adverse drug-related adverse effects during the study period. Conclusion Patients with chronic hepatitis B are in an immunosuppressive state. After antiviral therapy， the levels of T lymphocyte subsets， complement C3 and C4 are improved， and immune function is restored， which is beneficial to virus clearance and disease control. 　　[Key words] T lymphocyte subsets;Complement C3;Complement C4;Liver function;Chronic hepatitis B
　　我国是乙型肝炎病毒（hepatitis B Virus，HBV）高感染国家，近年来通过国家免疫规划，1～4岁、5～14岁及5～29岁人群乙肝表面抗原携带率分别为0.32%、0.94%及4.38%，但由于我国人口基数庞大，HBV感染仍是当前社会关注的重点[1，2]。HBV进入机体后，通过侵入肝细胞，进入感染细胞核内，形成共价闭合环状DNA（covalently closed circular DNA，cccDNA），在机体免疫功能不足时，病毒以cccDNA为模板大量复制[3]。HBV感染半年以上被定义为慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB），此类患者免疫功能紊乱，不能产生有效的免疫反应清除病毒，是HBV的主要传染源[4]。有研究显示，T淋巴细胞是机体抵御外界病原体侵犯及监控自身细胞变异的有力武器，可分泌多种细胞毒性因子并直接接触靶细胞有效杀灭病原体和自身变异细胞[5，6]。补体是一类具有酶活性的蛋白质，主要存在于血清与组织液中，是体液免疫组成之一，可抵抗病原体侵袭、免疫调节及维护内环境稳定[7]。T淋巴细胞亚群免疫调节功能下降、补体调节失衡，是导致机体不能高效杀灭病毒、病情迁延及造成肝细胞持续受损的主要因素。本研究主要讨论CHB患者肝功能、T淋巴细胞亚群和补体C3、C4水平以及经过抗病毒治疗后上述指标的变化。
　　1 资料与方法
　　1.1 一般资料
　　选择2017年1～12月本院感染性肝病科收治的慢性乙型肝炎患者52例。纳入标准：①符合2015年《中国慢性乙型肝炎防治指南》中CHB诊断标准[8];②HBV-DNA含量≥1×102 IU/mL，呈阳性;③近6个月内未进行相关抗病毒治疗患者，且近1个月内未应用保肝降酶药物;④年龄18～70周岁。排除标准[9]：①年龄<18岁或>70岁;②同时或重叠感染其他类型病毒性肝炎;③经检查证实由药物中毒、乙醇中毒等因素所致的肝炎及自身免疫性肝炎;④合并严重的心脑血管、肺、肾、内分泌和造血系统严重原发性疾病或精神病患者;⑤妊娠或准备妊娠的妇女，哺乳期妇女。共入选52例符合标准的CHB患者为观察组，其中男29例，女23例;年龄21～65岁，平均（48.13±12.65）岁。同时，选取30例同期健康体检成人作为对照组，其中男16例，女14例;年龄23～62岁，平均（47.07±10.45）岁。两组患者的性别比例、平均年龄比较均无统计学差异（χ2=0.046，t=0.693，P>0.05），具有可比性。本研究所有患者于研究前均签署相关知情同意书，且获得医院临床课题医学伦理审查及批准。
　　1.2 研究方法
　　所有入选的CHB患者（观察组）均按照2015年《中国慢性乙型肝炎防治指南》推荐的治疗方案治疗：给予恩替卡韦分散片（江苏正大天晴，规格：0.5 mg/片，批号：160417105，171117102，180317103等），0.5 mg/次，1 次/d，3个月为1个疗程，共2个疗程，分别于治疗前、治疗1个疗程后、治疗2个疗程后三个时间段抽取CHB患者空腹肘静脉血，用于检测肝功能、T淋巴细胞亚群及补体C3、C4水平的变化。同时记录患者观察期间出现的药物不良反应情况。
　　1.3 检测方法
　　肝功能检测：使用全自动生化分析仪（SIEMENS，型号：ADVIAI2400）测定丙氨酸氨基转移酶（Alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸氨基轉移酶（Aspartate aminotransferase，AST）、谷氨酰转肽酶（Glutamyl peptidase，GGT）、总胆红素（Total bilirubin，TBIL）等肝功能指标水平。ALT正常范围：≤50 U/L，AST正常范围：≤40 U/L，GGT正常范围≤60 U/L，TBIL正常范围：（5～28） μmol/L。
　　T淋巴细胞亚群检测：采用流式细胞计数仪（BD，型号：FACSCanto Ⅱ）通过荧光探针，从分子水平上获取多种信号对细胞进行定量，可以直接测定分析出T淋巴细胞亚群百分率。正常参考范围：CD3+：50%～84%，CD4+：27%～51%，CD8+：15%～44%，CD4+/CD8+：0.71～2.87。
　　补体C检测：采用免疫散射比浊法通过全自动特定蛋白分析仪（SIEMENS，型号：BNⅡ system）进行补体C3、C4检测。正常参考范围：补体C3：（0.9～1.8）g/L;补体C4：（0.1～0.4）g/L。
　　1.4 统计学分析
　　数据统计及分析主要通过SPSS17.0软件，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两组间均数比较采用两独立样本t检验;多组均数间比较采用方差分析，组间两两比较采用LSD法;计数资料用χ2检验（双侧）。P<0.05表示差异具有统计学意义。
　　2 结果
　　2.1 两组肝功能相关指标比较
　　治疗前，与对照组比较，CHB组患者肝功能指标ALT、AST、GGT及TBIL均明显升高，差异有统计学意义（P<0.01），见表1。
　　2.2 CHB患者不同治疗时期肝功能相关指标比较
　　通过指南给予规范化治疗后，观察组肝功能各指标不同治疗时期均有统计学差异（P<0.01）。各时期两两比较，经过1个疗程（3个月）药物治疗，观察组患者与治疗前比较，肝功能各指标均明显下降（P<0.01）。治疗2个疗程（6个月）后，肝功能各指标进一步下降（P<0.01），且与治疗1个疗程比较，具有统计学差异（P<0.01）。见表2。 　　2.3 两组T淋巴细胞亚群比较
　　治疗前，与对照组比较，观察组患者CD3+、CD4+细胞及CD4+/CD8+值均明显下降（P<0.01），CD8+淋巴细胞显著升高，差异具有统计学意义（P<0.01），提示CHB患者免疫细胞处于抑制状态，见表3。
　　2.4 观察组患者不同治疗时期T淋巴细胞亚群比较
　　通过治疗后，观察组患者T淋巴细胞亚群在不同治疗时期均有统计学差异（P<0.05）。各时期两两比较，经过1个疗程（3个月）药物治疗，观察组患者与治疗前比较，CD4+细胞及CD4+/CD8+均明显升高（P<0.01），CD8+细胞明显下降（P<0.05）。治疗2个疗程（6个月）后，与治疗前比较，CD3+、CD4+细胞及CD4+/CD8+均明显升高（P<0.05），CD8+细胞明显下降（P<0.01）;且治疗与1个疗程相比T淋巴细胞亚群各指标进一步改善，CD4+细胞及CD4+/CD8+均明显升高（P<0.01），CD8+细胞明显下降（P<0.05）。见表4。
　　2.5 两组补体C3、C4比较
　　治疗前，与对照组比较，观察组患者补体C3、C4水平均明显下降，有统计学差异（P<0.01），提示CHB患者补体系统失衡，处于免疫抑制状态。见表5。
　　2.6 观察组患者不同治疗时期补体C3、C4水平比较
　　通过治疗后，观察组补体C3、C4水平在不同治疗时期均有统计学差异（P<0.01）。各时期两两比较，经过1个疗程（3个月）药物治疗，观察组患者与治疗前比较，补体C3、C4均明显升高（P<0.01）。治疗2个疗程（6个月）后，补体C3、C4进一步升高（P<0.01），且与治疗1个疗程比较，具有统计学差异（P<0.01）。见表6。
　　2.7 CHB患者治疗期间不良反应发生情况
　　CHB患者入院后给予恩替卡韦分散片治疗，所有患者均顺利完成2个疗程药物治疗，在研究期间，未出现与该治疗方案相关的不良反应。
　　
　　3讨论
　　HBV感染后，宿主的细胞免疫应答与HBV病毒复制、清除及感染后的临床症状有关。T淋巴细胞亚群能够维持机体正常免疫平衡，主要分为CD4+辅助/诱导T细胞亚群（Th/Ti）及CD8+细胞毒性/抑制T细胞亚群（Tc/Ts）。CD4+细胞在受到HBV刺激后，能协调体液免疫和细胞免疫应答，产生大量效应细胞产生抗病毒作用，而CD8+细胞则具有体液、细胞免疫抑制作用[10]。同时，当肝脏受到生理病理性损伤时，大量抗原抗体复合物的产生刺激机体激活补体系统，补体是一组经活化后具有酶活性的蛋白，其中C3、C4蛋白是补体系统中重要组成蛋白，参与抗病毒相关的免疫应答[11]。近年来针对CHB患者以T淋巴细胞亚群和补体C3、C4为代表的细胞免疫功能临床研究大量开展，逐步发现CHB的发生、发展及治疗预后与其具有密切相关性[12，13]。
　　在本研究中，CHB患者肝功能相关指标明显低于健康人群（P<0.01），HBV 感染造成肝脏的损害。同时CHB患者其免疫机能异常紊乱，CD4+细胞明显下降（P<0.01），CD8+细胞显著升高（P<0.01），补体C3、C4水平亦明显低于健康人群。与强占荣等[14]及梁志军等[15]相近，提示HBV入侵机体后，迅速地复制及增殖，在肝细胞表面表达特异性抗原，引起机体产生特异性的细胞及体液免疫应答。而当CD4+细胞数量下降，机体产生的抗体无法完全清除体内过多的HBV时，导致感染的持续进行，进而造成肝细胞的坏死及肝组织炎症改变。同时，血清补体大部分在肝脏内合成，肝脏表明同时表达多种补体受体。当肝脏发生炎症损伤时，其合成会减少，特别是与免疫应答相关的C3、C4。此外，HBV感染導致补体系统代谢途径和经典途径被异常激活，促进补体过度消耗，补体含量下降。HBV-DNA与血清补体C3、C4水平密切相关，患者病情越严重，补体C3、C4水平越低。有研究结果表明，当C3水平缓慢下降，应考虑慢性肝炎可能，而当C3水平迅速下降时应考虑肝硬化[16]。
　　乙肝慢性化及肝细胞病理损伤被认为是患者免疫功能紊乱而引起的临床症状。抗病毒治疗只能抑制病毒而不能清除HBV感染，只有将抗病毒治疗与免疫调节治疗相结合，提升机体的免疫应答能力，才能更好地抑制、清除病毒[17]。在本研究中，CHB患者经过1、2个疗程抗病毒治疗周期后，T淋巴细胞亚群均得到改善。特别是治疗2个疗程后，CD3+、CD4+细胞及CD4+/CD8+均明显升高（P<0.05），CD8+细胞明显下降（P<0.01）。在Feng X等[18]及张小玉等[19]研究中亦有类似结果报道，经过规范化的抗病毒方案治疗后，可以提高CHB患者T淋巴细胞亚群绝对数，可以部分恢复患者免疫功能，而随着用药疗程的增加，患者细胞免疫功能得到增强，CD4+细胞数量增多使肝细胞表面抗原增多，表达增强。而CD8+数量减少导致免疫抑制因子减少，亦进一步增强机体的免疫应答，有利于HBV病毒的清除。
　　补体系统参与免疫调节，清除体内免疫复合物、辅助机体防御异源物，也可介导免疫病理的损伤性反应。在本研究中，随着患者抗病毒治疗疗程进行，补体C3、C4水平增多，免疫经典途径逐渐激活，体液免疫增强，中和靶细胞上的病毒持续感染。这与蔡青春等[20]结果相似，其报道老年代偿期异常肝硬化患者补体防御能力下降，病情越严重，补体C3和C4水平越低。在给予恩替卡韦抗病毒治疗后，患者肝脏情况得到改善，补体C3、C4水平得到提高，且免疫应答与补体恢复水平呈正相关。
　　综上所述，CHB患者肝功能的各项指标、T淋巴细胞亚群及补体C3、C4水平低于健康患者，肝细胞受到损伤，细胞免疫及体液免疫均处于抑制状态。而经过相应规范化抗病毒药物治疗后，其肝功能得到恢复，T淋巴细胞亚群及补体C3、C4水平得到改善，且随着治疗疗程的进展，患者肝细胞修复程度、机体免疫状态得到进一步的改善，病毒持续被清除，患者病情得到控制。T淋巴细胞亚群及补体C3、C4水平可辅助作为CHB患者治疗预后评估，为治疗方案选择及疗效预测提供依据。 　　
　　[参考文献]
　　[1] 王富珍，张国民，沈立萍，等. 1992和2014年中国不同流行地区1～29岁人群乙型肝炎血清流行病学调查结果对比分析[J]. 中华预防医学杂志，2017，51（6）：462-468.
　　[2] 单姗，贾继东. 我国乙型肝炎防治成就及机遇和挑战[J].中国病毒病杂志，2017，（1）：5-8.
　　[3] Guner R，Karahocagil M，Buyukberber M，et al. Correlation between intrahepatic hepatitis B virus cccDNA levels and other activity markers in patients with HBeAg-negative chronic hepatitis B infection[J]. European Journal of Gastroenterology & Hepatology，2011，23（12）：1185-1191.
　　[4] Razavi-Shearer D，Gamkrelidze I，Nguyen MH，et al. Global prevalence， treatment，and prevention of hepatitis B virus infection in 2016：A modelling study[J]. The Lancet Gastroenterology & Hepatology，2018，3（6）：383-403.
　　[5] Park JJ，Wong DK，Wahed AS，et al. Hepatitis B virus-specific and global T-cell dysfunction in chronic hepatitis B[J]. Gastroenterology，2016，150（3）：684-695.
　　[6] Kah J，Koh S，Volz T，et al. Lymphocytes transiently expressing virus-specific T cell receptors reduce hepatitis B virus infection[J]. Journal of Clinical Investigation，2017， 127（8）：3177-3188.
　　[7] Zhu C，Song H，Xu F，et al. Hepatitis B virus inhibits the expression of complement C3 and C4， in vitro and in vivo[J]. Oncology Letters，2018，15（5）：7459-7463.
　　[8] 王贵强，王福生，成军，等. 慢性乙型肝炎防治指南（2015年版）[J]. 中华实验和临床感染病杂志（电子版）， 2015，19（5）：1-18.
　　[9] 王闻婧. HBeAg阴性慢乙肝患者血清N-糖组学改变及补肾祛邪法抗肝纤维化临床研究[D]. 湖北中医药大学，2017.
　　[10] Appay V，van Lier R A，Sallusto F，et al. Phenotype and function of human T lymphocyte subsets：Consensus and issues[J]. Cytometry Part A，2010，73（11）：975-983.
　　[11] Mahajan SD，Aalinkeel R，Parikh NU，et al. Immunomodulatory role of complement proteins in the neuropathology associated with opiate abuse and HIV-1 co-morbidity[J]. Immunological Investigations，2017，46（8）：816-832.
　　[12] Sarmiento E，Dale J，Arraya M，et al. CD8+DR+ T-Cells and C3 complement serum concentration as potential biomarkers in thrombotic antiphospholipid syndrome[J]. Autoimmune Diseases，2014，2014（4）：868652.
　　[13] 謝容根，张丽华，毕玉珍. 慢性乙型肝炎患者在不同肝功能情况下外周血中的T淋巴细胞亚群、补体C3、补体C4及HBV-DNA的比较[J]. 国际检验医学杂志，2017， 38（14）：1882-1884.
　　[14] 强占荣，易彩霞，刘颖，等. 慢性HBV感染者外周血淋巴细胞亚群及血清IgG和补体检测的临床意义[J]. 内科，2016，11（1）：1-3.
　　[15] 梁志军，李瑞娟，王素娜，等. 乙肝肝硬化对外周血T细胞亚群、免疫球蛋白及补体水平的影响[J]. 陕西医学杂志，2017， 46（12）：1655-1656.
　　[16] Zhu C，Song H，Xu F，et al. Hepatitis B virus inhibits the expression of complement C3 and C4， in vitro and in vivo[J]. Oncology Letters，2018，15（5）：7459-7463.
　　[17] Akbar SM，Almahtab M，Khan MS，et al. Immune therapy for hepatitis B.[J]. Ann Transl Med，2016，4（18）：335.
　　[18] Feng X，Yan HP，Liao HY，et al. [The impact of antiviral therapy on virus-specific T-cell reactivity in patients with chronic hepatitis B][J]. Zhonghua Yi Xue Za Zhi，2012，92（11）：739-742.
　　[19] 张小玉，张红梅，杨永峰，等.恩替卡韦抗病毒治疗后老年慢性乙肝患者外周血T淋巴细胞亚群的变化[J].中华全科医学，2015，13（1）：33-35，137.
　　[20] 蔡青春，颜亮，宋琳岚，等. 恩替卡韦提高老年代偿期乙肝肝硬化患者补体C3、C4水平的作用[J]. 中国老年学杂志，2016，36（2）：385-386.
　　（收稿日期：2018-12-22）
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