绝经后骨质疏松症患者外周血T淋巴细胞亚群检测及临床意义

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　　 【摘要】 目的：观察绝经后骨质疏松症（OP）患者外周血T淋巴细胞亚群的变化，并分析其临床意义。方法：选取笔者所在医院2016年3月-2019年3月60例绝经后女性为研究对象，其中30例OP患者设为OP组，另30例非OP患者设为对照组。两组均采用流式细胞仪检查其外周血T淋巴细胞亚群水平，并进行统计分析。结果：OP组外周血T淋巴细胞、抑制性淋巴细胞（Ts）及辅助性T细胞（Th）均低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。OP组Th/Ts比值、NK细胞（CD16+CD56+）及B淋巴细胞均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：绝经后OP患者的外周血T淋巴细胞亚群改变可能引起T淋巴细胞、Ts、Th降低，导致其体液免疫及免疫应答改变，使绝经期女性发生免疫系统紊乱。
　　 【关键词】 绝经 骨质疏松症 T淋巴细胞亚群
　　 doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.25.026 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2020）25-00-03
　　 [Abstract] Objective： To observe the changes of peripheral blood T lymphocyte subsets in postmenopausal osteoporosis （OP） patients and analyze its clinical significance. Method： A total of 60 postmenopausal women in our hospital from March 2016 to March 2019 were selected as the study objects， among which 30 patients with OP were set as the OP group and the other 30 non-OP patients as the control group. The peripheral blood T lymphocyte subsets of both groups were examined by flow cytometry and analyzed statistically. Result： The levels of peripheral blood T lymphocytes， inhibitory lymphocytes （Ts） and helper T cells （Th） in the OP group were lower than those in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The Th/Ts ratio， NK cell （CD16+CD56+） and B lymphocytes in the OP group were higher than those in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion： The change of T lymphocyte subsets in peripheral blood of postmenopausal OP patients may cause the decrease of T lymphocytes， Ts and Th， resulting in the changes of humoral immunity and immune response， and the immune system disorder of menopausal women.
　　 [Key words] Menopause Osteoporosis T lymphocyte subsets
　　 First-author’s address： Zhongshan Hospital， Xiamen University， Xiamen 361004， China
　　 骨質疏松症（OP）是一种代谢性骨病变，主要症状为骨组织量减少，发生于任何年龄且男女不限，多见于绝经后女性和老年男性[1]。有研究显示，OP与女性体内分泌系统密切相关，特别表现为雌性激素下降，人体免疫细胞因子、生长因子等作为多溶性介质，也可影响骨细胞[2]。人体外周血淋巴细胞主要分为T淋巴细胞、抑制性淋巴细胞（Ts）、辅助性T细胞（Th）、细胞毒性T细胞（Tc）、效应T淋巴细胞（Te）、B淋巴细胞及NK细胞（CD16+CD56+）。有研究表明，绝经后OP患者外周血T淋巴细胞亚群的变化可影响人体免疫功能，抑制免疫应答发生[3]。本研究通过抽取笔者所在医院30例绝经后OP患者与30例绝经后非OP患者，对比分析其外周血T淋巴细胞亚群水平，以期进一步明确OP是否能影响绝经后女性免疫系统，现报道如下。
　　1 资料与方法
　　1.1 一般资料
　　 选取笔者所在医院2016年3月-2019年3月60例绝经后女性为研究对象，纳入标准：（1）均为绝经后妇女;（2）近2个月未接受其他药物治疗。排除标准：（1）近期无新生骨折;（2）长期服用治疗骨组织药物;（3）有自身免疫性疾病、感染性疾病及肿瘤等。其中30例OP患者设为OP组，另30例非OP患者设为对照组。根据世界卫生组织OP诊断标准，T值≥-1.0为骨组织量正常，-2.5<T值<-1.0为骨组织量减少，T值≤-2.5为OP[4-5]。T值=（密度-骨峰值）/标准差，对照组均在-1<T值<1，OP组患者均为T值≤-2.5。OP组年龄43～66岁，平均（55.51±10.28）岁;体质指数（BMI）：20～26 kg/m2，平均（22.46±1.87）kg/m2。对照组年龄44～67岁，平均（56.32±10.94）岁;BMI：21～26 kg/m2，平均（23.17±2.12）kg/m2。两组年龄、BMI等一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），有可比性。本研究经过医院伦理委员会批准。患者及家属签署同意书。 　　1.2 方法
　　 采用流式细胞仪检测两组外周血T淋巴细胞亚群：（1）制備单细胞悬液，将1X10-7的细胞放入1.5 ml离心管中3 000 r/min离心5 min，弃上清液，然后加入FACS缓冲液100 μl悬浮细胞;（2）封闭表面Fc受体，在步骤（1）得到的液体中加入Fc受体抗体0.5 μl（0.5 mg/ml），水浴3 min;（3）细胞与荧光抗体结合，在步骤（2）得到的液体中加入荧光抗体1 μl（0.5 mg/ml），水浴30 min;（4）洗细胞去除游离的荧光抗体，在步骤（3）中加入FACS缓冲液350 μl，轻轻摇晃混匀，放置3 000 r/min的离心机离心5 min，弃上清液，重复步骤此操作2次;（5）上样前处理，取100 μl仪器缓冲液加入细胞沉淀中，轻轻混匀悬浮细胞，将细胞悬液移入FACS专用管中，准备进行仪器检测和分析[6]。
　　1.3 观察指标
　　 比较两组T淋巴细胞、Ts、Th、Th/Ts、CD16+CD56+、B淋巴细胞水平。
　　1.4 统计学处理
　　 本研究数据采用SPSS 19.0统计学软件进行分析和处理，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
　　2 结果
　　2.1 两组外周血T淋巴细胞、Ts、Th比较
　　 OP组T淋巴细胞、Ts、Th均低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。
　　2.2 两组外周血Th/Ts、CD16+CD56+及B淋巴细胞水平比较
　　 OP组外周血Th/Ts、CD16+CD56+及B淋巴细胞水平均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。
　　3 讨论
　　 OP是由于人体正常骨质量低下，骨结构受损引起骨脆性升高的一种全身性骨病，分为原发性和继发性两大类，发病机制包括内分泌系统紊乱、机体代谢紊乱及其他因素，临床上主要症状有腰背疼痛、骨折、呼吸功能下降。人到中老年时期，由于免疫功能低下，可能会引起此疾病产生，部分女性绝经后雌性激素下降也可导致OP发生。有研究显示，绝经年龄可判断OP发病率，即年龄越晚，发病率越低，与女性绝经后体内雌性激素水平下降有关，由于雌性激素能抑制破骨细胞的活性，雌性激素水平越低，破骨细胞活性越强，骨组织吸收量远大于骨形成量[7]。
　　 T细胞是人体内重要的免疫细胞，也是淋巴细胞的主要组分，能直接杀死靶细胞，辅助B细胞产生抗体，其分泌的炎性因子与配体，能有效促进骨组织的形成吸收，另外，T淋巴细胞通过CD40配体及刺激分子，共同调节骨间质细胞及成骨细胞之间的代谢，维持骨形成和骨吸收的动态平衡，这些细胞按功能可分为三个亚群，包括Th、Ts和Tc，Th通过与多肽发生反应并分泌细胞因子，调节机体免疫反应，增生免疫细胞;Th会协助B细胞产生抗体，与巨噬细胞结合后会去辨认抗原，抗原刺激后释放白介素，使得B细胞大量繁殖;Ts能抑制Th活性，从而抑制B细胞分化及Tc杀伤功能，负向调节体液免疫和细胞免疫;Tc分泌各种细胞因子参与免疫作用，能杀死某种病毒及肿瘤细胞等抗原物质，与NK细胞构成机体抗病毒、抗肿瘤免疫的重要防线。本研究中，OP组外周血T淋巴细胞、Ts及Th均低于对照组，表明OP能改变患者T淋巴细胞亚群水平，从而影响免疫系统，使得细胞免疫及体液免疫出现异常，这与刘欣荣等[8]的研究结果一致。OP组Th/Ts比值、CD16+CD56+及B淋巴细胞均高于对照组，也表明T淋巴细胞亚群的变化，导致人体免疫系统紊乱，方虹等[9]的研究结果也证实了这一点。绝经后女性免疫系统与成骨细胞和破骨细胞相互影响，T淋巴细胞亚群的改变导致免疫系统紊乱，进而引起自身免疫性疾病，出现关节、骨骼等功能受损。
　　 T细胞能刺激或抑制成骨细胞、破骨细胞，与其亚群、细胞因子等因素有相似作用，还可产生调节因子影响骨组织与细胞之间的代谢，活化后的T细胞产生破骨细胞必要的效应因子，通过酶切效应因子分泌可溶性因子，对骨转移及绝经后OP患者也起着非常重要的作用，人体B淋巴细胞分化过程为前B细胞、不成熟B细胞、成熟B细胞、活化B细胞和浆细胞。其中前两期增殖分化过程在骨髓中进行，后阶段的增殖分化过程主要在免疫器官中进行，人体淋巴细胞的增殖分化与其骨髓造血微环境处于同一个环境中，可共享微环境中多种细胞因子、调节分子等[10-12]。通过细胞因子调节造血细胞的增殖分化，使得免疫系统与骨骼系统保持动态平衡，当免疫系统处于异常状态，骨骼系统任何功能变化都会导致骨细胞出现严重危害，从而使得免疫功能紊乱。
　　 综上所述，绝经后OP能使T淋巴细胞、Ts、Th指标降低，Th/Ts，CD16+CD56+及B淋巴细胞水平升高，导致患者体液免疫及免疫应答出现相应的改变，使绝经期女性发生免疫系统紊乱。
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　　（收稿日期：2020-03-27） （本文编辑：桑茹南）
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