SLE患者T淋巴细胞亚群、NK细胞与25-羟维生素D水平的相关性及危险因素研究

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　　[摘要] 目的 探討SLE患者T淋巴细胞亚群、NK细胞与25-羟维生素D水平的相关性及分析部分危险因素。方法选取2017年9月～2018年12月在本院就诊的SLE患者共100例（其中活动期组70例，稳定期组30例），另选取同期50例健康体检者为对照组，分别检测各组研究对象的T淋巴细胞亚群、NK细胞、25-羟维生素D、补体、免疫球蛋白、血沉及血常规等项目水平进行比较与分析。 结果SLE活动期组及稳定期组患者的CD3+T细胞及CD8+Ts细胞水平明显高于对照组，而两组的Th/Ts比值、NK细胞均明显低于对照组（P<0.05）。SLE活动期组CD4+Th细胞明显低于对照组，另外其25（OH）D水平明显低于SLE稳定期组及对照组（P<0.05）。SLE活动期及稳定期两组患者的C3及C4水平均明显低于对照组，两病例组的ESR水平明显高于对照组，而SLE活动期组的IgM水平明显低于其他两组，差异均有统计学意义（P<0.05）。SLE活动期组的RBC、HGB、PLT及LYM%的水平较其他两组均明显减低，而NEUT%的水平则明显高于其他两组，差异均有统计学意义（P<0.05）。SLE稳定期组的RBC、NEUT%的水平明显高于对照组，而该组的LYM%的水平则明显低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。Spearman相关性分析结果显示，NK细胞与CD4+Th细胞、25（OH）D、C3、IgA和IgG呈正相关，与CD8+Ts细胞呈负相关（P<0.05）。25（OH）D与CD4+Th细胞、Th/Ts比值、C3、IgA、IgG、RBC、HGB和PLT呈正相关，与ESR呈负相关（P<0.05）。Logistic回归分析结果显示CD3+T细胞、CD8+Ts细胞及ESR是SLE患者的危险因素，而25（OH）D、NK细胞、C3、HGB及PLT为保护因素。 结论T淋巴细胞亚群、NK细胞与25（OH）D等异常与SLE患者发生发展密切相关，联合检测补体、免疫球蛋白、血沉等对SLE患者活动性具有警示的临床应用价值，检验多项目综合检测筛查危险因素对SLE的诊疗及改善预后有重要的指导意义。
　　[关键词] 系统性红斑狼疮;T淋巴细胞亚群;NK细胞;25-羟维生素D;危险因素
　　[中图分类号] R593.241          [文献标识码] B          [文章编号] 1673-9701（2020）01-0134-05
　　Correlation and risk factors of T lymphocyte subsets， NK cells and 25-hydroxyvitamin D levels in the patients with SLE
　　ZOU Guangmei1   HUANG Chaoren2   CHEN Wu1   WU Bowen1   LU Ying1
　　1.Department of Clinical Laboratory， Yulin First People’s Hospital in Guangxi Zhuang Autonomous Region， Yulin 537000， China; 2.Department of Clinical Laboratory， Yulin Hospital of TCM in Guangxi Zhuang Autonomous Region， Yulin   537000， China
　　[Abstract] Objective To investigate the correlation between T lymphocyte subsets， NK cells and 25-hydroxyvitamin D levels in the patients with SLE and to analyze some risk factors. Methods A total of 100 patients with SLE who were admitted to our hospital from September 2017 to December 2018 were selected （70 cases in the active phase group and 30 cases in the stable phase group）. Another 50 healthy subjects were selected as the control group during the same period. The levels of T lymphocyte subsets， NK cells， 25-hydroxyvitamin D， complement， immunoglobulin， erythrocyte sedimentation rate and blood routine test were detected in each group， and compared and analyzed. Results The levels of CD3+T cells and CD8+Ts cells in the SLE active phase group and the stable phase group were significantly higher than those in the control group. The ratio of Th/Ts and NK cells in the two groups were significantly lower than those in the control group （P<0.05）. The CD4+Th cells in the SLE active phase group were significantly lower than those in the control group. In addition， the 25（OH）D level was significantly lower than that in the SLE stable phase group and the control group （P<0.05）. The levels of C3 and C4 in the SLE active phase group and the stable phase group were significantly lower than those in the control group，and the levels of ESR in the SLE active phase group and the stable phase group were significantly higher than those in the control group.The levels of IgM in the SLE active phase group was significantly lower than that in the other two groups，with significantly differences（P<0.05）.The levels of RBC， HGB， PLT and LYM% in the SLE active phase group were significantly lower than those in the other two groups，with significantly differences（P<0.05）， and the levels of NEUT% in the SLE active phase group were significantly higher than those in the other two groups，with significantly differences（P<0.05）. The levels of RBC， NEUT% in the SLE stable phase group were significantly higher than those in the control group，and the levels of LYM% in the SLE stable phase group was significantly lower than that in the control group，with significantly differences（P<0.05） Spearman correlation analysis showed that NK cells were positively correlated with CD4+Th cells， 25（OH）D， C3， IgA and IgG， and negatively correlated with CD8+Ts cells （P<0.05）. 25（OH）D was positively correlated with CD4+Th cells， Th/Ts ratio， C3， IgA， IgG， RBC， HGB and PLT， and negatively correlated with ESR （P<0.05）. Logistic regression analysis showed that CD3+T cells， CD8+Ts cells and ESR were risk factors for the patients with SLE， and 25（OH）D， NK cells， C3， HGB and PLT were protective factors. Conclusion Abnormal T lymphocyte subsets， NK cells and 25（OH）D are closely related to the occurrence and development of SLE. Combined detection of complement， immunoglobulin， and erythrocyte sedimentation rate has clinical application values for alerting the activity of SLE patients. The testing of multi-item comprehensive detection and screening for risk factors has an important guiding significance for the diagnosis and treatment of SLE and prognosis improvement. 　　[Key words] Systemic lupus erythematosus （SLE）; T lymphocyte subsets; NK cells; 25-hydroxyvitamin D; Risk factors
　　系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种慢性自身免疫性疾病，其发病特点是好发于育龄期女性，通过自身抗体的异常升高，免疫复合物的沉积和参与多器官系统损伤，该病有较高患病率及病死率[1]。SLE发病机制复杂，免疫系统紊乱贯穿整个发病过程中，研究发现其可能与T细胞、B细胞、单核细胞等过度活化导致的免疫异常应答等有密切关系[2]。NK细胞不仅能发挥直接杀伤的作用，同时还能分泌一系列可溶性的趋化因子和细胞因子，从而起到免疫调节的作用，已有文献报道NK细胞的数量在SLE患者体内明显降低，但其中的具体机制还不明确[3]。维生素D受体广泛分布于多种免疫细胞表面，国内外多项研究表明 SLE患者中普遍存在25-羟维生素D的缺乏，25（OH）D在T淋巴细胞的免疫调节作用已经得到高度重视[4]。此外，SLE患者的补体、免疫球蛋白、血沉及血常规也存在着不同程度的异常，本研究探討T细胞亚群、NK细胞及25-羟维生素D水平的相关性在国内尚无报道，同时分析其他部分检验项目的相关危险因素，进而为SLE患者的临床诊疗价值提供重要参考。
　　1 资料与方法
　　1.1 一般资料
　　选取2017年9月～2018年12月在本院就诊的确诊为SLE患者100例进行研究，其中SLE活动期70例，SLE稳定期30例。纳入标准：诊断符合1997年美国风湿病学会推荐的SLE分类标准[5]，根据系统性红斑狼疮疾病活动指数积分表（SLEDAI）进行评分， 本研究将SLE患者分为活动组（SLEDAI评分≥10分）和稳定组（SLEDAI评分<10分），其中男6例，女94例，年龄13～62岁，平均（33.75±10.54）岁。排除标准：合并有急慢性感染、恶性肿瘤、肝肾严重疾病、其他自身免疫疾病及资料不完整等患者。收集同期本院健康体检人员50例作为健康对照组，年龄15～60岁，平均（33.42±10.62）岁，其中男3例，女47例。两组的年龄、性别比较差异均无统计学意义（P>0.05）。本研究经本院医院伦理委员会讨论批准进行，研究对象均知情同意。
　　1.2 仪器与试剂
　　采集EDTA抗凝血2管各3 mL，1管使用美国贝克曼（FC-500）测定T淋巴细胞亚群、NK细胞水平，另1管使用日本SYSMEX（XN-9000）测定血常规项目。采集静脉血3～5 mL加入促凝管中，使用德国罗氏生化（c702）及免疫分析（e602）仪器，分别检测补体（C3、C4）、免疫球蛋白（IgA、IgM、IgG）及25（OH）D。以上项目均使用对应公司原装相关配套试剂。血沉用枸橼酸钠抗凝管2 mL，使用日本SYSMEX（MONITOR-100）仪器法检测。
　　1.3 方法
　　两组均在清晨空腹状态下抽血，检测补体（C3、C4），免疫球蛋白（IgA、IgM、IgG）及25（OH）D项目， 3000 r/min离心10 min后取血清进行上机检测。T淋巴细胞亚群、NK细胞项目则为混匀后50 μL全血样本加入10 μL对应荧光抗体，混匀避光放置30 min后，加入原装溶血剂500 μL后上机检测。血常规及血沉则充分混匀后直接上机检测。以上所有检测项目均严格按标准操作规程处理，在仪器运行正常及室内质控正常情况下进行测定。
　　1.4 统计学处理
　　采用SPSS17.0 软件对相关数据进行统计分析，计量资料符合正态分布的用均数±标准差（x±s）表示，组间采用方差分析LSD-t法两两比较;偏态分布计量资料采用中位数（四分位数）[M（P25～P75）]表示，组间比较采用秩和检验的Kruskal Wallis检验分析;相关性采用Spearman进行分析;采用多因素Logistic回归进行危险因素分析，P<0.05为差异有统计学意义。
　　2 结果
　　2.1 SLE病例组与对照组T细胞亚群、NK细胞及25（OH）D水平比较
　　SLE活动期及稳定期两组患者的CD3+T细胞及CD8+Ts细胞水平明显高于对照组，而两组的Th/Ts比值、NK细胞均明显低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。SLE活动期组CD4+Th细胞明显低于对照组，另外其25（OH）D水平明显低于SLE稳定期组及对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表1。
　　2.2 SLE病例组与对照组补体、免疫球蛋白及血沉水平比较
　　SLE活动期及稳定期两组患者的C3及C4水平均明显低于对照组，两病例组的ESR水平明显高于对照组，而SLE活动期组的IgM水平明显低于其他两组，差异均有统计学意义（P<0.05）。三组研究对象组间的IgA、IgG水平差异均无统计学意义（P>0.05），见表2。
　　2.3 SLE病例组与对照组血常规部分项目水平比较
　　SLE活动期组的RBC、HGB、PLT及LYM%的水平较其他两组均明显减低，而NEUT%的水平则明显高于其他两组，差异均有统计学意义（P<0.05）。SLE稳定期组的RBC、NEUT%水平明显高于对照组，而该组的LYM%的水平则明显低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。而三组研究对象组间的WBC水平差异无统计学意义（P>0.05），见表3。
　　2.4 SLE病例组间的T淋巴细胞亚群、NK细胞与25（OH）D等项目相关性分析
　　相关性分析结果显示，NK细胞与CD4+Th细胞、25（OH）D、C3、IgA和IgG呈正相关（P均<0.05），与CD8+Ts细胞呈负相关（P<0.05）。25（OH）D与CD4+Th细胞、Th/Ts比值、C3、IgA、IgG、RBC、HGB和PLT呈正相关（P均<0.05），与ESR呈负相关（P<0.05），见表4。 　　2.5 各影响因素对SLE的非条件Logistic回归分析
　　多元回归分析，通过计算优势比（odds ratio，OR）和95%可信区间（95%CI）分析SLE的相关危险因素。研究结果表明，CD3+T细胞、CD8+Ts细胞及ESR是SLE患者的危险因素，而25（OH）D、NK细胞、C3、HGB及PLT为保护因素，见表5。
　　3 讨论
　　SLE 发病机制尚未完全明确，患者发病相关的体内免疫调节异常可表现为 T 淋巴细胞亚群的比例失衡。国内外多项研究显示，T淋巴细胞亚群的活化和增殖异常表现与SLE的发病密切相关，结果均有提示 SLE患者存在CD4+Th细胞减低，CD8+Ts细胞增高，Th/Ts比值及NK细胞减低等情况，本研究结果与冯静[6]、王丽娟[7]、Shirota Y等[8]研究结果一致。NK细胞是自然杀伤性细胞，也具有一定的免疫调节功能，自身免疫性疾病常出现NK细胞数量的减少或功能的缺陷，SLE患者NK细胞减低，推测可能影响T淋巴细胞亚群的平衡[3，6]，本研究中NK细胞与CD4+Th细胞呈正相关，而与CD8+Ts细胞呈负相关的相关性分析也证实了这点。张继云等[9]研究显示SLE组外周血CD3+T淋巴细胞与对照组相比显著降低，差异有统计学意义，而CD8+Ts细胞与对照组相比则差异无统计学意义，本研究与此结论有所不同。推测可能是SLE患者CD3+T细胞各项比例的均数因纳入对象数量不同，存在地域人群差异或SLE患者处于疾病的不同阶段等原因，各研究学者结果尚未达成一致。
　　近年来国内外研究发现，25（OH）D的缺乏可能与某些自身免疫性疾病如SLE、类风湿性关节炎的发病有一定相关性[10]，本研究也同样证实了SLE患者25（OH）D水平的下降。目前有学者认为SLE的发病与遗传、激素及免疫因素等有关，维生素D缺乏也可能是其中一个重要的因素，25（OH）D中约95%含量为25（OH）D3，也有研究表明25（OH）D对T淋巴细胞的异常表达有关系[11]。冯静[6]研究结果显示SLE组25（OH）D3 水平与 SLEDAI 呈负相关，与CD4+Th细胞、Th/Ts呈正相关，与CD3+T细胞、CD8+Ts细胞、NK细胞百分率均无相关性。本研究25（OH）D与CD4+Th细胞、Th/Ts比值呈正相关与此相类似。张继云等[9]研究SLE组外周血25（OH）D与CD3+T细胞、CD4+Th细胞计数、Th/Ts计数比值呈正相关。Zhao M等[12]研究显示血清25（OH）D3水平与CD4+Th细胞（r=-0.423，P=0.002）呈负相关，与CD8+Ts细胞呈正相关（r=0.318，P=0.024）。本研究还发现25（OH）D与SLE病情活动性有一定关系，中重度活动期组患者明显低于稳定期组及对照组，与苏江等[13]研究结论相似，因此推测SLE患者提高血清维生素D水平可能对改善SLE病情有重要的作用。
　　SLE 患者可能由于B细胞的增殖、分化及激活，引起免疫系统针对体内多种自身抗原成分产生相应的自身抗体，最终导致部分患者体内免疫球蛋白浓度的异常。谢国锦等[14]研究表明，在SLE 活动期IgM水平是下降的，本研究与此结论相一致，但其原因暂不明确。而本研究SLE组的IgG、IgA与对照组相比无显著差异，与孙家祥等[15]研究有所不同。SLE患者补体C3、C4水平明显减少，与陈俊华等[16]研究结果相似，是由于补体C3、C4可使体内凋亡细胞释放出较多核酸，从而产生更多的抗核抗体与对应抗原相结合后激活及消耗补体，低C3、C4和ESR监测通常作为SLE活动性的判断指标，本研究也证实此观点。部分SLE患者侵犯血液系统时可出现血常规的异常（贫血、血小板减少或淋巴细胞百分率减低等），本研究结果发现，SLE活动期组的RBC、HGB、PLT及LYM%的水平较其他两组均明显减低，可能是因为感染或应激等情况，而NEUT%的水平则明显高于其他两组，同时还发现25（OH）D与RBC、HGB和PLT存在一定正相关性，推测自身免疫疾病的发病是多方面综合影响的。
　　综上所述，T 淋巴细胞亚群、NK细胞异常改变在SLE的发病中发挥着重要作用，可了解客观患者机体免疫状态，对判断病情活动性及疗效观察具有重要意义。25（OH）D减低与SLE免疫系统异常及活动性有一定关系，通过补体、免疫球蛋白、血沉及血常规等检测可明确危险因素，有针对性的治疗可减少SLE的并发症，改善患者生活质量。
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　　（收稿日期：2019-05-23）
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