肺结核患者T细胞亚群测定分析
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结核分枝杆菌引起的结核病是一种严重危害人类健康的慢性传染病，在历史上曾经夺去数以万计的生命。现在全球每年约有 800 万新感染病例，每年死亡人数将超过 400 万[1]。
我国结核病流行情况十分严峻，据文献资料全国结核杆菌感染人数超过 4 亿，活动性肺结核患者超过 600 万，在全球 22 个结核病高流行国家中居第二位，仅次于印度[2]。结核分枝杆菌是一种细胞内寄生菌，引起的免疫反应主要是细胞免疫，本研究用流式细胞技术检测分析了 2011 年4～9 月我院42 例结核患者 CD3、CD4 和 CD8 的表达，来了解细胞免疫功能在结核病人中的变化，探讨免疫功能在结核病人中所发挥的作用。现将结果报道如下。
1 研究对象
所有研究对象均为我院住院患者 42例，其中男 29 例，女13例，最小年龄 16 岁，最大年龄 78 岁，平均 36.5 岁。所有病例都经痰涂片抗酸杆菌染色或结核菌培养阳性确诊，并分为 2 组，初治组 22 例（首次发现结核菌感染，并从未经过抗结核治疗或抗结核治疗在 1 周以内），复治组 20 例（有过结核病史，进行过抗结核治疗，重新感染或者复发）。同时用 10例正常健康人作为对照组。
2 研究方法
2.1 试剂与仪器 流式细胞仪为 BD FACSCanto II Flow Cytometry，CD483 混合抗体购自美国 BD公司，其中 CD4 抗体 FITC （异硫氰酸荧光素）标记， CD抗体 PE （藻红蛋白）标记， CD抗体PE-Cy5标记。
2.2 试验方法
2.2.1 采集初治组、复治组以及对照组患者全血各 2ml，EDTA-K2 抗凝。
2.2.2 混匀抗凝血，取 100ul 加入试管。
2.2.3 加 10ulCD483 试剂，室温，避光孵育 15min。
2.2.4 加入 500ul 溶血素，室温，避光孵育 10min。
2.2.4 加入 500ulPBS（PH=7.2，NaCL 8.0g，KCl 0.2g，Na2HPO4.H2O 2.9g，KH2PO4 0.06g，
加双蒸水至 1000ml），室温，避光孵育 5min。
2.2.6 设置好测试方案，参考仪器仪器说明书。
2.2.7 设置好阴性对照，上机测试，有必要进行适当颜色补偿。
2.2.8 检测样本。
3 统计分析
结核病人初治组、复治组及对照组外周血 T 细胞亚群检测结果比较采用方差分析。男女外周血 T 细胞亚群检测结果比较采用两样本资料 t 检验。P<0.05 差异有统计学意义。
4 结果
4.1 T细胞亚群检测结果 42 例结核病人初治组和复治组以及 10 例对照组外周血 CD3、CD4、CD8 细胞亚群检测结果见表 1。CD3 初治组、复治组、对照组 3 组比较 P<0.05，差异有显著统计学意义，初治组、复治组 2 组比较 P<0.05，差异有显著统计学意义；CD4初治组、复治组、对照组 3 组比较 P<0.05，差异有显著统计学意义，初治组、复治组 2组比较 P>0.05，差异无显著统计学意义；CD8 初治组、复治组、对照组 3 组比较 P>0.05，无统计学意义，初治组、复治组 2组比较P值>0.05，差异有显著统计学意义； CD4/CD8初治组、复治组、对照组3组比较P<0.05，差异有显著统计学意义，初治组、复治组 2 组比较 P>0.05，差异无显著统计学意义，见表 1。
表 1.不同组T 细胞亚群检测结果
4.2 不同性别 T细胞亚群检测结果 42 例结核病人男女外周血 T 细胞亚群检测结果比较见表 2，CD3、CD4、CD8 检测无性别差异（P>0.05），见表2。
表 2. 不同性别 T 细胞亚群检测结果
5 讨论
近年来，结核病的发病率呈增高趋势[3]。同时，结核病也是引起 HIV感染患者死亡的重要原因之一，据报道 2008 年全球200万 HIV阳性死亡患者中，有 50 万患者同时患有结核病[1]。结核分枝杆菌是一种细胞内寄生菌，引起的免疫反应主要是细胞免疫，其中以CD4+T 淋巴细胞为主。当受到抗原刺激后，CD4+T 细胞开始活化、增殖并分化成效应细胞清除抗原，随后少数细胞分化为记忆细胞存留于机体内，再次遇到同一抗原时，迅速做出快速敏捷的特异性应答反应来保护机体，因此 CD4+T 在抗结核感染中发挥重要的作用，是主要的免疫细胞。 CD3 分布于成熟 T 细胞表面，CD3水平在初治组、复治组、对照组中比较有差异，在初治组、复治组中水平低，说明结核病人在发病阶段细胞免疫功能受到抑制，复治组水平更低说明结核病人细胞免疫功能和病程的长短有关，并且恢复较慢。CD4 主要分布于 T 细胞，也分布于胸腺细胞以及某些 B 细胞、单核细胞。其主要生理功能是分泌细胞因子，从而放大免疫反应。本研究显示 CD4 在复治组中高于初治组，说明 CD4+T 细胞在复治组病人中的水平得到一定恢复。CD8+T 细胞与 CD4+T 细胞共同维持机体的免疫稳定，CD8 在结核病的免疫过程中需要 CD4 的共同参与才能发挥作用，且保持一定的比例，当各种病因导致其比例失调，机体免疫功能就会表现异常。本文显示初治组与复治组 CD8 均高于对照组，初治组与对照组、复治组与对照组比较均有统计学差异（P<0.05） ，并且 CD4/CD8 比值发生颠倒，表明结核患者均细胞免疫功能发生了严重紊乱。
参考文献
[1]沈国妙，高谦.结核病血清学诊断研究进展［J］.中华检验医学杂志， 2011， 34( 2) : 100-104
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