绿萝组培快繁技术研究

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　　摘要    以绿萝带节茎段为外植体，探讨不同消毒方法、不同培养基配方对绿萝的腋芽诱导、继代增殖、生根的影响。结果表明，用75%酒精消毒30 s，再用0.1% HgCl2消毒30 min效果最好;腋芽诱导的最佳培养为添加6-BA 2.0 mg/L，腋芽萌芽率高达100%;丛芽增殖最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖20 g/L;而生根的最佳培养基为1/2 MS+NAA 0.1 mg/L+IBA 0.2 mg/L。
　　关键词    绿萝;腋芽诱导;增殖培养;生根培养
　　中图分类号    S682.26        文献标识码    A
　　Abstract    Using the stem segments with node of Epipremnum aureum as explants，the effects of different sterilization methods and different med-ium components on axillary bud induction，proliferating culture and rooting culture were studied.The results showed that the best sterilization method for the stem segments was wiping the explant with 75% alcohol for 30 s and 0.1% HgCl2 for 30 min.The best culture medium for axillary bud induction was adding 6-BA 2.0 mg/L，the axillary bud germination percentage was up to 100%.The optimum subculture proliferation culture medium for clumpy buds was MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+sucrose 20 g/L.The optimum rooting culture medium was 1/2 MS+NAA 0.1 mg/L+IBA 0.2 mg/L.
　　Key words    Epipremnum aureum;axillary bud induction;proliferating culture;rooting culture
　　綠萝属天南星科麒麟叶属的常绿附生藤本植物，又名黄金藤、黄金葛、魔鬼藤等。其幼叶呈心脏形，长大后呈卵圆形;叶深绿色，具有光泽。绿萝的茎蔓粗壮，在热带地区为常绿。同时，绿萝具有良好的耐阴性，其是一种良好的室内观叶植物[1]。绿萝在室内能适应较干旱环境条件，还能吸附和去除室内空气中的甲醛、苯、三氯乙烯等污染物，其是一种天然的“空气净化器”[2]。绿萝一般采用压条和扦插的繁殖方法[3-4]，但是扦插繁殖中扦插材料有限，同时存在繁殖系数低、遗传稳定性差等问题，难以满足工厂化生产。本试验以绿萝的带节茎段为外植体进行组培快繁相关技术的研究，探索绿萝的高效繁育方法[5]，以期为其工厂化育苗提供参考。
　　1    材料与方法
　　1.1    试验材料
　　供试材料为从大棚中选取的生长健壮、无病虫害绿萝植株。外植体为从绿萝植株中选择的具有嫩叶的带节茎段。
　　1.2    试验方法
　　1.2.1    外植体预处理及消毒。从所选取健壮、无病虫害的植株茎基部将植株整株截断，去除老茎，并剥除叶片，同时清洗茎段。首先，将茎段浸泡在饱和洗衣粉溶液中并轻轻振荡20 min，其次，自来水冲洗后晾干备用。再用75%酒精浸泡30 s后，使用无菌水冲洗1遍，分别置于装有0.1% HgCl2的烧杯中，间断摇晃烧杯分别消毒15、20、25、30、35 min，再用无菌水清洗4～5遍，随后将已处理的茎段切成带有1个腋芽的小段并分别接入MS培养基中，每个处理接种30瓶，每瓶1个外植体。30 d后统计外植体的污染率和存活情况，筛选出最佳消毒时间。
　　1.2.2    腋芽萌发诱导。将消毒处理后并且合格的带节茎段分别接种到以MS为基本培养基并添加适量TDZ、KT、6-BA、NAA等不同生长调节剂配比的培养基上。30 d后观察和统计外植体腋芽的萌芽率、外植体形态特征变化，筛选出最佳诱导培养基。萌芽率计算公式如下：
　　萌芽率（%）=（萌芽外植体数/外植体接种数）×100
　　1.2.3    芽丛继代增殖。采用L9（34）正交试验方法研究不同生长调节剂及蔗糖组合对绿萝芽增殖的影响，即以MS+卡拉胶5.0 g/L为基本培养基，分别添加不同浓度的6-BA、NAA和蔗糖。将茎段诱导出来的芽转接到继代增殖培养基中进一步培养，以筛选出最佳增殖培养基。
　　1.2.4    生根培养。以1/2 MS+卡拉胶5.0 g/L+蔗糖20 g/L为基本培养基，分别添加不同浓度的NAA和IBA，研究不同培养基配方对绿萝生根的影响。选择增殖过程中生长健壮、叶片舒展的单株，接入生根培养基中进行培养。培养30 d后调查生根率、生根数以及根生长情况，确定最佳生根培养基。
　　1.2.5    培养条件。培养温度25～28 ℃，相对湿度50%～70%，光照强度1 000～2 000 lx，光照时间8～10 h/d。 　　1.2.6    炼苗移栽。将已生根的组培苗移至炼苗棚进行炼苗3～5 d，然后将苗取出，洗净残留培养基，用多菌灵溶液浸泡后移栽到含有由泥炭土、珍珠岩和椰糠等配成基质的育苗穴盘中，同时浇透水，20 d后统计移栽成活率。
　　2    结果与分析
　　2.1    不同消毒时间对绿萝茎段污染率的影响
　　由表1可知，带节绿萝茎段在不同消毒时间的处理下，污染率均不同。当消毒时间为15 min时，接种外植体污染率最高;当消毒时间为30 min时，污染率最低;当消毒时间为35 min时，污染率也较低，但是植株死亡较多。因此，最佳消毒时间为30 min。
　　2.2    不同生长调节剂对绿萝腋芽诱导的影响
　　由表2可知，培养基中添加TDZ、KT和6-BA对绿萝腋芽诱导的影响不同。其中，添加6-BA更有利于绿萝腋芽诱导的培养，以添加6-BA的培养基诱导绿萝腋芽时，萌发率可高达100.0%，且萌芽生长更健壮。由于本试验所用NAA的浓度没有变化，因而并不能确定NAA浓度配方是绿萝腋芽诱导的最佳配方。
　　2.3    不同生长调节剂及蔗糖组合对绿萝芽增殖的影响
　　由表3可知，6-BA、NAA和蔗糖的浓度对绿萝芽增殖的影响程度为6-BA浓度>蔗糖浓度>NAA浓度，说明以MS为基本培养基时6-BA浓度对绿萝芽增殖起主要作用，其次是蔗糖浓度，NAA浓度的影响最小。由表3可知，6-BA浓度间的F=52.507、P=0.019，表明不同6-BA浓度对绿萝芽增殖的影响差异显著。而NAA浓度间的F=6.196、P=0.139，蔗糖浓度间的F=2.796、P=0.263，表明不同NAA浓度、蔗糖浓度对绿萝芽增殖的影响差异不显著。由表3知，除试验3外，其他试验增殖系数均大于3.0，其中试验4的增殖系数最高，达4.96，且其芽丛多，生长健壮，叶色青绿。而当6-BA的浓度为3.0 mg/L时，丛芽分化较少、有少量变异现象。由此可知，綠萝增殖的最佳处理组合为A2B2C1，即绿萝芽增殖的最佳培养基配方为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖20 g/L。
　　2.4    不同培养基配方对绿萝生根的影响
　　由表4可知，每个处理均可生根，且生根培养基中添加IBA的配方生根数较多。当NAA浓度为0.1 mg/L、IBA浓度为0.2 mg/L时，生根数最多且根粗壮;当NAA浓度为0.1 mg/L、IBA浓度为0.5 mg/L时，根较弱并有气生根生成。综上所述，绿萝最佳生根配方为1/2 MS+NAA 0.1 mg/L+IBA 0.2 mg/L。
　　2.5    炼苗移栽情况
　　将绿萝生根组培苗移至大棚进行炼苗3～5 d，注意避免中午太阳直射。炼苗后的组培苗颜色深绿。将组培苗从瓶中取出，洗净附着在根系上的培养基，用多菌灵溶液1 000倍液浸泡20 min后移栽。结果表明，组培苗移栽到含有泥炭土和珍珠岩按3∶1比例配成基质的育苗穴盘中，组培苗长势旺盛。组培苗移栽管理期间，要求温度为25～30 ℃，保持空气相对湿度达85%以上[6]。20 d后，成活率可达95%。
　　3    结论与讨论
　　本研究以绿萝带节茎段为外植体，对其组织培养技术进行探索。试验结果表明，腋芽诱导的最佳培养为添加6-BA 2.0 mg/L，腋芽萌发率高达100%;丛芽增殖最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖20 g/L，增殖系数可达4.96;生根最佳培养基为1/2 MS+NAA 0.1 mg/L+IBA 0.2 mg/L，生根率可高达100%。
　　外植体消毒是植物离体组织培养所要进行的第一步，是愈伤组织诱导和丛生芽诱导的基础。本研究只运用了酒精与升汞进行消毒试验，且表明采用75%酒精消毒30 s后，再用0.1% HgCl2消毒30 min，效果最好。而现有的研究表明，不同种类的灭菌剂组合，对绿萝外植体的灭菌效果不同[7]。这说明绿萝外植体消毒处理方法具很大的改进和提升空间，可采用多种灭菌剂进行组合配比并比较消毒效果，进而筛选出更优的消毒方法。
　　研究发现，在天南星科植物组织培养中，生长调节剂对外植体形态建成及其调控起着关键作用，其种类选择及浓度配比影响着植株再生方式和再生频率[8-11]。因此，本试验着重探讨了不同生长调节剂浓度对绿萝的腋芽诱导、继代增殖、生根的影响。本研究结果表明，6-BA在腋芽诱导及继代增殖作用最为明显，且最佳浓度为2.0 mg/L，这与郭 英等[12]的报道一致，但与王越铭等[3]报道的结果不同。此外，生根试验中NAA与IBA结合时效果最佳，这与黄凤兰等[13]的研究结果不同。在试验中发现，褐变的现象较严重，可适量添加活性炭。张 瑜等[14]的研究表明，活性炭最佳添加量为0.2%。在腋芽诱导试验中，由于添加NAA 0.02 mg/L为定量，因而不能确定其为最佳值，有待进一步试验。虽然组织培养的方法变异小，但在试验过程中也有发现，绿萝继代培养过程中会出现少量变异。因此，绿萝的稳定遗传率和稳定遗传的能力还需进一步进行试验。
　　4    参考文献
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