乳茄组培快繁技术

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　　摘 要：以乳茄嫩枝为外植体，研究了不同消毒方法和不同激素对乳茄诱导、增殖及生根等的影响。结果表明，最适合乳茄外植体的消毒方法为70%的酒精消毒10s，0.1%的升汞消毒6min;最佳芽诱导培养基为MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1;最佳继代增殖培养基为MS+BA1.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1+GA30.1mg·L-1+蔗糖30g·L-1，增殖系数为4.35;最佳生根培养基为1/2MS+IBA0.5mg·L-1+ABT1 0.3mg·L-1，生根率达93.5%以上;組培苗移栽适宜基质为泥炭土∶珍珠岩=5∶1，成活率达96.7%。
　　关键词：乳茄;诱导;组织培养
　　中图分类号 S567.239 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2020）01-0019-03
　　Abstract：In this paper，the effects of different factors on the induction，multiplication and rooting of Solanum mammosum L. were studied. The results show that the optimal disinfection methods was 70% alcohol 10 s+0.1% HgCl2 6min.The optimalshoot-inducing medium wasMS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1;the optimal multiplication medium was MS+BA1.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1+GA3 0.1 mg·L-1+sucrose 30 g·L-1，with multiplication coefficient of 4.35 times.The optimal rooting medium is 1/2MS+IBA0.5mg·L-1+ABT1 0.3mg·L-1，with rooting rate up to 93.5%. The optimal trans-plant medium was peat soil∶perlite（V/V）=5∶1，with survival rate up to 96.7%。
　　Key words：Solanum mammosum L.;Induction;Tissue culture
　　乳茄（Solanum mammosum L.）为茄科茄属常绿植物，别名多头乳茄、五指茄、黄金果等，原产于中美洲热带地区，果实成熟时为金黄色，基部生有5个乳头状突起，是一种外形奇特的观果植物，常用作插花素材或盆栽观赏。在我国广东、广西、福建等亚热带地区均有种植，其果色鲜艳、观果期长，具有较高的经济价值和观赏价值。此外，乳茄还具有消炎镇痛、消肿散瘀等药用功效，主治胃气痛、淋巴炎、疮疖等疾病[1-4]。乳茄一般用种子繁殖，种植多年后因各种病害感染，容易导致种性退化，严重影响植株生长、外观品质及观赏价值[5-6]。生产上，采用组培快繁技术生产健康种苗是解决这一问题的有效途径。为此，笔者以乳茄嫩枝为外植体开展了组培快繁的研究，初步建立了乳茄快繁体系，为乳茄健康种苗的工厂化生产提供科学依据。
　　1 材料与方法
　　1.1 供试材料 以健康无刺乳茄品种为试验材料，在田间选取健壮无病虫害的植株嫩枝，去掉叶片和嫩梢顶端幼嫩部分，洗净后流水冲洗30min以上，将其移至超净工作台上备用。
　　1.2 试验方法
　　1.2.1 外植体消毒 嫩枝预处理后，按照以下4种方法进行外植体消毒：（1）70%酒精10s，无菌水冲洗3～4遍，0.1%升汞3min，无菌水冲洗3～4遍;（2）70%酒精10s，无菌水冲洗3～4遍，0.1%升汞6min，无菌水冲洗3～4遍;（3）70%酒精10s，无菌水冲洗3～4遍，0.1%升汞9min，无菌水冲洗3～4遍;（4）70%酒精10s，无菌水冲洗3～4遍，0.1%升汞12min，无菌水冲洗3～4遍。接种于MS+6-BA 2mg/L培养基上，15d后统计萌芽数和污染率。
　　1.2.2 诱导培养 将消毒后的乳茄茎段接入诱导培养基，每瓶1个茎段。诱导培养基以MS培养基为基本培养基，先配制6-BA浓度为0.5，1.0，2.0，3.0mg·L-1的诱导培养基，每处理接种外植体20个，重复3次。记录每个处理的出芽时间，15d后统计出芽率，以此确定理想的6-BA浓度。在上述试验完成后，以含最适浓度6-BA的MS培养基为基础，分别添加0，0.05，0.1，0.2mg·L-1的NAA，每处理接种外植体20个，重复3次。记录每个处理的出芽时间，15d后统计出芽率，以此确定理想的NAA浓度。
　　1.2.3 继代增殖培养 以前述无菌体系得到的乳茄诱导芽为试验材料。采用L9（34）正交表安排试验设计，以BA（A）、NAA（B）、GA3（C）和蔗糖（D）为因素，各设3个水平，每个处理接20瓶，每瓶接6个茎段，重复3次。接种20d后，观察生长情况，统计增殖系数。
　　1.2.4 生根培养 将高度2～4cm，带2～3个以上叶片的小苗为材料接种至生根培养基上。培养基分别添加生长素IBA，ABT1号，进行正交试验，共9个处理，每个处理接20瓶，每瓶接6株，重复3次。20d后统计生根率。
　　1.2.5 培养条件 培养温度25～28℃，光照强度2000～2500lx，光照时间12h·d-1。
　　1.2.6 组培苗移栽 移栽前炼苗约7d，试验于2—3月进行，选择健壮、叶色亮绿、具2条根以上、4～6cm高的生根苗进行移栽。以不同比例的泥炭土和珍珠岩为移栽基质，每个处理种植100株，重复3次。移栽后注意保温保湿和通风，每7d喷施1次杀菌剂。20d后统计移栽成活率。 　　1.3 数据处理 应用Excel、DPS软件对试验数据进行统计和方差分析，用新复极差法进行多重比较。
　　2 结果与分析
　　2.1 不同消毒处理对外植体诱导的影响 乳茄枝条和叶片表面遍布绒毛，导致其易带菌，不易消毒，在处理外植体时需要较长的消毒时间，才能达到降低污染的目的。从表1可以看出，随着升汞消毒时间的延长，污染率逐渐下降，但消毒时间过长又会导致外植体发生褐化死亡，萌芽率降低;消毒时间过短，污染率迅速上升。采用方法2消毒，既可保持较低的污染率，又能保证较高的萌芽率，是较理想的消毒方法。
　　2.2 不同浓度6-BA对芽诱导的影响 从表2可以看出，6-BA可明显影响外植体芽的诱导效果，随着6-BA浓度的升高，诱导率逐渐增加，当浓度为2.0时，达到最大为93.1%，之后开始下降。说明低浓度的6-BA可促进芽的萌发，高浓度时反而对芽的萌发产生抑制作用，且6-BA浓度过高（≥2.0mg·L-1）时，诱导的芽易玻璃化。因此，较适合的6-BA浓度为2.0mg·L-1。
　　2.3 不同浓度NAA对芽诱导的影响 从表3可以看出，NAA浓度对出芽时间的影响不大，随着NAA浓度的增加，诱导率略有上升，之后逐渐下降，但NAA浓度过高时，又会导致外植体切口长出大量愈伤组织，叶片脱落直至外植体死亡。因此，较适合的NAA浓度为0.05mg·L-1。
　　2.4 不同培养基对继代增殖的影响 将初代培养诱导的小苗切段（每段带1个腋芽）轉接入9种正交组合继代培养基中，3～4d后腋芽开始生长，增殖系数和方差分析结果见表4和表5。从表4可以看出，不同因素对乳茄继代增殖的影响主次关系为6-BA>蔗糖>GA3>NAA。添加6-BA浓度在一定的范围内（0.5～1.0mg·L-1），增殖系数随浓度的升高而增加，而随着6-BA浓度继续升高（1.5mg·L-1），增殖系数反而下降，且有玻璃化发生;蔗糖浓度对增殖也有一定的影响，呈先增加后下降的趋势，NAA和GA3对增殖率的影响很小。方差分析结果表明：BA对增殖系数的影响达到了极显著水平，其他3个因素均无显著影响。由正交分析结果得出，MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1+GA3 0.1mg·L-1+蔗糖30mg·L-1为最佳继代增殖培养基，经验证试验表明，该组合的增殖系数为4.35，增殖芽生长良好，叶片颜色亮绿。
　　2.5 不同培养基对生根的影响 将生长健壮、高3～4cm的乳茄小苗转接入9种正交组合生根培养基后，约7d左右开始有新根长出。20d后观察统计，生根情况和方差分析的结果详见表6和表7。从表6可以看出：不同培养基的生根率存在明显的差异，添加一定浓度的植物激素对组培苗生根具有明显的促进作用。直观分析表明，IBA对生根率的影响最大，ABT1号次之。方差分析结果表明，IBA对生根率的影响达极显著水平，ABT1号对生根率无显著影响。由表6可知，最佳生根培养基为：1/2MS+IBA0.5mg·L-1+ABT1 0.3mg·L-1，最高，生根率高达93.5%，且根系发达。
　　2.6 不同移栽基质对成活率的影响 将经过炼苗后的乳茄组培苗取出，洗净琼脂后移栽至不同基质上。温度控制在20℃左右，同时注意保温保湿和通风，定时喷施杀菌剂，20d后观察结果，统计结果见表8。从表8可以看出，不同移栽基质对组培苗成活率和生长有明显的影响，在泥炭土∶珍珠岩=5∶1的移栽基质上成活率最高，达96.7%，且组培苗生长健壮，叶片浓绿。
　　3 讨论
　　乳茄为草本植物，外植体材料幼嫩、不耐消毒，只有合适的消毒方法才能保证无菌体系成功建立。本试验通过研究不同消毒方法和不同激素对乳茄诱导、增殖和生根等的影响，最终确定适合乳茄外植体的消毒方法为70%的酒精消毒10s，0.1%的升汞消毒6min;芽诱导培养基为MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1，诱导的芽生长健壮无异常;最佳继代增殖培养基为MS+BA1.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1+GA3 0.1mg·L-1+蔗糖30g·L-1，增殖系数为4.35;最佳生根培养基为1/2MS+IBA0.5mg·L-1+ABT1 0.3mg·L-1，生根率达93.5%以上;组培苗移栽适宜基质为泥炭土∶珍珠岩=5∶1，成活率达96.7%。
　　参考文献
　　[1]王祥初.五代同堂黄金果——多乳头茄[J].园林，1999（5）：17.
　　[2]吴应辉.室内观果新宠——乳茄[J].农村新技术，2001（1）：30.
　　[3]徐文果，张国云，杨金喜.热带观果花卉——黄金果[J].中国热带农业，2006（1）：33-34.
　　[4]许维.黄金果[J].环球人文地理，2015（11）：115.
　　[5]张云霞，施祖荣，黄江华，等.乳茄3种病害病原鉴定[J].植物病理学报，2013，43（4）：426-429.
　　[6]程佳.解决乳茄因病毒退化的六个问题[J].农家参谋（种业大观），2014（12）：49.
　　（责编：张宏民）
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