不同品种蝴蝶兰通过叶片原球茎途径再生体系的研究

来源:用户上传      作者: 郭春晓 朱方平 许传怀

　　摘要 以109、沙西米、火凤凰3个蝴蝶兰品种为材料，对蝴蝶兰叶片原球茎途径的再生体系进行了研究。结果表明，109叶片原球茎诱导的最佳培养基为处理1/3MS+肌醇0.1 g/L+椰汁100 mL/L+BA 5.0 mg/L+Ade 5.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L，最佳壮苗培养基为1/2MS+肌醇0.1 g/L+柠檬酸0.03 g/L+炭粉1.0 g/L+椰汁100 mL/L、生根时NAA浓度为0.5 mg/L最佳。火凤凰叶片原球茎诱导的最佳培养基为处理1/3MS+肌醇0.1 g/L+椰汁100 mL/L+BA 5.0 mg/L+Ade 5.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L、最佳壮苗培养基为1/2MS+肌醇0.1 g/L+炭粉1.0 g/L+椰汁100 mL/L、生根时NAA浓度为0.7 mg/L最佳。沙西米叶片原球茎诱导的最佳处理为花宝1号3.0 g/L+肌醇0.1 g/L+椰汁100 mL/L+BA 5.0 mg/L+Ade 5.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L、最佳壮苗培养基为花宝1号3.0 g/L+牛肉胨2.0 g/L+肌醇0.1 g/L+柠檬酸0.03 g/L+炭粉1.0 g/L+椰汁100 mL/L、生根时NAA浓度为0.5 mg/L最佳。
　　关键词 蝴蝶兰；109；沙西米；火凤凰；叶片；原球茎；再生体系
　　中图分类号 S682.31；Q813.1+2 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2014）15-0177-02
　　蝴蝶兰是单茎性气生兰，传统的繁殖方式为分株繁殖，繁殖系数低，速度慢[1-2]。无菌播种和组织培养是其快速繁殖的重要手段[3-4]。20世纪60年代，国外开始利用组织培养技术繁殖兰花种苗。试管苗繁殖，在室内进行工业生产不受季节、气候的影响。采用组织培养法来繁殖蝴蝶兰，可以获得与母株完全相同的优良遗传特性[5]。通过此种方法产生的蝴蝶兰苗通常称为分生苗或组培苗。用于进行分生培养的植物组织（外植体）可以是顶芽（茎尖）、茎段（休眠芽），也可以是幼嫩的叶片[6]。
　　本研究以目前市场上比较流行的3个品种109、沙西米、火凤凰为例，探讨蝴蝶兰通过叶片丛生芽途径获得再生植株的方法。
　　1 材料与方法
　　1.1 试验材料
　　选用山东省聊城市农业科学研究院生物工程中心组培室内109、沙西米、火凤凰3个品种健康、无菌植株的叶片为试验材料。
　　1.2 试验方法
　　1.2.1 叶片原球茎的诱导。将从无菌植株上切下来的叶片直接接种于诱导培养基中，并进行暗处理。采用的基本培养基A为花宝1号3.0 g/L+肌醇0.1 g/L+椰汁100 mL/L，B为1/3MS+肌醇0.1 g/L+椰汁100 mL/L，pH值5.2～5.4，通过加入不同激素配比，找出3个品种各自最适合的原球茎诱导培养基。激素配比见表1。
　　1.2.2 增殖和分化培养基配方筛选。将诱导出的原球茎接种到增殖和分化培养基中。培养基和激素设计同原球茎诱导培养基。
　　1.2.3 壮苗培养基。将增殖获得的芽接种到壮苗培养基中进行壮苗培养。培养基如下：Z-A：1/3MS+肌醇0.1 g/L+柠檬酸0.03 g/L+炭粉1.0 g/L+椰汁100 mL/L；Z-C：1/2MS+肌醇0.1 g/L+柠檬酸0.03 g/L+炭粉1.0 g/L+椰汁100 mL/L；Z-D：花宝1号3.0 g/L+肌醇0.1 g/L+柠檬酸0.03 g/L+炭粉1.0 g/L+椰汁100 mL/L[7-8]。
　　1.2.4 生根培养基中激素筛选。经壮苗培养后的芽体接种到生根培养基中进行生根培养。基本培养基为1/2MS+香蕉匀浆100 mL/L+碳粉1 g/L+柠檬酸0.03 g/L。激素设计为NAA分别为0.3、0.5、0.7、0.9 mg/L 4个梯度[9]。
　　2 结果与分析
　　2.1 叶片原球茎的诱导
　　沙西米和火凤凰原球茎的诱导比较容易，而109较难。由表2可知，109、火凤凰叶片原球茎诱导的最佳培养基为处理B3（1/3MS+肌醇0.1 g/L+椰汁100 mL/L+BA 5.0 mg/L+Ade 5.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L）；沙西米叶片原球茎诱导的最佳处理为A3（花宝1号3.0 g/L+肌醇0.1 g/L+椰汁100 mL/L+BA 5.0 mg/L+Ade 5.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L）。
　　2.2 原球茎的增殖和芽的分化培养基筛选
　　将2.1获得的原球茎在增殖和分化培养基中培养2个周期后，通过比较观察发现，3个品种各自在其最佳诱导培养基中的增殖和分化效果最佳。
　　2.3 壮苗培养基的筛选
　　将获得的芽在壮苗培养基中培养60 d后观察，见表3。由表3可知，109、火凤凰在处理Z-C（1/2MS+肌醇0.1 g/L+柠檬酸0.03 g/L+炭粉1.0 g/L+椰汁100 mL/L）中的壮苗效果最好，而沙西米在处理Z-D（花宝1号3.0 g/L+肌醇0.1 g/L+柠檬酸0.03 g/L+炭粉1.0 g/L+椰汁100 mL/L）中的壮苗效果最好。
　　2.4 生根培养基中激素浓度的筛选
　　将壮苗后的植株接种到不同NAA浓度的生根培养基中培养2个周期后发现，当NAA浓度为0.5 mg/L时，109和沙西米植株的生根效果最佳；当NAA浓度为0.7 mg/L时，火凤凰植株的生根效果最佳。
　　3 结论
　　通过以上试验结果可以得出，不同蝴蝶兰品种通过叶片原球茎途径再生的难易程度不同。不同品种的蝴蝶兰叶片原球茎诱导可能需要不同的基本培养基配方。109、火凤凰叶片原球茎诱导的最佳培养基为1/3MS+肌醇0.1 g/L+椰汁100 mL/L+BA 5.0 mg/L+Ade 5.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L；沙西米叶片原球茎诱导的最佳处理为花宝1号3.0 g/L+肌醇0.1 g/L+椰汁100 mL/L+BA 5.0 mg/L+Ade 5.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L。
　　通过叶片原球茎途径获得的再生芽对壮苗培养基的要求也不同，109、火凤凰在1/2MS+肌醇0.1 g/L+柠檬酸0.03 g/L+炭粉1.0 g/L+椰汁100 mL/L处理中的壮苗效果最好，而沙西米在花宝1号3.0 g/L+肌醇0.1 g/L+柠檬酸0.03 g/L+炭粉1.0 g/L+椰汁100 mL/L处理中的壮苗效果最好。此外，不同蝴蝶兰品种的再生植株在生根过程中对NAA浓度的要求也不一样，109和沙西米植株的生根效果最佳的NAA浓度为0.5 mg/L；火凤凰植株的生根效果最佳的NAA浓度为0.7 mg/L。
　　4 参考文献
　　[1] 谭文澄.观赏植物组织培养技术[M].北京：中国林业出版社，1991：47-253.
　　[2] 刘林.诱导蝴蝶兰叶片产生原球茎的研究[J].北方园艺，2003（6）：51.
　　[3] 马生健，杨艳梅.不同激素对蝴蝶兰幼叶诱导原球茎的影响[J].广东农业科学，2001（10）：36-37.
　　[4] 柴向华，李军，朱饱卿，等.金边蝴蝶兰的叶片培养[J].热带农业科学，2004，24（3）：18-20，69.
　　[5] 姚丽娟，徐晓薇，林绍生，等.蝴蝶兰原球茎增殖分化影响因子探讨[J].浙江亚热带作物通讯，2003，25（2）：16-18.
　　[6] 秦凡，周吉源.不同植物生长调节剂对蝴蝶兰快速增殖的影响[J].武汉植物学研究，2003，21（5）：452-456.
　　[7] 乔永旭.蝴蝶兰类原球茎的诱导[J].东北林业大学学报，2011，39（3）：34-36，43.
　　[8] 李金雨，洪丽萍.蝴蝶兰丛生芽途径的组织培养技术[J].热带作物学报，2010，31（4）：610-613.
　　[9] 刘亮，易自力，蒋建雄，等.蝴蝶兰丛生芽、原球茎途径的组织培养研究[J].亚热带植物科学，2008，37（3）：43-45.
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