地石榴提取物对小鼠肝纤维化的抑制作用

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　　【摘要】目的:探讨地石榴醇提物对日本血吸虫所致小鼠肝纤维化的影响。方法:小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴诱导肝纤维化模型,并于感染6周后灌胃给药,持续治疗8周。实验结束时,测定血清中ALT、AST、HA和肝组织中Hyp含量,计算肝指数。结果: 地石榴醇提物能ALT、AST、HA和HYP含量及肝指数。与模型组比差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。结论: 地石榴醇提物对日本血吸虫所致小鼠肝纤维化有防治作用。
　　【关键词】地石榴;醇提物;日本血吸虫;肝纤维化
　　Pomegranate extraction to mouse liver fibrosis inhibitory action
　　Jiang Congliang1Feng Tianyan2Luo You cheng2
　　【Abstract】Objective: The discussion pomegranate raises the thing mellowly to the Japanese blood sucking insect result mouse liver fibrosis influence. Methods: The mouse after the abdomen cutaneous infection Japan blood sucking insect tail you induction liver fibrosis model, and infects 6 weeks later fills the stomach to the medicine, treats continually for 8 weeks. When the experiment ended, determined in the blood serum ALT, AST, HA and in the liver organization the Hyp content, calculated the liver index. Results: The pomegranate raises the thing to be able mellowly ALT, AST, HA and the HYP content and the liver index. Has the significance with the model group compared to the difference (P<0.05 or P<0.01). Conclusion: The pomegranate raises the thing to have the prevention function mellowly to the Japanese blood sucking insect result mouse liver fibrosis.
　　【Key words】pomegranate; Raises the thing mellowly; Japanese blood sucking insect; Liver fibrosis
　　【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】1002-574X(2010)09-0024-02
　　地石榴(Ficus tikoua Bur. ),属桑科榕属,又称地瓜,地瓜藤,地枇杷。对于固土保水、绿化环境具有重要作用[1],茎叶可以做饲料,全年可采。全株可入药,味苦,微甘,性平。具有清热利湿之功,主治小儿消化不良,急性肠胃炎,痢疾,胃、十二指肠溃疡,尿路感染,白带,感冒,咳嗽,风湿筋骨疼痛等[2]。本实验研究地石榴醇提物对血吸虫所致肝纤维化的抑制作用,为地石榴开发应用提供科学依据。
　　1材料与方法
　　1.1药物:地石榴醇提物:由天然产物研究与利用湖北省重点实验室(三峡大学)提供,采地石榴地上部分,用90%乙醇提取。水仙碱,西双版纳版纳医药有限责任公司,批号:091004;复方鳖甲软肝片,内蒙古福瑞中蒙药科技股份有限公司,批号:20090625。
　　1.2动物与病原:5～6周龄清洁级昆明种小鼠, 雌雄各半,体重20±2 g,购自武汉同济医学院实验动物中心,动物生产许可证号为:SCXK(鄂)2009-0007;尾蚴,中国大陆株日本血吸虫阳性钉螺,由江西省寄生虫病防治研究所提供。
　　1.3试剂:丙氨酸氨基转移酶(ALT) 、天门冬氨酸氨基转移酶(AST),羟脯氨酸(Hyp)试剂盒,南京建成生物工程研究所,小鼠血清透明质酸(HA)ELISA试剂盒,上海研吉生物科技有限公司提供的美国R&D systems产品;其他试剂皆为分析纯。
　　1.4方法
　　1.4.1造模:将小鼠仰卧固定于鼠板上,剪除下腹部小块区域被毛,以生理盐水湿润裸露皮肤,于显微镜下计数盖玻片上尾蚴数目后,贴盖玻片于裸露皮肤上,保持湿润约10-15min,皮肤可见多处点状充血,表明尾蚴感染成功。将动物置于室温25℃环境下,饲养笼饲养,自由饮水,以全价颗粒饲料喂养[3]。
　　1.4.2分组与给药:实验动物攻击感染6周后,随机分为7组,每组10只,雌雄各半,分别为:正常对照组(未感染尾蚴)、模型组、地石榴醇提物高中低剂量组、秋水仙碱对照组、复方鳖甲软肝片对照组。
　　1.4.3取样:药物治疗8周以后将小鼠摘眼球取血,分离血清置4℃保存备用;同时立即剖取肝脏,用4℃预冷的生理盐水冲尽表面浮血,滤纸拭干、称重,计算肝脏指数。取小鼠肝脏右叶,置清洁的试管中,密封,4℃保存备用。
　　1.4.4测定
　　1.4.4.1肝脏指数:分别剖取肝脏,称重,按肝脏指数=[肝脏重量(g)/体重(g)]×100。
　　1.4.4.2血清生化指标测定:血清中ALT、AST、HA的测定按试剂盒说明书的具体步骤进行。
　　1.4.4.3肝组织中Hyp的测定:肝组织中Hyp的测定按照试剂盒的说明书进行。
　　1.4.5数据处理:所有数据均以均数±标准差(x±s)表示,统计方法采用单因素方差分析,统计数据采用SPSS 13.0处理。
　　2结果
　　结果显示地石榴醇提物对日本血吸虫所致小鼠肝纤维化具有防治作用,能改善肝功能,高中低剂量组均能降低ALT、AST含量(P<0.05或,P<0.01)。高中低剂量组均能降低透明质酸、羟脯氨酸含量(P<0.05或,P<0.01)。
　　3讨论
　　日本血吸虫病是严重危害人体健康的寄生虫病。血吸虫肝病是一种虫卵肉芽肿引起的慢性免疫性疾病,血吸虫肝病可继发肝纤维化的形成,免疫反应引起肉芽肿的形成和肝脏胶原蛋白的沉积而致肝纤维化[4]。国内外肝病学者普遍认为肝纤维化是可以逆转的,而肝硬化是不可逆转的。因此,如何防治肝纤维化是研究的重点。目前抗纤维化治疗主要着力于消除和抑制炎症的发生发展,迄今尚无改善或逆转纤维化特效药物,因此,特异性的抗纤维化药物的研制迫在眉睫。本研究应用日本血吸虫所致小鼠肝纤维化模型评价地石榴醇提物抗肝纤维化作用,探讨地石榴的进一步开发应用。
　　透明质酸由肝脏间质细胞合成,经内皮细胞摄取并分解,血清透明质酸是反映肝细胞的细胞外基质代谢的灵敏指标之一[5]。既可以准确反映肝脏纤维增生情况,也可以反映肝细胞损伤程度。羟脯氨酸是一种非必需氨基酸,为构成机体内胶原蛋白的特有成分。肝纤维化时,肝内主要增加的成分为胶原纤维。测定羟脯氨酸的含量,可以间接反应胶原蛋白的含量,从而反应肝纤维化程度[6]。地石榴醇提物能降低血清透明质酸和肝脏内羟脯氨酸含量,表明地石榴醇提物可能通过保护肝细胞,调节肝细胞的细胞外基质代谢,抑制肝内胶原纤维增生,进而阻止肝纤维化的形成。
　　肝纤维化是多种慢性肝病共有的病理过程。地石榴醇提物能降低ALT、AST含量,改善肝功能。降低透明质酸、羟脯氨酸含量,阻制肝纤维化进程,对肝纤维化具有防治作用。具有进一步研究利用价值。
　　参考文献
　　[1]王海锋,曾波,李娅等.长期完全水淹对4种三峡库区岸生植物存活及恢复生长的影响. 植物生态学报.2008,32(5):977~984
　　[2]兰茂著.《滇南本草》. 云南人民出版社.昆明. 1977.第一版第二卷:231
　　[3]闻慧琴,沈继龙,罗庆礼.芍药苷对感染血吸虫小鼠肝纤维化的影响.中国人兽共患病学报.2010, 26 (2):115-119
　　[4]Kumar Manoj,Sarin SK. Is cirrhosis of the liver reversible.Indian J Pediatrics, 2007, 74(4):393-399
　　[5]张关亭.4种血清学指标对肝病患者肝纤维化的诊断意义.医药论坛杂志.2010,31(11):50-50
　　[6]OkunoH, HazamaH, MuraseT, et al. Drugmetabolizing activity in ratswith chronic liver injury induced by carbon tetrachloride: Relationshipwith the contentofhydroxylpraline in the liver. Jpn J Pharmacol. 1986, 41:363-371

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