蓝墨云班课平台建设之草履虫活体观察方法优选
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【摘要】建设蓝墨云班课，就要为平台提供优质的课程材料，《动物学实验》中的草履虫观察，由于草履虫的活体难于观察，因此很难提供好的素材，本文通过多种草履虫观察方法的筛选实验，最后确定了体积定量法是观察效果最好的一种方法，值得推广应用。
【关键词】草履虫 体积定量法
【基金项目】牡丹江师范学院教学改革项目（18-XJ20059和18-XJ20013）资助。
【中图分类号】G642 【文献标识码】A 【文章编号】2095-3089（2019）13-0157-02
要借助于蓝墨云班课改进课程教学方法，就必然需要为平台提供好的素材，以便使学生能提前充满兴趣，提高预习效果和自主学习的主动性。为此需要对一些效果不是很理想的实验进行探索，以期改进和提高课程效果。
草履虫属原生动物门纤毛纲，是大学实验课程中最常用的单细胞实验动物的代表，是观察研究原生动物和单细胞动物的好材料。活体观察是研究原生动物的一种重要手段，由于其形体微小，需要利用显微镜进行观察，但由于其在水中运动快速往往导致跑出显微镜的视野不能够对其结构和运动方式进行比较全面和细致的观察。因此寻找一种好的观察方法成为《动物学实验》教学过程中很重要的一项研究内容。
目前所使用的《动物学实验》指导书上一般都是用棉纤维进行固定观察的，取单层薄棉絮放在载玻片上，滴上草履虫培养液，盖片镜检，如果草履虫还快速游动，可用吸水纸在盖玻片的一端吸去一些水分。这种方法的不足是，棉纤维的量拿捏不准，另外棉纤维不易分开，造成模糊，严重影响草履虫的活体观察效果。为此，我们对多种可能的方法进行了试验，以期对草履虫的活体观察方法进行优选，为《动物学实验》教学提供简单、结构清楚全面的观察方法。
1.擦镜纸纤维阻拦法
把擦镜纸剪成与盖玻片等大的小方块，放在载玻片上，再将草履虫培养液滴到擦镜纸上（以正好能湿润镜纸为宜），然后镜检。也可先将草履虫培养液滴在玻片中央，再覆盖擦镜纸，使其充分湿润后加盖玻片。
这种方法的优点是镜纸本身呈细密网络状，质地薄而均匀，能较好地限制草履虫的运动;不足是所加溶液必须适量，稍微多一点都容易因水分多导致限制不了草履虫的运动，溶液量过少又容易导致草履虫数量偏少难以找到阻滞住效果好的虫体。而且和棉花纤维一样容易因为纤维的阻挡不能够详细观察虫体的全部结构和自然的运动方式。
2.胶水稀释法
挤一滴稀释过的胶水于载玻片，滴一滴草履虫培养液于困扰剂中，用解剖针搅匀，再盖上盖玻片，然后显微镜下观察。此法操作简便，虫体运动极其缓慢甚至停滞不前，不仅能清楚地看清它的内部结构，如伸缩泡和收集管，而且还能较清晰地看见其纤毛有节律的摆动。另外由于胶水使得草履虫内外渗透压变化较大所以引起草履虫较高频率地渗透压调节，从而使得刺丝泡和收集管调节渗透压的观察效果更好。
此法的不足在于胶水要稀释，否则极易导致草履虫失水变形和死亡，另外胶水稀释程度难把握，因此这种方法需要反复多次尝试，而且稀释胶水易变质，不利于后续细胞核染色或刺丝泡释放实验。
3.玉米面糊法
将6 g细粒玉米面放入100 ml水中，搅拌均匀，加热至沸腾后，继续加热15 min，加热过程中必须有人观察，如发生溢出现象要及时处理;如果水分蒸发过多，玉米糊过稠，要注意添加水分使其始终保持100ml溶液。待混合物冷却至室温后，将草履虫培养液和玉米面糊按1：1—1：2混合均匀，即可进行观察。
玉米糊粘稠度较大，草履虫的运动受阻，运动速度明显减慢。可以观察到草履虫的整体外形。玉米面糊中含有大量营养物质，可观察到草履虫吞食营养物质颗粒的过程。因此可以容易观察到草履虫的摄食，还可以观察到刺丝泡。由于玉米面颗粒较大 ，还可以观察到草履虫通过狭窄缝隙时身体的变形现象。
4.体积定量法
用移液枪加入一定量的草履虫培养液于载玻片上，然后盖片镜检。这种观察方法的优点是，由于几乎没有人为加入杂质的影响，形态结构观察特别清楚，但同时由于水量有限，短时间后即容易失水变形甚至致死，尤其显微镜电源和光阑开的过大时容易导致快速失水。如果要进行较长时间的观察，改善的方法是从盖玻片一侧不断补充草履虫培养液。由于盖玻片有不同规格的，因此对应地溶液量也有所不同。常见的18×18mm2、20×20mm2、22×22mm2及24×24mm2等不同規格的盖玻片的最适草履虫培养液体积分别为6.5～7.0uL、10～11uL、11～12uL和 14uL。当然溶液越多草履虫数目越多越便于找到效果更好的，因此建议使用尺寸较大的盖玻片进行观察。
综上所述，棉纤维法作为一种传统的训练方法，不能够使观察者观察到清晰完整的草履虫结构，效果最好的是体积定量法，它具有简单、方便、准确和迅速的优点，能使观察者在短时间内观察到完整的草履虫结构以及运动方式，但渗透压的调节不如胶水稀释法;取食和排泄过程的效果不如玉米面糊法，总体而言体积定量法是最值得推广应用的一种草履虫活体观察法，是目前常用的草履虫活体观察法中最优的一种。
作者简介：
乔征磊（1980.9-），男，汉族，讲师，博士，主要从事动物学的教学和科研工作。
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