女贞子提取物治疗肝病的研究

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　　摘要：女贞子的主要提取物具有抗炎、抗氧化、调节免疫等多种生物活性，对不同原因导致的肝损伤可多靶点、多通路地发挥保护作用。本文就女贞子提取物红景天苷、齐墩果酸、芹菜素、特女贞苷在治疗肝病中的研究进行综述，以期为女贞子及其有效成分在临床治疗肝病的应用提供理论参考。
　　关键词：女贞子;齐墩果酸;芹菜素;红景天苷;肝损伤
　　中图分类号：R285.5                                文献标识码：A                                  DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.03.010
　　文章编号：1006-1959（2020）03-0031-04
　　Study on Ligustrum Lucidum Extract in Treating Liver Disease
　　LYU Ya-yun1，GONG Xian-qiong2
　　（1.Fujian University of Traditional Chinese Medicine，Fuzhou 351012，Fujian，China;
　　2.Xiamen Traditional Chinese Medicine Hospital，Fujian University of Traditional Chinese Medicine，Xiamen 361009，Fujian，China）
　　Abstract：The main extract of Ligustrum lucidum has a variety of biological activities such as anti-inflammatory， anti-oxidation， and regulation of immunity. It can protect the liver damage caused by different reasons with multiple targets and multiple pathways. This article reviews the researches of Ligustrum lucidum extract， salidroside， oleanolic acid， apigenin， and ligustrin in the treatment of liver diseases， in order to provide a theory for the application of ligustrum and its active ingredients in clinical treatment of liver diseases reference.
　　Key words：Ligustrum lucidum;Oleanolic acid;Apigenin;Salidroside;Liver injury
　　肝損伤（liver injury）是由病毒、酒精、药物、肥胖等多种因素诱发机体产生大量的炎症介质、细胞因子和氧自由基引起炎症反应，激活肝星状细胞（hepatic stellate cells，HSCs），导致肝细胞凋亡、坏死，肝纤维化形成等一系列病理变化。中药在治疗急慢性肝损伤方面具用独特的优势和悠久的历史，临床应用较广。女贞子为木犀科植物女贞的干燥成熟果实，入肝肾经，具用滋补肝肾、明目乌发的作用，常用于治疗各种原因所致的肝损伤。现代研究证实女贞子具有抗炎、保肝、抗肿瘤、调节免疫、抗氧化和调节血脂等多种药理作用[1]，其提取物主要包括三萜类如齐墩果酸[2]，环烯醚萜类如特女贞苷[3]，黄酮类如芹菜素[4]，苯乙醇类如红景天苷[5]等。研究表明女贞子提取物能够明显改善各种原因引起的急慢性肝损伤。本文就对女贞子提取物保肝机制研究进行综述，以期为女贞子及其有效成分治疗肝损伤提供一定理论参考。
　　1红景天苷
　　酒精、药物、毒性物质等多种化学物质可对肝脏造成损害，研究发现[6]，红景天苷可明显改善四氯化碳（carbon tetrachloride，CC14）诱导的小鼠肝损伤，下调丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase， MAPK）信号通路中氧化应激相关基因如生长阻滞和DNA损伤基因（growth arrest and DNA damage gene，Gadd）45a，Mapk7，重组人相关RAS病毒癌基因同源物2（recombinant human related RAS viral oncogene homolog 2，Rras2）的蛋白表达水平，抑制氧化应激反应，减轻线粒体损伤。
　　在包括肝移植和肝切除术在内的大型肝脏手术中，缺血再灌注（ischemical reperfusion injury，IRI）是手术过程及术后常见的并发症，改善IRI状态是提高肝移植及肝切除手术成功率的重要环节，而红景天苷可通过抗氧化应激、抑制炎症及抗细胞凋亡等方式改善肝INR状态。Feng J等[7]在分段型肝热IRI模型中发现，红景天苷通过抑制MAPK信号通路的激活，改善肝脏炎症反应、细胞凋亡和自噬，减轻肝IRI损伤。亦有研究提出红景天苷对分段型肝热IRI小鼠的保护作用可能是通过激活糖原合成酶激酶-3（glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β）/核转运因子2（nuclear transport factor 2，Nrf-2）信号通路抑制线粒体膜通道孔（mitochondrial permeablity transition pore，MPTP），减轻肝细胞坏死和凋亡，从而发挥保肝作用[8]。 　　非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）被认为是代谢综合征的“肝表现”，其与代谢综合征密切相关，如不干预，单纯性非酒精性脂肪性肝病会进一步进展为非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis，NASH），伴随着脂质过氧化和氧自由基的产生，可进一步加重炎症反应和激活肝星状细胞，导致肝纤维化形成，甚至进展为肝硬化、肝癌[9-11]。Yang ZR等[12]发现红景天苷可抑制高脂高胆固醇饮食诱导的NASH大鼠肝脏细胞色素P450家族成员2E1（cytochrome P450 2E1，CYP2E1）和Nox2 蛋白表达，降低MDA水平和提高SOD等抗氧化酶的活性，提出其通过抑制CYP2E1/Nox途径，减轻氧化应激反应，改善肝脂肪变性及炎症浸润，减少脂质积累，减轻NASH大鼠肝损伤。Zheng T等[13]指出红景天苷对NAFLD的保护作用机制与其通过抑制硫氧还蛋白互作蛋白（thioredoxin-interactingprotein，TXNIP）/NLRP3信号通路的激活，改善肝脏脂质代谢，减轻炎症损伤相关。
　　肝纤维化是各种慢性肝病后期的病理变化。多项研究表明转化生长因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）与肝纤维化进展密切相关。HSCs是细胞外基质（Extracellular matrix，ECM）的主要来源，TGF-β1是HSCs活化的重要因子，在肝纤维化进展中起重要作用。红景天苷能显著改善CC14和胆管结扎诱导的肝纤维化，抑制ECM的生成，降低Beclin-1和LC3水平及下调核因子-κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）、TGF-β1、p-Smad3/Smad3蛋白表达水平，并提高P62和IκBα的表达水平，红景天苷通过下调NF-κB和TGF-β1/Smad3信号通路减少细胞自噬，抑制小鼠HSCs活化，发挥其抗肝纤维化作用[14]。
　　肝癌是最嚴重的慢性肝病，也是导致肝病患者死亡的主要原因之一。吕红梅等研究发现[15]，红景天苷显著降低 HepG2细胞与基膜的粘附力及抑制肝癌细胞的基质金属蛋白酶-1（matrix metalloproteinase-1， MMP1）mRNA的表达，抑制肝癌细胞的浸润和转移。最新研究发现[16]，红景天苷显著减少伤口闭合区域以抑制细胞转移，抑制肝癌细胞对基质膜的侵袭，明显下调了Notch1、环氧化酶 2（Cyclooxygenase，COX2）、MMP-2、MMP-9基因表达，抑制Notch信号传导靶基因Hey1、Hes1和Hes5的表达，并呈剂量依赖性地上调了上皮性钙粘附蛋白（E-cadherin）的表达，提示红景天苷通过调节Notch1信号通路来抑制肝癌细胞的转移。总之，红景天苷可促进肝癌细胞的凋亡与自噬，抑制肝癌细胞转移，具有潜在的抗癌活性。
　　2齐墩果酸
　　Wan XL等[17]在D-氨基半乳糖（D-galactosamine，D-GalN）/脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）介导的急性肝损伤中发现，齐墩果酸干预后可明显降低小鼠血清转氨酶、肝组织中丙二醛（malondialdehyde， MDA）水平，升高谷胱甘肽（glutathione，GSH）水平，可抑制半胱氨酸蛋白酶（cysteinyl aspartate specific proteinase，caspase）、COX2及肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和Gadd45的mRNA的表达，降低磷酸化c-Jun氨基末端激酶（phosphorylated c-Jun N-terminal kinase，p-JNK）和NF-kBp65的蛋白表达水平，齐墩果酸可能通过抑制TNF-α激活的NF-κB/JNK信号通路减轻肝损伤。
　　Wang W等[18]在分段性肝热IRI模型中发现，齐墩果酸通过抑制高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1， HMGB1）的表达，及抑制TNF-α介导的JNK磷酸化，上调B淋巴细胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2， Bcl-2）的表达及下调Bcl-2-相关 X蛋白（BCL2-associated X protein，Bax）和Beclin1活化后诱导的caspase9的表达，改善炎症，抑制细胞凋亡及自噬反应，减轻肝损伤。亦有学者发现齐墩果酸可显著上调分段性肝热IRI小鼠Sestrin 2 蛋白 （Sesn2）、磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase ，PI3K）、蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）、HO-1等抗氧化酶的表达[19]，表明齐墩果酸可通过调节HO-1/Sesn2信号通路改善氧化应激，降低肝IRI的发生。
　　固醇调节元件结合蛋白-1C（sterol regulatory element-binding protein 1C，SREBP-1C）是肝脏脂质合成重要的转录因子，它通过胰岛素介导调节多种肝脏脂质合成相关基因的表达，如乙酰辅酶A羧化酶（scetyl-CoA carboxylase，ACC）、脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FAS）、硬脂酰辅酶A去饱和酶（stearoyl-CoA desaturase-1，SCD-1）[20，21]。有研究表明[22]，齐墩果酸可显著抑制SREBP-1c mRNA和核蛋白及其下游靶基因如ACC-1、FAS、SCD-1的表达，提示下调SREBP-1c的表达，减少其下游脂质合成相关基因的表达是齐墩果酸减轻高果糖饮食诱导的NAFLD大鼠肝脂肪病变的重要作用机制。
　　3芹菜素
　　在D-GalN/LPS诱导的小鼠肝损伤模型中，芹菜素治疗可明显改善肝损伤，小鼠肝组织NF-κB蛋白表达水平及TNF-α的水平明显下降;Nrf-2、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptor γ，PPARγ）蛋白表达水平明显升高，超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、过氧化氢酶（catalase，CAT）等抗氧化酶的活性增强，芹菜素的保肝机制可能与其调控PPARγ/NF-κB信号通路抑制炎症反应，上调Nrf-2信号通路增强抗氧化应激有关[23]。 　　Tsaroucha AK等研究发现[24]，芹菜素能抑制肝IRI大鼠肝组织Kupffer细胞的活化，促进Bcl-2的表达，抑制Bax、细胞间黏附分子-1（intercellular cell adhesion molecule-1，ICAM-1）、M30的表达，从而减轻肝脏炎症反应，抑制氧化应激和改善细胞凋亡的病理变化，延缓肝IRI的进程。有研究发现[25]，芹菜素可减轻肝细胞脂肪变性，增强胰岛素抵抗，抑制NLRP3炎性小体的激活及黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XO）活动，减少尿酸和活性氧（reactive oxygen species，ROS）的产生，改善肝脏脂质积累和炎症，表明芹菜素可能通过下调XO/NLRP3的表达改善高脂饮食（high fat diet，HFD）诱导的NASH。
　　有研究认为[26]，C1q肿瘤坏死因子相关蛋白2（C1q tumor necrosis factor-related protein 2，C1QTNF2）在肝硬化进展中发挥着保护作用，可以维持HSCs静止状态，而芹菜素可能通过调控C1QTNF2的表达发挥抗纤维化的作用。另有研究显示[27]，在CC14诱导的肝纤维化模型中，芹菜素的抗肝纤维化作用可能与其提高MMP1表达，抑制金属蛋白酶组织抑制因子1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1）表达，促进ECM降解有关。PI3K/Akt/雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）信号通路在调节细胞周期、增殖、凋亡和自噬方面发挥着关键作用。有研究发现[28]，芹菜素可降低HepG2细胞中磷酸化的PI3K、Akt和mTOR的水平，增加了LC3-Ⅱ蛋白水平及HepG2细胞自噬相关蛋白Atg5和beclin-1的表达，从而诱导HepG2细胞凋亡和自噬，说明芹菜素通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导细胞凋亡和自噬，从而抑制HepG2细胞的生长。
　　4特女贞苷
　　胡冬梅等研究发现[29]，特女贞苷可降低CCl4诱导肝损伤模型小鼠血清炎症因子如TNF-α、白细胞介素-6（interleukin 6，IL-6）等的水平，减轻肝脏的炎症的反应;并可抑制小鼠肝组织MDA的产生，增加抗氧化酶活性，上调肝组织Nrf-2、血红素加氧酶 1（heme oxygenase-1，HO-1）、谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基（glutamate-cysteine ligase catalytic subunit，GCLC）和NADPH醌氧化还原酶1[NAD（P）H Dehydrogenase Quinone 1，NQO1]蛋白表达水平，特女贞苷可通过激活Nrf-2/HO-1信号通路，抑制CC14诱导的氧化应激反应，改善肝损伤。
　　5總结
　　女贞子提取物有抗氧化应激、抑制脂质过氧化、抗炎、抑制HSCs的活化、促进肝癌细胞的凋亡与自噬等多种生物活性作用，可通过多靶点、多信号通路改善各种急慢性肝损伤。女贞子提取物的各种单体在肝损伤中有重要的药理学价值，是潜在的有效治疗药物。目前，女贞子提取物治疗肝损伤尚局限在动物实验阶段，需进一步研究女贞子提取物的安全性、有效性，为女贞子提取物治疗肝损伤的临床应用提供依据。
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　　收稿日期：2019-10-22;修回日期：2019-11-10
　　编辑/肖婷婷
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