MEK通路抑制剂对人胰腺癌细胞生长及细胞周期相关抑癌基因表达

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　　【摘要】目的 探讨细胞外信号调节激酶信号通路（MEK）通路抑制剂对人胰腺癌细胞生长及细胞周期相关抑癌基因表达的影响。方法 通过培养人胰腺癌PANC1、CFPAC1细胞系，用MEK通路抑制剂PD98059处理作为A组，用DMSO处理作为B组，比较两组用药后PANC1、CFPAC1细胞系的细胞数、用药后24 h胰腺癌细胞周期分布，统计A组干预后24h后抑癌基因表达变化。结果 用药3 d、6 d后A组PANC1、CFPAC1细胞系的细胞数低于B组，A组PANC1、CFPAC1细胞系的G0/G1期细胞比例高于B组，S期细胞数比例低于B组（P<0.05）;A组经PD98059干预后，PANC1、CFPAC1细胞p16INK4a、P21WAFl、P27K1PlmRNA表达上升。结论 MEK通路抑制剂PD98059可能通过上调细胞周期相关抑癌基因表达水平，抑制胰腺癌细胞增殖、细胞周期进展。
　　【关键词】MEK通路抑制剂;胰腺癌;抑癌基因
　　【中图分类号】R73 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095.6681.2020.12..02
　　胰腺癌是临床常见恶性肿瘤病症，近年来随着国民生活方式的转变和生活节奏的加快，国内胰腺癌发病率呈不断升高趋势[1]。胰腺癌患者病情隐匿，缺乏典型症状，大多数病例在发病时病情已发展成晚期，生存率较低[2]。本文就细胞外信号调节激酶信号通路（MEK）抑制剂对人胰腺癌细胞生长及细胞周期相关抑癌基因表达的影响，旨在为胰腺癌的临床治疗提供参考。
　　1 材料与方法
　　1.1 材料
　　中科院上海细胞生物学研究所提供的人胰腺癌PANC1、CFPAC1细胞系;美国Sigma公司提供的MEK通路抑制剂PD98059、DMSO;BIOBASE酶标仪;赛默飞Attune NxT流式细胞仪;BiO-Rad公司提供的无血清RPMI1640培养基;BIO-RAD TC20自动细胞计数器。
　　1.2 方法
　　通过培养人胰腺癌PANC1、CFPAC1细胞系，用MEK通路抑制剂PD98059处理（加入浓度50 ?mol/LPD98059）作为A组，用DMSO处理（加入浓度50 ?mol/LDMSO）作为B组。培养后1/3/6 d随机取三孔，使用细胞计数器完成细胞数检测。取对数生长期细胞，使用培养基培养24 h以同步化，比较两组干预24 h后的细胞周期，收集两组细胞，制作为单细胞悬液，取2 ml悬液，固定处理后去乙醇后孵育，染色后使用流式细胞仪检测细胞周期，重复3次。取干预24 h的两组细胞，使用Trizol法完成细胞总RNA提取，逆转录为cDNA，使用实时荧光定量PCR测定p16INK4a、P21WAFl、P27K1PlmRNA表达。
　　1.3 统计学方法
　　将数据录至SPSS 23.0，以x2检验定性资料（%、n），以t检验定量资料x±s，P小于0.05，提示有差异。
　　2 结 果
　　2.1 人胰腺癌细胞的生长抑制情况
　　根据检测结果可知两组使用的药物对人胰腺癌细胞的生长抑制效果，不同细胞系的细胞数如下，PANC1：1 d：A组为（17.37±3.83）×105/ml，B组为（16.42±3.17）×105/ml，t=1.351，P=0.090;3 d：A组为（18.47±2.38）×105/ml，B组为（25.53±2.29）×105/ml，t=15.115，P=0.000;6 d：A组为（19.36±2.29）×105/ml，B组为（63.16±6.13）×105/ml，t=47.329，P=0.000。CFPAC1：1 d：A组为（18.50±3.22）×105/ml，B组为（20.02±2.23）×105/ml，t=2.744，P=0.004;3 d：A组为（25.52±3.24）×105/ml，B组为（42.53±3.15）×105/ml，t=26.617，P=0.000;6 d：A组为（41.53±3.72）×105/ml，B组为（120.54±8.69）×105/ml，t=59.103，P=0.000。
　　2.2 胰腺癌细胞周期分布对比
　　不同细胞系的细胞周期分布如下：PANC1：G0/G1期：A组为（72.49±1.57）%，B组为（56.53±1.69）%，t=48.924，P=0.000;S期：A组为（5.14±1.10）%，B组為（14.32±1.31）%，t=37.947，P=0.000;G2/M期：A组为（24.83±3.38）%，B组为（25.16±1.42）%，t=0.636，P=0.263。CFPAC1：G0/G1期：A组为（80.25±1.63）%，B组为（68.22±1.74）%，t=35.678，P=0.000;S期：A组为（6.93±1.16）%，B组为（13.47±1.32）%，t=26.316，P=0.000;G2/M期：A组为（13.26±3.24）%，B组为（14.01±1.34）%，t=1.513，P=0.067。
　　2.3 A组经MEK通路抑制剂干预后抑癌基因mRNA表达变化
　　根据检测结果可知A组不同细胞系经MEK通路抑制剂干预后抑癌基因mRNA表达：PANC1：p16INK4amRNA表达为（5.32±0.43），P21WAFlmRNA表达为（3.12±0.34），P27K1PlmRNA表达为（4.21±0.29）;CFPAC1：p16INK4amRNA表达为（5.52±0.48），P21WAFlmRNA表达为（4.51±0.32），P27K1PlmRNA表达为（3.42±0.23）。
　　3 讨 论
　　胰腺癌中的RAS基因突变率较高，约为70～90%，可导致MEK转导异常，激活癌基因，造成抑癌基因失活。随着医学技术的不断发展，抑制MEK信号通路成为了抗肿瘤的靶点之一[3]。本次研究结果显示，用药1 d后，两组PANC1、CFPAC1细胞系的细胞数比较无明显差异，用药3 d、6 d后，A组上述细胞系的细胞数低于B组，说明A组采用的MEK通路抑制剂PD98059能够有效抑制人胰腺癌细胞生长、增殖。且A组PANC1、CFPAC1细胞系的G0/G1期细胞比例高于B组，S期细胞数比例低于B组，两组G2/M期细胞比例比较无明显差异，表明经过MEK通路抑制剂干预后，PANC1、CFPAC1细胞系的G0/G1期细胞比例明显上升，S其细胞数比例下降，可抑制细胞周期进展。分析后可知，PD98059作为一种MEK抑制剂，对人体ATP并无明显影响，抗肿瘤效果确切，可通过抑制人胰腺癌细胞系CFPAC1、PANC1生长，阻碍癌细胞由低分化期向高分化期转化，达到抑制胰腺癌细胞生长、增殖、控制病情进展的干预目标。结合本次研究结果发现，A组经PD98059干预后，CFPAC1、PANC1细胞P21WAFl、P27K1Pl、p16INK4amRNA表达水平显著上升，提示MEK通路抑制剂PD98059可能通过上调细胞周期相关抑癌基因表达水平，影响胰腺癌细胞生长、周期进展。
　　综上所述，与MEK通路抑制剂DMSO相比较，PD98059可能通过上调细胞周期相关抑癌基因表达水平，阻碍病情进展。
　　参考文献
　　[1] 中华医学会外科学分会胰腺外科学组.胰腺癌诊治指南（2014版）[J].中华消化外科杂志，2014，13（11）：831-837.
　　[2] 李映璇，高绥之，苏 松，等.Hippo-YAP信号通路活化参与二甲双胍抑制胰腺癌细胞生长的作用[J].中华胰腺病杂志，2016，16（2）：82-86.
　　[3] 乔银标，杨 波.HGF/c-MET信号通路抑制剂在抗胰腺癌中的研究进展[J].国际肿瘤学杂志，2017，44（4）：304-306.
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