海口市培龙活禽市场家禽禽流感病毒携带情况分析

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　　[摘要] 目的 了解海口市家禽禽流感病毒攜带情况，为该地区禽流感防控工作提供重要信息。方法 2017年1月—2018年12月对海口市培龙活禽市场家禽的咽拭子与肛拭子进行样品的采集，用病毒分离和全基因组测序的方法进行病毒的鉴定和分型，后将病毒序列上传到基因库中。结果 从24个月采集的600份样品中，检测出禽流感病毒阳性14份，阳性率为2.33%。检出该地禽流感病毒HA亚型4种，其中 H9、H3、H5和H6所占比例分别为57.14%、21.43%、14.29%和 7.14%。NA亚型2种，N2和N6占比分别为78.57%和21.43%。禽流感病毒检出月份为10月份、11月份、12月份、1月份，集中在12月份和1月份，其中1月份阳性率最高达24%。结论 通过采样调查和禽流感病毒全基因组测序，得出海口市活禽市场中的家禽携带的禽流感病毒主要为H9N2和H3N2;冬春季节为重要防控季节，提示今后海口市禽流感防控部门须加大对活禽市场禽流感的监测及其消毒和管理，实现防控禽流感的目的。
　　[关键词] 活禽市场;禽流感;病毒携带;家禽
　　[中图分类号] R19 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2020）05（a）-0021-04
　　Analysis of Poultry Avian Influenza Virus Carrying Status in Peilong Live Poultry Market in Haikou
　　QIU Jia-jun1， CAO Shi-rong1， CHEN Ya-qian1， XU Tian-xin1， SUN Xun1， LI Shan-qin2， WANG Li-xin3
　　1.School of International Nursing， Hainan Medical College， Haikou， Hainan Province， 571199 China; 2.Shenzhen Third People's Hospital， Shenzhen， Guangdong Province， 518112 China; 3.School of Basic Medicine and Life Science， Hainan Medical College， Haikou， Hainan Province， 571199 China
　　[Abstract] Objective To understand the carrying status of avian influenza virus in poultry in Haikou City， and to provide important information for the prevention and control of avian influenza in this area. Methods From January 2017 to December 2018， samples were collected from throat swabs and anal swabs of poultry from the Peilong live poultry market in Haikou， and virus identification and typing were performed by virus isolation and whole genome sequencing. The virus sequence is then uploaded to the gene bank. Results Out of 600 samples collected in 24 months， 14 were positive for avian influenza virus， the positive rate was 2.33%. Four HA subtypes of local bird flu virus were detected， of which H9， H3， H5 and H6 accounted for 57.14%， 21.43%， 14.29% and 7.14%， respectively. There were two NA subtypes， with N2 and N6 accounting for 78.57% and 21.43%， respectively. Bird flu virus detection months were October， November， December， and January， concentrated in December and January， and the positive rate in January was as high as 24%. Conclusion Through sampling survey and whole-genome sequencing of avian influenza virus， it is concluded that the avian influenza viruses carried by poultry in the live poultry market in Haikou are mainly H9N2 and H3N2; the winter and spring season is an important prevention and control season， suggesting that the future of avian influenza prevention in Haikou control department must increase the monitoring， disinfection and management of bird flu in the live poultry market to achieve the purpose of bird flu prevention and control. 　　[Key words] Live poultry market; Avian influenza; Virus carrying; Poultry
　　 禽流感病毒的流行给人类带来极大的危害。禽流感病毒传染性强、致病性强、病情发展快，一旦出现人感染禽流感病例，将会给人类健康带来巨大威胁。我国虽然已经在禽流感的致病、诊断及病原学等方面有了显著的成果，但是目前禽流感防控形势依然很严峻[1]。研究表明[2-4]活禽市场为禽流感病毒主要污染区，活禽市场暴露史或接触史成为人们感染禽流感病毒的一个重要因素。目前，我国大量研究[5-9]着重探究活禽市场外环境中禽流感病毒流行情况，而我们的研究则通过采集活禽的咽拭子、肛拭子来直接体现活禽禽流感病毒携带情况。海南省目前为止未发现人感染禽流感病例，也未有相关部门对活禽市场进行监测，为了解海口市活禽市场内家禽禽流感病毒携带情况，2017年1月—2018年12月对海口市培龙市场家禽进行咽拭子和肛拭子样品的采集，共600份，得到阳性样品的全基因组序列，为相关防控部门提供数据，以便其做好相应预防措施。报道如下。
　　1  材料与方法
　　1.1  采样方法
　　 连续2年每月采集海口市培龙市场内家禽的咽拭子和肛拭子。每月采集25只家禽的咽拭子与肛拭子，包括鸡9只、鸭8只、鸽子8只，共50个拭子，25份样本（一只家禽采集的咽拭子和肛拭子为一份样本）。每个拭子放置到一个病毒分离采样管中。共采集600份棉拭子，包括鸡216份，鸭192份，鸽子192份。
　　1.2  试剂
　　 病毒分离采样液包括10 g链霉素、12.5 g青霉素G钠盐、0.1 g硫酸庆大霉素、10 mL两性霉素 B 溶液、2.5 g Albumin Bovine V（BSA），均购自上海生工生物工程股份有限公司。另加入250 mL已高压的40%甘油，用dulbecco's modified eagle medium（DMEM）培养基定容至1 000 mL备用。配制后测pH在7.0～7.5 之间。病毒分离采样液按1.2 mL/支分装于2 mL RNaseFree EP管中。采集样本后，将样本置于-80℃保存，并尽快邮寄至深圳市疾病预防控制中心进行后续接种、鉴定及全基因组测序。
　　1.3  检测仪器及试剂盒
　　 全自动核酸提取仪选用西安天隆科技有限责任公司的自动核酸提取仪。试剂盒采用南京诺唯赞生物科技有限公司的P611-01HiScript Ⅱ One Step RT-PCR。
　　1.4  检测及分型鉴定方法
　　 待检样品接种鸡胚后收获尿囊液提取核酸进行病毒鉴定;待检样品鸡胚接种后测定血凝效价，同时用PB1基因扩增来进行流感通用引物鉴定;对经鸡胚分离，禽流感通用引物PCR鉴定为阳性的病毒分离样本进行全基因组二代测序。
　　2  结果
　　2.1  禽流感病毒的阳性率
　　 2017—2018年，從海口市培龙市场共采集600份样品，包括600份禽类咽/肛拭子，其中鸡216份，鸭192份，鸽子192份，检测出14份A型流感病毒核酸阳性，总阳性率2.33%，2017年和2018年分别为2.66%和 2.00%。鸡的阳性率最高，达到3.70%，2017年和2018年分别为5.56%和1.85%;鸭的阳性率次之为2.08%，2017年和2018年均为2.08%;鸽子的阳性率为1.04%，2017年和2018年分别为0.00%和2.08%，见表1。
　　2.2  禽流感病毒亚型检出结果
　　 从14个检出强阳性的样品中，检出4种HA亚型，不同亚型病毒检出率由高到低依次为H9（57.14%）、H3（21.43%）、H5（14.29%）、H6（7.14%）;检出2种NA亚型，N2（78.57%）、N6（21.43%）;H9N2亚型检出率最高，占比57.14%，其次为H3N2占比21.43%。
　　2.3  不同亚型病毒在家禽中的分布
　　 H9N2亚型病毒全部在鸡中检出;H3N2、H5N6、H6N6亚型病毒都有在鸭中检出。见表2。
　　2.4  不同月份的型别检出率
　　 检出月份为10月份、11月份、12月份、1月份，集中在12月份和1月份，其中1月份阳性率最高达24%，12月份阳性率为16%，且这两个月份检出的亚型种类较多。见图1。
　　3  讨论
　　3.1  总体情况
　　 2017年1月—2018年12月，持续对海口市培龙市场的鸡、鸭和鸽子进行样本采集，研究结果显示阳性结果数较少。究其原因：①海南省作为从未报道过人感染禽流感病毒的省份，人感染病毒几率低，病毒存在及流动较少;②可能与采样技术不够成熟有关;③未对环境混合样本进行采集。尽管如此，结果仍提示2017年和2018年该活禽市场内的家禽均携带有禽流感病毒，且主要集中在冬春季节。
　　3.2  亚型检出情况及其宿主特点
　　 检出率最高的为H9N2禽流感病毒，这与我国大量研究结果一致。H9N2禽流感病毒存在种属屏障，禽流感病毒一般不导致人感染[10]，但有最新研究表示[11]该亚型毒株已突破种间屏障，能够直接感染人导致人患病。对于免疫力正常的人感染该病毒后临床表现并不明显，但是对于那些免疫功能受抑制、功能低下的患者来说，他们感染禽流感病毒的后果可能会很严重[12]。此外，H9N2型别病毒能够为其他新型禽流感病毒的出现提供基础，从而产生新型重配病毒[13];因此，H9N2型别病毒危害不容小觑，建议活禽市场针对该型别加大防控力度。且H9N2全部在鸡的咽拭子中检出，这说明H9N2已经在鸡中形成稳定体系，与赵聪慧等[14]的研究结果一致。鸭所携带的禽流感病毒亚型较多，包括H3N2、H5N6、H6N6亚型，但是这些亚型并不同时存在于同一只鸭身上，提示本地鸭的混合感染情况并不严重，这与赵冉等[11]的鸭多为3种以上亚型混合感染的研究结果有所不同。其原因有待进一步采样分析。 　　3.3  禽流感病毒检出月份分布
　　 研究结果表示该活禽市场禽流感病毒的检出情况具有明显的月份集中性，这与中国疾病预防控制中心的张烨[15]的研究结果南方省份全年流行禽流感病毒不一样，该研究结果显示禽流感病毒核酸阳性主要集中于12月及1月，且这两个月份检出型别较多，这与刘红莲等的研究[16]提示禽流感病毒核酸阳性集中于冬春季结果相近。相较于其他城市，海南地处中国最南边，尽管四季温差不大，在海南的“冬春季”太阳辐射较夏秋季弱，灭活能力降低，且月平均降雨量高，这样一来就会使得病毒存活时间变长，人感染病毒的几率也相应增高。此外，冬春季为候鸟迁徙季，候鸟大多集中在我国南部的湖泊、河流，而家禽大多散养在这些区域，那么野禽所携带的禽流感病毒传播给家禽，家禽便通过交易、转运至人流量大、活动频繁的活禽市场[17]。因此，在海南，冬春季节应重点落实对活禽市场的防控。
　　3.4  预防措施
　　 根据实地考察了解到，培龙活禽市场的防控措施为一天一清洗消毒，一月一休市。但结果显示此市场H9N2亚型病毒检出率最高，且全部在鸡的咽拭子中检出很大可能与水源污染有关;采样时发现活禽市场地面总是潮湿，这有利于禽流感病毒通过水源传播。由此看来，该活禽市场的禽流感预防措施、消毒制度等仍有所欠缺。有研究指出禁止活禽过夜能有效降低市场的禽流感病毒污染情况，尤其能够降低鸡所携带的H9N2型别病毒[18]。此外，很多国内[7-9，19]研究中有提到禽流感病毒大多存在于宰杀禽类的案板以及清洗禽类的污水和禽类饮用水中，这也可能与H9N2全部在咽拭子中检出有关。所以培龙市场可在采取休市、禁止活禽过夜措施的基础上再做到合理处理污水并管理好禽类饮用水来减少H9N2病毒的存在。
　　 该次研究的采样范围和对象都具有局限性，应在下一阶段的研究中扩大采样范围并对环境混合样本进行采集，进一步验证该课题现阶段得出的结论H9N2全部在鸡的咽拭子检出与水源污染有关，并着重解决为什么鸭携带多种亚型却不存在混合感染这一问题，从而更好地为海口市禽流感防控工作提供依据。
　　[参考文献]
　　[1]  张毅，王幼明，王芳，等.我国禽流感研究进展及成就[J].微生物学通报，2018（3）：497-503.
　　[2]  罗佳，罗德维，李青峰.成都某医院收治的人感染H7N9禽流感病例回顾性分析[J].预防医学情报杂志，2019，35（7）：651-656.
　　[3]  陈光敏，郑奎城，谢剑锋，等.福建省人感染H7N9禽流感病例对照研究[J].中国公共卫生，2019，35（8）：1081-1086.
　　[4]  张如胜，黄政，刘晓蕾，等.长沙市活禽市场人H9N2亚型禽流感感染来源的研究[J].中华疾病控制杂志，2019，23（5）：567-572.
　　[5]  贾金霞，师应彪，李小宁，等.2015-2017年定西市活禽市场外环境禽流感监测分析[J].疾病预防控制通报，2019，34（2）：18-20，33.
　　[6]  潘燕兰，黄浩.2012-2017年梧州市活禽市场外环境禽流感病毒监测结果分析[J].现代预防医学，2019，46（7）：1311-1315.
　　[7]  王璐璐，孙海波，孙佰红，等.辽宁省外环境禽流感病毒监测结果[J].预防医学，2019，31（3）：221-224.
　　[8]  朱智龙，严秀英，唐荣.2017年抚州市活禽市场禽流感病毒外环境分布[J].江西医药，2019，54（2）：174-176.
　　[9]  黄丰光，高淑萍，乐燕红，等.2014-2015年河源市活禽市场外环境禽流感病毒调查[J].热带医学杂志，2017，17（7）：981-984.
　　[10]  朱闻斐，舒跃龙.新型H7N9禽流感病毒的病原学研究进展[J].生命科学，2015，27（5）：518-52.
　　[11]  赵冉，陈琼，蔡振鸿，等.厦门地区低致病性禽流感病毒流行病学调查与分析[J].中国人兽共患病学报，2019，35（2）：164-167.
　　[12]  Cheng VCC，Chan JFW，Wen X，et al.Infection of immunocompromised patients by avian H9N2 influenza A virus[J].J Infect，2011，62（5）：394-399.
　　[13]  曹蓝，刘艳慧，陈艺韵，等.广州市禽类交易区休市前后禽流感病毒动态监测[J].中华疾病控制杂志，2018，22（6）：648-650.
　　[14]  赵聪慧，郭晶，李旭勇.H9N2亚型禽流感病毒研究进展[J].黑龙江畜牧兽医，2019（3）：35-39，179.
　　[15]  张烨.2010-2012年我国家禽相关环境中禽流感病毒分布调查[D].北京：中国疾病预防控制中心，2013.
　　[16]  刘红莲，郑惠能，颜玉炳，等.2011-2014年厦门市环境和职业暴露人群禽流感监测分析[J].中国卫生检验杂志，2016， 26（1）：109-112.
　　[17]  張烨，李晓丹，邹淑梅，等.2009-2013年我国活禽市场环境样本中禽流感病毒的检测[J].病毒学报，2015，31（6）：615-619.
　　[18]  Leung YHC，Lau EHY，Zhang LJ，et al.Avian influenza and ban on overnight poultry storage in live poultry markets，Hong Kong[J].Emerg Infect Dis，2012，18（8）：1339-1341.
　　[19]  傅伟杰，刘晓青，袁辉，等.江西省2012-2015年禽类外环境中禽流感监测及感染病例分析[J].中华疾病控制杂志，2017， 21（6）：590-593.
　　（收稿日期：2020-02-07）
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