下调miR-27a表达对三阴乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的 影响研究
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摘 要：目的 分析下调miR-27a表达对三阴乳腺癌（TNBC）细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 选取我院自2018年4月～2020年4月收治的85例三阴乳腺癌患者，采用实时荧光定量PCR法对患者癌组织miR-27a表达进行分析，并分析该表达与患者临床特征之间的关系。结果 CCK-8检测结果，在接种后3、4和5 d，miR-27a inhibitor组细胞增殖活性较NC组明显降低（P<0.05）;Transwell 迁移实验结果显示，转染miR-27a 抑制物 48 h 后穿膜细胞数明显少于NC 组（P<0.05），而 NC 组 与 control 组相比穿膜细胞数无明显差异。结论 miR-27a在TNBC组织中表达升高，将miR-27a表达下调可有效抑制TNBC细胞中MDA-MB-453的增值、迁移与侵袭能力，对控制患者病情具有极为重要的作用。
关键词：miR-27a 三阴乳腺癌 细胞增殖 细胞迁移 细胞侵袭
中图分类号：R737.9 文献标识码：A 文章编号：1003-9082（2020）06-0-01
三阴乳腺癌（triple-negative breast cancer，TNBC）是指孕激素受体（（progesterone receptor，PR）与人类表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor-2，HER2）表达为阴性的乳腺癌，在所有乳腺癌患者中占约15%～25%，且具有特殊生物表达及临床病理特征的疾病。与非三阴乳腺癌（non-triple-negative breast cancer，non-TNBC）相比，TNBC具有更高的复发率与转移性，对患者的生存周期造成了极为显著的影响[1]。因此，在对TNBC发生与发展的分子机制进行探讨，寻找有效的治疗靶点成为当前对乳腺癌研究中的重要课题。本此研究针对下调miR-27a表达对TNBC细胞增殖、迁移和侵袭的影响进行分析，现报道入下。
一、资料与方法
1. 一般资料
选取我院自2018年4月～2020年4月收治的85例三阴乳腺癌患者，年龄42～65岁，平均年龄（53.52±3.25）岁，所有患者均行病理学诊断为非特殊型浸润性导管癌，且行免疫组化学法染色ER、PR、HER2均为阴性。同时，根据行荧光测定量PCR结果，miR-27a表达与癌旁组织对比升高大于50%则为miR-27a高表达组，而miR-27a表达与癌旁组织对比不升高过升高<50%则为miR-27a低表达组。所有患者术前均接受放化疗。
2. 方法
TNBC细胞MDA-MB-453采用RPMI-1640培养基进行培养，而MCF-10A细胞则采用DMEM高糖培养基培养。在所有培养基中均加入10%胎牛血清、100U/L请每组与100U/L链霉素，培养条件为37℃、95%饱和温湿度以及5%CO2。并根据细胞生长状态2～3d进行1次换液。细胞生长至70%融合时，0.25%胰酶细胞消化液消化穿戴，取第3代对数生长期细胞进行后续试验。
细胞转染：取对数生长期细胞接种于6孔板，使用Lipofectamine 3000转染试剂，参考说明书分别向MDA-MB-453細胞转染miR-27a抑制物（miR-27a inhibitor组）和miR-27a阴性对照片段（NC 组），未转染组作为空白对照（control组）。荧光显微镜下检查转染效率，转染成功后培养板置37℃培养箱继续培养，48h后收集细胞进行后续实验。miR-27a抑制物序列为5’-GCGGAACUUAGCCCACUGUGAA-3’。
3.观察指标
转染miR-27a抑制物对MDA-MB-453细胞增殖的影响。
转染miR-27a抑制物对MDA-MB-453细胞迁移和侵袭的影响。
4. 统计学方法
采用SPSS 19.0 进行统计学分析，计数资料采用（%）和x2检验，计量资料采用（x±s）和t检验，以（P<0.05）具有统计学意义。
二、结果
1.转染miR-27a抑制物对MDA-MB-453细胞增殖的影响
CCK-8 检测结果，在接种后3、4和5 d，miR-27a inhibitor组细胞增殖活性较NC组明显降低（P<0.05），表明下调MDA-MB-453细胞中miR27a表达可显著抑制细胞增殖能力。
2.转染miR-27a抑制物对MDA-MB-453细胞迁移和侵袭的影响。
Transwell迁移实验结果显示，转染miR-27a抑制物48h后穿膜细胞数明显少于NC组（P<0.05），而 NC 组 与 control 组相比穿膜细胞数无明显差异;同样， Transwell 侵袭实验呈现出一致的结果。表明下调 miR-27a表达可抑制TNBC细胞MDA-MB-453的迁移和侵袭能力。
三、讨论
乳腺癌是女性患者中极为常见的恶性肿瘤之一，具有较高的发病率与死亡率。TNBC是临床中特殊的乳腺癌，具有发病年龄低、家族史明显、恶性程度高等特点，因此其发展机制受到了医学界的重视[2]。
临床研究中表示，miR-27a作为致癌因子已经被发现了在多种实体肿瘤中表达升高，并且与细胞的增值、迁移以及侵袭有着极为密切的关系。本此研究通过对此进行研究表明，下调MDA-MB-453细胞中miR27a表达可显著抑制细胞增殖能力，并且下调 miR-27a表达可抑制TNBC细胞MDA-MB-453的迁移和侵袭能力[3]。
综上所述，通过对下调miR-27a表达对三阴乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响进行研究，能准确地对患者病情进行评价，从而为患者后续治疗提供可靠的参考依据。
参考文献
[1]蒋雪梅，权毅.上调miRNA-27a-3p对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响[J].郑州大学学报：医学版，2019，54，（02）：136—140.
[2]李继勇，解荣，喻远航等.微小RNA-26a对三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭的调控作用[J].中华实验外科杂志，2019，36，（2）：245—247.
[3]王伟淋，王海波，张润泽等.KIF3A基因沉默和过表达对人三阴性乳腺
癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响[J].中华实验外科杂志，2019，36，（12）：
2173—2175.
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