四物汤活性成分提取工艺研究进展
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【摘要】目的:综述四物汤活性成分提取工艺研究进展。方法:查阅近20年来有关四物汤活性成分提取的文献。结论在提取中可结合各物质活性分析,选取相应成分为指标,选用最合适及最佳方案进行提取。
【关键词】四物汤;提取工艺;多糖;白芍苷;阿魏酸;挥发油
四物汤是补血调血的经典名方,始见于宋代《太平惠民和剂局方》,由熟地、当归、白芍、川芎四味中药组成,有“补血之专方”的美称,常用于治血虚。四物汤有效成分包括阿魏酸、芍药苷、没食子酸、多糖类与挥发油等,方中所含芍药苷、阿魏酸、没食子酸及多糖类成分具有补血调血、增强机体免疫、抗肿瘤、抗放射性损伤、抗血栓、抑制血小板凝集以及抑制血栓素样物质的释放、改善微循环、扩张冠状动脉等药理作用,视为主要活性成分。
1整方提取
2015年版中国药典给出四物合剂的提取工艺:当归和川芎冷浸0.5h,用水蒸气蒸馏,水溶液另器保存,药渣与白芍、熟地黄加水煎煮三次,第一次1h,第二、三次各1.5h,煎液合并滤过后与上述水溶液合并,加入乙醇使醇含量达55%。
1.1水提法
中药复方传统提取工艺大多为水提法,本处方中除挥发油外大部分成分都溶于水。
魏学军等以四物汤中芍药苷、没食子酸和总多糖得率为评价指标,采用正交试验设计法,选取液固比、提取温度、提取时间作为考察因素优选提取工艺。结果表明提取时间和液固比具显著性影响(P<0.01,P<0.05),提取温度对结果影响无显著性,以此确定最优工艺为30倍量水,在温度85°C下提取2次,每次提取3h。含量测定结果为芍药苷21.31m/g,没食子酸0.69m/g,多糖1.65/g。
郭江玉等以多糖、阿魏酸、芍药苷、干膏率为评价指标,采用正交试验设计,以加水量、提取时间、提取次数为考察因素,运用层次分析法确定权重,综合评价最佳工艺。结果表明影响因素大小为提取次数>提取时间>加水量,其中提取次数具有显著性影响(P<0.05),最终确定最佳工艺为10倍量水,提取2次,每次2.5h。测定结果为多糖1.54g/g,阿魏酸14.32mg/g、芍药苷162.85mg/g干膏率44.61%。
伍勇等利用星点设计一效应面法,以药材浸泡时间、加水量和提取时间为自变量,以浸膏得率和梓醇、芍药苷、阿魏酸含量的总评“归一值”为评价指标,进行二次多项式拟合,描绘三维效应面,从效应面上选取最佳工艺。最终确定最佳工艺为加水10.2倍量,浸泡68min后提取105min。含量测定结果为浸膏得率15.7%,芍药苷230.61m/g、梓醇23.59mg/g、阿魏酸14.26m/g。
水提法中提取温度对结果无显著性影响,而提取时间和液固比具显著性影响,而其中提取次数影响最大。
1.2水提醇沉法
目前大多数中药制剂工艺采用乙醇沉 淀法以除去水溶性杂质。即应用一定浓度乙醇对水提取物选择性溶解而达到精制纯化目的。
何瑶等结合药效作用,研究不同提取工艺对血虚小鼠造血功能的影响。结果表明3种工艺均能改善血虚模型小鼠造血功能,其中水提组和50%乙醇渗漉组与模型组比较均有差异性显著(P<0.05)且优于水提醇沉组。
谭有能嘲研究水提法、水提55%醇沉法、大孔吸附树脂除杂提取液对血虚小鼠的补血作用。结果提示水提液和水提醇沉液均有补血作用且水提液>55%醇沉液;而大孔吸附树脂除杂液并不能提高以上指标。
梁乾德比较20%乙醇沉淀物、80%乙醇沉淀物和80%乙醇沉淀上清提取物对血虚小鼠补血作用,结果表明80%醇沉和80%醇沉上清液可升高外周血像白细胞,而20%醇沉无明显作用。
水提醇沉法结合药效实验表明,水提醇沉法药效并不如水提法。20%醇沉法无效,而50%、55%、80%醇沉法均有补血效果。原因可能是多糖为补血作用重要成分,20%醇沉物为粘液质以及淀粉、大分子多糖、蛋白质等,多糖含量较低;而80%醇沉物主要为低聚糖和多糖。另外实验发现大孔树脂除杂后无补血作用,考虑为失去多糖成分所致。
1.3乙醇提取
王玉华采用乙醇回流法,以乙醇浓度、溶媒用量、提取时间、提取次数为影响因素,以芍药苷、阿魏酸及出膏量为测定指标,采用正交试验优选工艺。结果显示回流次数、回流时间和乙醇浓度具有显著性影响,溶剂用量无显著影响。最终确定最佳工艺为95%乙醇回流提取二次,分别为1.5h、1.0h,溶媒用量分别为8倍量、6倍量。含量测定结果为芍药苷5.09m/g,阿魏酸223.9mg/g,出膏率21.32%。
王玉华同时用冷浸法提取,测得阿魏酸含量为96.84u/g,芍药苷2.45mg/g,与回流法相比提取含量低且耗时长。
1.4乙酸乙酯提取
陈薇以乙酸乙酯进行提取并研究其促进大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的活性。结果表明提取成分包括蒿本内酯、十六酸甲酯、十八酸乙酯,具有较强的促进体外增殖的活性。
贾梅等研究乙酸乙酯对急性血瘀模型大鼠血液流变学、凝血功能和血小板系统的影响,发现乙酸乙酯提取液显著降低大鼠各切变率下全血黏度、血浆黏度;明显延长凝血酶时间(TT),凝血酶原时间(PT),活化部分凝血活酶時间(APTT),降低血浆纤维蛋白原(FIB)含量;明显抑制ADP诱导的血小板聚集率;显著降低血浆TXB2含量,升高6-ket0-PGFla含量(P<0.01)。
2挥发油的提取
四物汤中挥发油主要来源于当归和川芎。当归挥发油具有降低血压、改善心肌缺血、抗心律失常、提高机体免疫功能及抗炎镇痛等药理作用;川芎挥发油具有抑制血小板活化,改善微循环等,但性质极不稳定。
谭有能认为药典工艺提取挥发油含量低,原因为首先挥发油一般提取时间为3-8h,而药典工艺为30min其次实验室提取率及药物中挥发油含量均低。
杨欢等采用正交试验法,以当归川芎粉末粒度、加水量、提取时间为主要影响因素,以挥发油得率为评价指标,以水蒸气蒸馏法提取。结果表明粉末粒度和提取时间具有显著影响(p<0.05),最终确定最佳工艺为:取当归、川芎饮片粉碎成中粉,加入8倍量水,浸泡30min,水蒸气蒸馏提取5h。 3小结
中药活性成分提取是实现中药现代化战略的重要组成部分。以上所述四物汤活性成分提取方法各有其优点和缺点,且得到活性物质含量差别较大。在提取中可结合各物质活性分析,选取相应化合物为指标,选用最合适及最佳方案进行提取。
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