夏天无的质量评价研究进展

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　　[摘要] 夏天无是2015年版《中华人民共和国药典》所收载的一味常用中药，其药用部位为罂粟科植物紫堇属伏生紫堇的干燥块茎。其主要药理活性成分为生物碱类，临床常用于治疗中风偏瘫、头痛、跌扑损伤、腰腿疼痛及风湿痹痛等。本文对近年来夏天无质量评价相关研究进行归纳总结，以期为指导夏天无和同科药材的鉴别及建立科学合理的质量评价标准提供借鉴和参考。本文为进一步保障临床用药的安全性及有效性提供了一定的参考。
　　[关键词] 夏天无;质量评价;定性鉴别;定量分析;研究进展
　　[中图分类号] R284.1          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2019）03（a）-0037-04
　　[Abstract] The Rhizoma Corydalis decumbentis is a commonly used traditional Chinese medicine contained in the Pharmacopoeia of the People′s Republic of China in 2015. Its medicinal part is the dried tuber of Coydalis decumbens （Thunb.） Pers.. Its main pharmacological active ingredients are alkaloids， which are commonly used in the treatment of stroke hemiplegia， headache， fall injury， lumbar and leg pain， rheumatism and arthralgia. This paper summarizes the recent studies on quality evaluation of Rhizoma Corydalis decumbentis in order to provide references for guiding the identification of Rhizoma Corydalis decumbentis and other medicinal materials and establishing scientific and reasonable quality evaluation criteria. This article provides some references for further ensuring the safety and effectiveness of clinical medication.
　　[Key words] Rhizoma Corydalis decumbentis; Quality evaluation; Qualitative identification; Quantitative analysis; Research advances
　　中藥夏天无为罂粟科植物伏生紫堇Corydalis decumbens（Thunb.） Pers.的干燥块茎[1]，又名伏地延胡索、一粒金丹等，主产于江西、福建、安徽、浙江等省，以江西产质量为佳，其中“余江夏天无”为国家地理标志保护产品[2]。夏天无味苦、微辛，性温，具有活血止痛、舒筋活络、祛风除湿的功效，临床上可用于治疗多种疾病，如高血压、类风湿性关节炎、心律失常、缺血性脑血管病、腰腿疼痛、低度近视等[1，3-4]。目前，以夏天无为主要活性成分的中成药有夏天无注射液、夏天无滴眼液、夏天无胶囊、夏天无片、复方夏天无薄膜衣片等。
　　夏天无的主要成分为生物碱，总生物碱的含量为2%～3%，主要为苯酞异喹啉类（比枯枯灵、咖若定、紫堇明定、夏无宁碱、夏天无碱丙素、苏元胡碱等）、苄基异喹啉类（夏天无碱、罂粟碱、夏天无碱甲素等）、原小檗碱类（延胡索乙素、巴马汀、四氢药根碱）、原阿片碱类（原阿片碱、隐品碱、别隐品碱）及简单异喹啉类，其中叔胺类生物碱（如延胡索乙素和原阿片碱）在夏天无原药材中的含量约为季铵类生物碱（如黄藤素和盐酸小檗碱）含量的8倍[5]。
　　此外，夏天无与延胡索为同科植物，其性味功效相似，两者都含有延胡索乙素、原阿片碱、巴马汀等生物碱，且总生物碱均是其主要药理活性成分，市场上容易出现混用、误用的情况，严重影响临床用药的有效性及安全性。本文对夏天无质量评价相关的研究文献进行归纳总结，对夏天无和易混用药材的鉴别以及夏天无的质量深入研究提供借鉴和参考。
　　1 定性鉴别
　　长期以来，中药鉴别最常用的鉴定方法包括基源鉴定、理化鉴定、显微鉴定和性状鉴定。随着色谱、光谱等仪器分析手段的不断进步，紫外-可见光谱法、红外吸收光谱法、气相色谱法、液相色谱法等技术也被运用于夏天无等中药的鉴别。
　　1.1 薄层色谱法
　　薄层色谱法具有分离、鉴定双重功能，而且操作简便、直观性强，主要用于中药材、中药饮片和中药制剂的定性与定量分析[6]。2015年版《中华人民共和国药典》[1]鉴别项下规定：夏天无药材以环己烷-乙酸乙酯-二乙胺（16∶3∶1）为展开剂，喷以稀碘化铋钾试液，供试品与对照品对应位置上显相同颜色斑点。张佳佳等[7]以正己烷-氯仿-甲醇（8∶5∶2）为展开剂，置碘缸中5 min后，挥尽碘，置于紫外光灯（365 nm）下检视，结果延胡索有4个斑点，夏天无有7个斑点，该方法可以简单、快速地鉴别延胡索与夏天无，该方法专属性强，灵敏度高。
　　1.2 红外吸收光谱法
　　红外吸收光谱法具有鲜明的特征性，其谱带的数目、位置、形状和强度都随化合物不同而各不相同，且该方法测定快速、样品用量少、不破坏样品、操作简便、分析灵敏度高，是定性鉴别的有力工具。魏凤环等[8]采用红外吸收光谱法对同科植物夏天无与延胡索进行鉴别，夏天无提取物在1757 cm-1、1467 cm-1、1246 cm-1附近出现了3个延胡索不具有的峰，而延胡索提取物在1090 cm-1、882 cm-1附近有2个夏天无所没有的峰，从而实现对二者的快速鉴别。 　　1.3 中药指纹图谱技术
　　中药是一个多组分的复杂体系，中药化学成分的复杂性与多样性是其临床功效的物质基础，也是中药质量评价的难点与重点，中药指纹图谱可以宏观、整体表征中药主要化学成分的相关特征，是目前符合中药特色的可用于评价中药稳定性、真实性与一致性的质量控制技术[9]。目前，夏天无指纹图谱研究的技术主要有薄层色谱指纹图谱、高效液相色谱指纹图谱及核磁共振指纹图谱。
　　1.3.1 薄层色谱指纹图谱  薄层色谱法为传统的定性与半定量分析方法，单次分析的样品多，提供的信息量大，有较好的指纹信息鉴别价值。夏天无与延胡索属同科植物，含有诸多相同成分。对于同时存在这两味药材的中成药，专属性是选定鉴别方法所要考虑的首要问题。聂孝平等[10]采用薄层色谱法建立制剂的薄层色谱指纹图谱，通过与夏天无、延胡索药材薄层色谱指纹图谱对比，以是否存在特征峰为依据来鉴别夏天无和延胡索，该方法快速且结果直观。
　　1.3.2 高效液相色谱指纹图谱  该方法是目前指纹图谱技术中用途最广泛的一种方法。邵军等[11]通过超高效液相色谱法快速分离夏天无提取物的主要成分，建立了夏天无超高效液相色谱指纹图谱，同时通过质谱鉴定其主要化学成分，鉴定了夏天无超高效液相色谱指纹图谱中的12个主要色谱峰，为夏天无提取物的质量研究奠定了良好基础。张璐等[12]通过研究15批夏天无（余江产）的高效液相色谱特征图谱，通过相似度评价软件系统，匹配生成夏天无对照特征图谱，建立“余江夏天无”高效液相色谱对照特征图谱，并指认其特征峰，为“余江夏天无”质量控制提供科学依据，同时与其它产地夏天无进行比对，可以通过判断是否有无特征峰、相似度大小等量化指标评价不同产地夏天无药材的异同点，结果显示，“余江夏天无”质量优于其它产地夏天无，为“余江夏天无”的道地性和质量研究奠定良好基础。
　　1.3.3 核磁共振指纹图谱  核磁共振氢谱（1H-NMR）是鉴定有机化合物结构的重要的方法。武孔云等[13]选取夏天无总生物碱作为特征性成分，对其进行提取，建立夏天无特征性成分的1H-NMR指纹谱，观测并归纳出夏天无主要成分普鲁托品、比枯枯灵和四氢巴马汀的特征共振峰，为夏天无药材的指纹图谱鉴定提供了基础。
　　2 定量分析
　　生物碱是夏天无主要活性成分，因此目前其质量评价研究主要集中在对总生物碱类成分的质量分析上，其总生物碱中以原阿片碱及延胡索乙素含量较高[5，14-15]。目前，2015年版《中华人民共和国药典》仅对盐酸巴马汀和原阿片碱进行质量控制，其质控指标比较单一。随着夏天无药理活性及临床研究的深入，其生物碱的药理作用已比较明确[16-19]。针对发挥药效的主要生物碱成分对药材及制剂开展质量控制，才真正有利于药品发挥其药效，同时对毒性成分进行限量控制，则更有利于确保用药安全。
　　2.1 高效液相色谱-紫外检测
　　高效液相色谱法具有分析速度快、分离效能高、自动化程度高、重现性好、专属性强等优点，已成为中药质量控制的主要方法。夏天无主要生物碱的最佳吸收波长基本在280 nm附近，故目前夏天无定量分析研究以采用高效液相色谱-紫外检测法居多。
　　袁劲松等[20]建立了同时测定夏天无中原阿片碱、盐酸巴马汀、延胡索乙素、小檗碱、比枯枯灵碱、紫堇米定碱、四氢药根碱、黄连碱、血根碱、盐酸罂粟碱、紫堇碱11种生物碱含量的高效液相色谱-紫外检测方法，并对全国9个不同城市出产的夏天无进行了含量差异分析，发现所有地区夏天无中小檗堿、血根碱、盐酸罂粟碱和紫堇碱的含量均较低，而原阿片碱、延胡索乙素和盐酸巴马汀含量均较多;另外，不同产地的夏天无样品各种成分的含量差异也较大，其中河北安国和江西樟树的夏天无中生物碱含量最为丰富。窦丽丽等[21]采用一种新型流动相——微乳流动相建立了高效液相色谱-紫外检测法同时测定夏天无中药根碱、巴马汀、小檗碱、延胡索乙素、原阿片碱含量，该方法可在20 min内完成5种生物碱成分的测定，比采用有机溶剂为流动相的检测时间缩短了1倍，结果表明，采用微乳流动相可以分离成分复杂、性质相近的中药中多种成分，并且该方法流动相所用有机溶剂用量少，毒性低，相对费用和污染少，为中药的质量控制提供了新选择。
　　2.2 高效液相色谱-质谱联用技术
　　高效液相色谱-质谱联用技术是一种将液相色谱和质谱结合起来的技术，其兼具分离能力高和专属性强的特点，在药物分析、食品分析及环境污染物分析等众多领域得到了广泛应用[22-24]。
　　沈燕等[25]建立了液质联用的分析方法，对夏天无生物碱在电喷雾模式下的裂解途径进行了探讨，结果显示在正离子模式下，夏天无生物碱类化合物容易失去一氧化碳和甲醛，也有可能失去苯环，呈现出一定的裂解规律。该课题组[26]随后进一步开发了高分离快速液相色谱-四级杆-离子阱串联质谱法（RRLC-QTrap-MS），并用于测定夏天无中4种主要生物碱（原阿片碱、巴马汀、延胡索乙素、比枯枯灵），该方法较常规高效液相色谱-紫外检测法大大缩短了分析时间，且具有高灵敏度、高通量的优点。
　　2.3 多维色谱法
　　多维色谱又称为色谱/色谱联用技术，是采用匹配的接口将不同分离性能或特点的色谱连接起来，一般选用2个合适的色谱联用即可满足对绝大多数难分离混合物样品的分离或富集要求，因此，通常的色谱/色谱联用都是指二维色谱[27]，该方法目前也是有效解决中药复杂物质体系的强有力工具之一。魏小东[28]建立了一种基于pH调制的二维液相色谱法分析夏天无生物碱的方法，采用0.6%氨水缓冲液和乙腈为流动相及耐强碱反相色谱柱进行第一维色谱分离，采用乙腈和0.5%甲酸缓冲液为流动相和阳离子交换色谱柱进行第二维色谱分离，共获得的峰容量为6925，并通过紫外光谱和质谱进行结构鉴定，确定了比枯枯灵、普鲁托品、巴马汀等24个生物碱成分。 　　2.4 毛细管电泳法
　　毛细管电泳法具有多种分离模式，其应用十分广泛。此外，有关其在中药有效成分含量测定方面的研究也日渐增多，检测对象包括生物碱类、有机酸类、黄酮类、酚类、苷类、蒽醌类等。Mao等[29]采用微波提取-毛细管电泳法测定了夏天无中的生物碱成分，该方法在15 min内同时定量了7种生物碱类成分，并且应用于8个不同产地批次药材的含量分析。
　　3 夏天无生物碱的质量标志物研究
　　为完善中药及产品质量标准体系，促进中医药产业健康发展，健全以《中华人民共和国药典》为核心的国家药品标准体系，在现有质量评价与控制方法研究及其存在的问题的基础上，刘昌孝院士提出了中药质量标志物的新概念[30]。质量标志物以物质-功能为核心，以成分的特异性为主要依据，着眼于中药材、生产等全过程的物质基础的动态变化和质量的传递性及溯源性，有利于建立中药及其产品全程质量控制及质量溯源体系[31]。张笑敏等[5]在对夏天无化学成分及药理作用研究现状基础上，根据质量标志物的新概念，从植物次生代谢物角度分析其有效成分的物质基础，追溯不同类型生物碱特异性的生源途径，并研究其分析成分与药效用途、药动学及体内过程、传统功效和药性的相关性，揭示了中药有效性-物质基础-质量控制标志性成分的关联度。通过系统的文献论证和预测分析，初步筛选出延胡索乙素、原阿片碱、比枯枯灵、巴马汀、别隐品碱、四氢药根碱等成分作为夏天无的质量标志物，为夏天无及其相关制剂的进一步质量控制提供新的参考思路。
　　4 结语与展望
　　如何对中药进行科学、有效的质量评价，一直是制约中药现代化发展的关键问题之一，也是中医药研究的难点之一。本文对近年来夏天无质量评价相关的研究文献进行了归纳总结，在夏天无整体质量评价及与易混用品种的定性鉴别方面，高效液相色谱指纹图谱技术因其专属性强、灵敏度高、结果直观且设备较为普及而得到广泛应用。液质联用技术因同时具备色谱的高分离能力和质谱的高选择性等优点，在夏天无质量评价的基础研究中具有得天独厚的优势，但因质谱设备昂贵，尚未普及。在定量检测方面，高效液相色谱-紫外检测法分离效能高、分析速度快、自动化程度高，已成为业内主流分析手段，2015年版《中华人民共和国药典》采用该法对夏天无中盐酸巴马汀及原阿片碱成分进行含量测定，但是控制指标较为单一，未能全面涵盖夏天无的主要药理活性成分。中药本身的复杂性，检测个别指标性成分往往不足以评价药材整体质量，更加难以反映其复方制剂产品的有效性及安全性，质量标志物、可全面地反映和表征中药有效性和安全性，尤其是加强了质量标准与药材中功效相关成分的关联性，为建立科学合理的质量评价标准提供了参考。此外，夏天无中含有比枯枯灵、夏无宁碱等毒性成分，在开展夏天无及其相关产品的质量控制与评价时，还需充分考虑其毒性成分并制订相应限量标准，以进一步保障临床用药安全。
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　　（收稿日期：2018-08-29  本文編辑：王   蕾）
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