HCG日血清雌、孕激素水平对内膜整合素αVβ3和LIF表达及冻融胚胎移植结局的影响

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　　【摘要】 目的 探讨人绒毛膜促性腺激素（HCG）日血清雌、孕激素水平对内膜整合素αVβ3、白血病抑制因子（LIF）表达及冻融胚胎移植（FET）结局的影响。方法 122例实施128个周期体外受精（IVF）助孕的患者， 按HCG日血清雌二醇（E2）及孕酮（P）水平分为A组（E2<5210 pg/ml、P<1.05 ng/ml， 33个周期， 31例）、B组（E2≥5210 pg/ml、P<1.05 ng/ml， 36个周期， 33例）、C组（E2<5210 pg/ml、P≥1.05 ng/ml， 28个周期， 28例）、D组（E2≥5210 pg/ml、P≥1.05 ng/ml， 31个周期， 30例）。所有患者均进行超排卵方案及冻融胚胎移植。取卵后7 d左右吸取内膜组织， 比较四组HCG日血清E2、P、LH水平及冻融胚胎移植临床结局、种植窗期内膜整合素αVβ3和LIF表达情况。结果 B组HCG日血清E2为（7528.2±239.0）pg/ml， D组HCG日血清E2为（7895.9±282.4）pg/ml， 均高于A组的（1739.1±162.9）pg/ml， 差异有统计学意义（P<0.05）;C组HCG日血清P为（1.4±0.6）ng/ml， D组HCG日血清P为（1.2±0.4）ng/ml， 均高A组的（0.6±0.2）ng/ml， 差异有统计学意义（P<0.05）。结论 HCG日血清雌、孕激素水平不影响内膜整合素αVβ3和LIF表达及冻融胚胎移植周期的结局。
　　【关键词】 雌激素;孕激素;整合素αVβ3;白血病抑制因子
　　DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.12.035
　　人类辅助生殖技术（assisted reproductive technology， ART）发展迅速， 体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization and embryo transfer， IVF-ET）获得胚胎的数量及质量也不断提高， 但对于母体与胚胎间的联系了解不多。IVF助孕中， 激素生理平衡的改变会使内膜相关因子表达产生变化， 这种变化可能影响冻融胚胎移植（frozen-thawed embryo transfer， FET）周期结局。整合素是存在于细胞表面的一种跨膜糖蛋白， 在内膜中会发生周期性改变。研究发现[1， 2]， 整合素αVβ3表达于黄体期， 持续至妊娠期， 与种植窗一致， 是内膜容受性标志物之一。白血病抑制因子（leuakemia inhibitory factor， LIF）是一种多功能糖蛋白， 黄体中期表达最高， 即种植窗期表达最高， 增生期极低水平表达， 是内膜容受性标记物。本研究探讨HCG日血清雌、孕激素水平对种植窗期内膜整合素αVβ3和LIF表达及冻融胚胎移植结局的影响。
　　1 资料与方法
　　1. 1 一般资料 选取2017年1～12月在本中心实施128个周期IVF助孕的122例患者， 依据Wu等[3]的研究， ROC曲线分析HCG日血清E2、P水平对IVF结局的影响， 确定高P界值为1.05 ng/ml， 高E2界值为5210 ng/ml。根据HCG日血清E2、P水平分为A组（E2<5210 pg/ml、P<1.05 ng/ml， 33个周期， 31例）、B组（E2≥5210 pg/ml、P<1.05 ng/ml， 36个周期， 33例）、C组（E2<5210 pg/ml、P≥1.05 ng/ml， 28个周期， 28例）、D组（E2≥5210 pg/ml、P≥1.05 ng/ml， 31个周期， 30例）。纳入标准：①年龄<40岁;②卵巢储备功能正常;③获得>4个卵子;④男方精液常规检查正常。四组患者一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05）， 具有可比性。见表1。
　　1. 2 方法
　　1. 2. 1 超排卵方案 采用黄体期长方案， 长效促性腺激素释放激素激动剂（GnRH-a）降调节， 14～20 d后给予卵泡刺激素（FSH）超排卵治疗， 卵泡最大直径≥18 mm时注射HCG， 36～38 h后超声指导下取卵。受精后18～20 h观察受精情况， 胚胎培养3 d， 冷冻所有胚胎。
　　1. 2. 2 冻融胚胎移植 月经第2～4天， 阴超记录子宫、内膜、卵巢及卵泡情况， 若未见优势卵泡且内膜≤5 mm予戊酸雌二醇片（商品名：补佳乐）4 mg， b.i.d.， 12～14 d后抽血查促黄体生成素（LH）、E2及P， 如有卵泡发育或内膜<8 mm则取消周期， 如内膜厚度≥8 mm， 当日给予黄体酮60 mg肌内注射， 注射第4天行冻融胚胎移植。移植后第12～14天测定血清HCG。移植后第28～30天阴超检查见宫腔内有孕囊者为临床妊娠。
　　1. 3 观察指标 比较四组HCG日血清E2、P、LH水平及冻融胚胎移植临床结局、种植窗期内膜整合素αVβ3和LIF表达情况。HCG日当天抽取空腹肘静脉血3 ml， 分血清， -20℃保存待测， 检测E2、P及LH水平。在卵子获取后的7～8 d吸取子宫内膜组织。获取子宫内膜前用生理盐水冲洗陰道、宫颈外口， 用子宫内膜取样器Pipelle管于子宫体中上段吸取少许内膜组织， 检测LIF、整合素αVβ3。冻融胚胎移植临床结局包括可移植胚胎数、优质胚胎率、种植率、临床妊娠率、流产率。
　　1. 4 统计学方法 采用SPSS22.0统计学软件进行数据统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验;计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
　　2 结果
　　2. 1 四组患者HCG日血清E2、P及LH水平比较 B组HCG日血清E2为（7528.2±239.0）pg/ml， D组HCG日血清E2为（7895.9±282.4）pg/ml， 均高于A组的（1739.1±162.9）pg/ml， 差异有统计学意义（P<0.05）;C组HCG日血清P为（1.4±0.6）ng/ml， D组HCG日血清P为（1.2±0.4）ng/ml， 均高A组的（0.6±0.2）ng/ml， 差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。 　　2. 2 四组患者冻融胚胎移植临床结局比较 四组可移植胚胎数、优质胚胎率、种植率、临床妊娠率、流产率比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。见表3。
　　2. 3 四组种植窗期内膜整合素αVβ3和LIF表达的比较 四组内膜整合素αVβ3和LIF表达情况比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。见表4。
　　3 讨论
　　子宫内膜在组织学及分子学上周期性改变， 内膜的容受性也发生改变[4]。在种植窗期， 雌、孕激素调节了子宫内膜中因子的表达， 这些内膜因子可能作为胚胎着床的介质影响胚胎着床。大量的研究发现[5-7]， 子宫内膜种植窗期一些因子的表达都可以反映内膜容受性。
　　3. 1 整合素αVβ3和LIF 在内膜中的表达 子宫内膜上皮处于接受状态时， 内膜上皮上的粘附分子表达， 从而促使胚胎与之发生附着反应。整合素作为粘附因子的一员， 是细胞膜上以α、β异二聚体形式存在的糖蛋白分子， 是多种细胞外基质分子的受体， 其介导细胞间的信号传导， 在内膜的表达中存在多种亚型， 只有αVβ3开始表达于月经的黄体中期， 维持到妊娠期， 是内膜植入窗启动的标示[8]。
　　LIF可以调节胚胎滋养层细胞功能和血管形成， 多种动物的内膜上发现有LIF-mRNA和其蛋白的表达。在增殖期， LIF-mRNA和蛋白很难测到， 但在分泌期， 两者的水平明显升高， 而此时段是胚胎种植时间， 因此， LIF与内膜的容受性有关[9， 10]。Stewart等[11]通过研究发现， 老鼠的LIF基因被敲除后， 卵子受精后可以形成囊胚， 但不能着床， 而在该小鼠子宫腔内补充LIF后， 囊胚的种植率有明显提高， 这表明LIF可以作为内膜容受性的标志物。
　　3. 2 E2、P水平对整合素αVβ3和LIF表达及冻融胚胎移植结局的影响 超排卵中孕激素升高会使孕激素受体（PR）的表达下降， 同时会促进内膜的整合素αVβ3表达提早、增强。在一项对黄素化卵泡的研究中发现， 正常排卵组的P水平更高， 整合素αVβ3的表达增强， 表明植入窗推迟及内膜容受性下降， 胚胎植入率下降[12]。林娜等[13]比较高雌孕激素水平对种植期整合素αVβ3表达的影响， 结果显示高E2组、高P组、高E2并高P组整合素αVβ3与对照组比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。本研究中对照组为低E2并低P组， 结果显示四个组中， 内膜整合素αvβ3的表达也没有差异， 这可能与P水平设定的界值不同有关， 使得研究的结果不一致。
　　相关研究[5]显示， 种植窗期血清P水平在妊娠组高于非妊娠组， LIF的表达也在妊娠组较高， 且LIF的表达与血清P水平相关， 提示种植窗内膜LIF的表達受P调节， 而E2的水平则与LIF的表达没有相关性。也有研究[6]表明， 切除卵巢后， 添加外源性雌激素并不能诱导LIF蛋白的表达， 但是孕激素则可诱导LIF的表达增加。E2上升可使植入期时间缩短， 排卵后E2的变化也使LIF发生变化， 两者关系密切。但是， 在本研究中， 无论是P升高组， 还是E2升高组， LIF的表达都没有增加， 所以LIF的表达除了与P、E2的水平相关外， 还可能与E2/P的比例有关， 两者维持在适当比例， LIF的表达才可能增强。
　　本研究结果显示， 四组可移植胚胎数、优质胚胎率、种植率、临床妊娠率、流产率比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。四组膜整合素αVβ3和LIF表达情况比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。
　　综上所述， HCG日血清雌、孕激素水平不影响内膜整合素αVβ3和LIF的表达及冻融胚胎移植周期的结局。雌孕激素对子宫内膜容受性的影响是多方面的， 而子宫内膜容受性的标志物也不仅仅只有整合素αVβ3和LIF， 本研究只观察αVβ3和LIF有其局限性， 需要临床扩大样本量来进一步研究， 且需要用更多的具有代表性的内膜容受性标志物来衡量， 才能有更准确的结果。
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　　[收稿日期：2020-02-17]
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