高效液相色谱法测定咽炎茶中黄芩苷含量

来源:用户上传      作者: 蔡涛 孙兰珍 覃兴贵 袁媛 陈名

　　[摘要] 目的 建立咽炎茶中黄芩苷含量测定的高效液相色谱法。 方法 色谱柱为ODS柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为甲醇-水-磷酸（30∶70∶1），流速为1.0 mL/min，检测波长为280 nm，进样10 μL。 结果 黄芩苷在0.198 8~1.192 8 μg范围内线性关系良好，r = 0.999 7，平均回收率为97.4%，RSD = 1.1%。 结论 本方法稳定可行，结果准确可靠，可作为咽炎茶质量标准中黄芩苷的含量测定方法。
　　[关键词] 咽炎茶；黄芩；黄芩苷；高效液相色谱法
　　[中图分类号] R286.0 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2012）04（a）-0077-02
　　
　　Determination of Baicalin in Yanyan tea by HPLC
　　CAI Tao SUN Lanzhen QIN Xinggui YUAN Yuan CHEN Ming
　　Department of Pharmacy, the 82st Hospital of PLA, Jiangsu Province, Huaian 223001, China
　　[Abstract] Objective To estabilsh HPLC method for determination of baicalin in Yanyan tea. Methods The chromatography column was the ODS column (4.6 mm×250 mm, 5 μm), the mobile phase was methanol-water- Phosphoric Acid (30∶70∶1). The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was 280 nm, sample introduction was 10 μL. Results The calibration curve of baicalin was in good linearity over the range of 0.198 8 - 1.192 8 μg, r = 0.999 7, and the average recovery rate was 97.4% with an RSD of 1.1%. Conclusion The method is simple, reliable, accurate and can be applied to the quality control of the Yanyan tea.
　　[Key words] Yanyan tea; Baicalensis; Baicalin; HPLC
　　
　　咽炎茶由玄参、南沙参、黄芩、生地、麦冬等11味中药组成，具养阴、降火、清热、理气等作用。用于治疗慢性咽炎，本院至今已应用近30年，其疗效显著，未见不良反应。黄芩是咽炎茶组方中君药之一，为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的根，含黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷等多种活性成分[1]。由于咽炎茶是中药复方制剂，成分复杂，干扰性大，制定质量标准有较大难度，为建立咽炎茶中黄芩苷的含量测定方法，参考相关文献[2-8]，对咽炎茶中黄芩苷含量测定方法进行了实验，报道如下：
　　1 仪器、试剂与试药
　　1.1 仪器
　　SSI-500型高效液相色谱仪（美国）、微量分析天平（上海精科电光分析天平GT332A）、JL型超声波清洗器（上海杰理科技有限公司）。
　　1.2 试剂
　　甲醇（色谱纯）、磷酸（分析纯）、纯化水。
　　1.3 试药
　　黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所、批号：110715-200914、纯度：98.6%）、咽炎茶（本院制剂室提供，批号：2009 1006等）。
　　2 方法与结果
　　2.1 色谱条件
　　十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2）为流动相，柱温：25℃，检测波长为280 nm，进样10 μL，流速1 mL/min。
　　2.2 对照品溶液的制备
　　精密称取黄芩苷对照品10.08 mg（98.6%）至25 mL容量瓶中，加甲醇充分溶解、定容至刻度，摇匀即得（每毫升中含黄芩苷0.397 6 mg）。
　　2.3 供试品溶液的制备
　　取咽炎茶2 g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，加甲醇50 mL，精密称重，浸泡15 min，超声（250 W，33 kHz）处理30 min，放冷，再精密称定，用甲醇补充损失的重量，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）过滤，取续滤液，即得供试品溶液。
　　2.4 线性关系试验
　　精密量取黄芩苷对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 mL分别置10 mL容量瓶，用甲醇稀释至刻度，分别吸取10 μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行分析，测定黄芩苷峰面积。以峰面积（A）对质量浓度（C）进行线性回归，结果为A = 3 853C - 504.73，r = 0.999 7，线性范围：0.198 8~1.192 8 μg。
　　2.5 精密度试验
　　精密吸取黄芩苷对照品液10 μL，注入液相色谱仪，重复进样5次，测定峰面积，结果RSD为0.20%，表明本色谱条件下，仪器精密度良好。
　　2.6 重复性试验
　　取同批号（20091006）咽炎茶，按“2.3”项方法制成供试液5份；另取黄芩苷对照品液适量，加甲醇制成0.5 mg/mL的对照品液，用外标法按上述色谱条件进行测定，测得黄芩苷平均含量，其中相对标准偏差RSD = 1.09%，证明本试验重复性良好。
　　2.7 加样回收试验
　　精密称取黄芩苷对照品10 mg（98.6%）至10 mL容量瓶中，加甲醇溶解、定容，摇匀，作为对照品储备液；另外，精密称取已知黄芩苷含量（13.26 mg/g）的咽炎茶约0.25 g，共5份，置100 mL具塞锥形瓶中，加甲醇47 mL，精密吸取上述对照品储备液3 mL，加入锥形瓶中，照“2.3”制备供试液，以外标法按上述色谱条件进样测定，计算回收率，结果见表1。
　　2.8 样品测定
　　取五个批号咽炎茶，分别按“2.3”项方法制成供试液，并用外标法按上述色谱条件分别进样测定，计算黄芩苷含量，结果见表2。
　　3 讨论
　　参考《中国药典》2010年版一部，本品在提取过程中使用70%乙醇进行提取，发现不能完全提取，后改用甲醇，通过含量测定结果比较，其提取含量明显优于70%乙醇，故采用甲醇作提取溶剂。
　　选择超声波提取能提高提取速度，试验过程中发现，将样品用甲醇浸泡后，超声30 min可以将黄芩苷完全提取。
　　实验证明，本含量测定方法用于测定咽炎茶中黄芩苷的含量具有分离度好、图谱清晰、专属性强、无干扰、结果准确、所用试剂简单等优点，可作为咽炎茶中黄芩苷的含量测定。
　　[参考文献]
　　[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典[S]. 一部. 北京：中国医药科技出版社，2010：282.
　　[2] 于天杰，张玲昂. HPLC法测定退烧颗粒中黄芩苷的含量[J]. 中国药师，2010，13（1）：143-144.
　　[3] 夏建红，冯桂英. 高效液相法测定双黄口服液中芍药苷和黄芩苷含量[J].中国药业，2010，19（23）：32-33.
　　[4] 彭高伟，陈兴，许国兵. 高效液相色谱法测定小儿清热片中黄芩苷的含量[J]. 中南药学，2010，8（7）：559.
　　[5] 江丽，申国庆. 高效液相色谱法测定复方黄芩胶囊中黄芩苷的含量[J].中国医院药学杂志，2008，28（16）：1419-1420.
　　[6] 黄雪梅，王青，蒋伟哲. 反相高效液相色谱法测定复方黄芩片中黄芩苷的含量[J]. 广西医学，2001，23（2）：13.
　　[7] 陆麟，陈晓春，蒯钰敏. 高效液相色谱法测定一清胶囊中黄芩苷的含量[J]. 临床合理用药杂志，2011，4（15）：12.
　　[8] 张志根，宋剑锋，林娜. RP-HPLC法测定小儿肺热咳喘口服液中黄芩苷含量[J]. 临床合理用药杂志，2009，2（17）：14.
　　（收稿日期：2011-06-20）

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