粗壮女贞提取物毒性研究

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　　[摘要] 目的观察粗壮女贞提取物一日灌胃后产生的急性毒性反应和死亡情况，以及长期重复给药对大鼠可能产生的蓄积性毒性和延迟性毒性反应。方法：急性毒性试验一天内给小鼠灌胃给药2次，每次0.4ml/10g，给药后观察两周内动物的一般活动情况及存活情况。长期毒性试验设粗壮女贞提取物给大鼠连续灌胃给药3个月，观察对大鼠可能产生的蓄积性毒性和延迟性毒性反应。结果：急性毒性试验最大给药量为160g/Kg，相当于成人日用量的800倍，未见毒性反应及死亡发生。长期毒性试验三个剂量组动物的体重增长、摄食情况正常，对大鼠血液学指标、血液生化指标和主要脏器系数无明显影响，主要器官病理组织学检查均未见异常。结论：粗壮女贞提取物对小鼠最大耐受量为160g/Kg，对大鼠无明显蓄积性毒性和延迟性毒性反应。
　　关键词： 粗壮女贞提取物； 最大给药量；血液学指标； 血液生化指标； 脏器系数
　　中图分类号：R394.6 文献标识码：A 文章编号：1004-7484（2012）06-0258-03
　　
　　粗壮女贞被用于食品和保健食品，深受广大消费者的欢迎。本文报导其对小鼠急性毒性及大鼠长期毒性试验研究结果。
　　1 实验材料
　　1.1受试药物：粗壮女贞，采购自四川筠连县青山绿水茶叶专业合作社，其提取物，性状为棕黄色液体（每毫升相当于药材2.0g），由本试验组人员配制。
　　1.2实验动物：KM小鼠，体重19―22g，雌雄各半；清洁级Wistar大鼠80只，180-210ｇ，雌雄各半。由广西医科大学实验动物中心提供，生产许可证SCXK2009-0003,动物质量合格证0009925。
　　2 实验方法与结果（1）
　　2.1急性毒性试验
　　预试结果0.4ml/10g动物全部存活，测不到LD50，故进行最大给药量试验。取小鼠40只，给药组及对照组各20只，雌雄各半。给药组一天内给小鼠灌胃给药3次，每次0.4ml/10g，间隔4h，对照组同法给蒸馏水，给药后观察两周内动物的一般活动情况及存活情况。结果给药组小鼠给药后无兴奋、不安、窜动、跳跃、竖毛、流泪、流涎、凸眼、扭体反应现象。观察14天，全部动物存活。最大给药量为160g/Kg。
　　2.2长期毒性试验
　　2.2.1一般情况与体重：实验用Wistar大鼠80只，随机分为4组，每组20只，雌雄各半。室温27±2℃，湿度50-70%。灌胃给药（20ml/kg），每天1次，连续90天（3个月），停药观察2周。给药及停药期间，粗壮女贞提取物高、中、低剂量组和空白对照组动物活动、摄食量及排泄等均未见异常，毛色光泽，动物生长良好，体重普遍增加。与对照组比较差异无统计学意义。表明，粗壮女贞提取物对大鼠摄食和体重增长无影响。试验过程中由于操作失误，造成少量动物死亡。经尸解证明误灌入肺，与药物中毒无关。
　　2.2.2血液常规：给药3个月，对照组和粗壮女贞提取物组各取12只动物，停药2周各组取8只，雌雄各半，腹主动脉取血，进行血液学指标测定（2）。粗壮女贞提取物组大鼠各指标与对照组比较无显著性差异（表1）。表明粗壮女贞提取物对大鼠血液学指标无影响。
　　
　　
　　表1 粗壮女贞提取物对大鼠血液学指标的影响（给药3个月）
　　组别 性别 WBC(109/L) LY(%) MID(%) GR(%) RBC(1012/L) HGB(g/L) PLT(109/L) ReC(%) PT(s)
　　对照组 ♂ 3.2 ± 1.53 67.7 ± 3.60 8.40 ± 2.10 23.90 ± 1.67 5.02 ± 0.98 106.2 ± 18.8 345.5 ± 91 14.5 ± 4.20 13.92 ± 1.33
　　 ♀ 2.3 ± 1.48 70.4 ± 0.21 8.15 ± 1.06 21.40 ± 1.27 3.25 ± 2.46 57.5 ± 44.5 265.5 ± 185 18.0 ± 4.24 16.80 ± 1.56
　　高剂量组 ♂ 3.9 ± 2.19 71.5 ± 1.91 10.65 ± 0.78 17.80 ± 1.13 5.16 ± 0.59 98.5 ± 4.9 443.0 ± 78 20.6 ± 3.51 15.27 ± 0.60
　　 ♀ 2.8 ± 0.92 77.9 ± 2.33 9.45 ± 0.21 12.60 ± 2.55 4.92 ± 0.26 49.2 ± 63.2 373.5 ± 108 17.5 ± 3.54 14.10 ± 1.27
　　中剂量组 ♂ 3.2 ± 0.07 66.9 ± 1.41 12.35 ± 2.76 21.25 ± 3.46 4.69 ± 0.15 98.0 ± 5.6 362.5 ± 13 20.0 ± 2.83 14.75 ± 1.77
　　 ♀ 3.7 ± 1.56 69.7 ± 3.25 12.10 ± 2.13 18.12 ± 2.78 5.63 ± 0.43 66.4 ± 14.2 387.4 ± 56 16.2 ± 1.64 14.18 ± 1.22
　　低剂量组 ♂ 3.6 ± 2.67 73.4 ± 4.38 9.36 ± 3.19 17.22 ± 1.88* 5.51 ± 1.52 101.0 ± 24.7 354.4 ± 112 18.6 ± 3.44 15.24 ± 0.88
　　 ♀ 2.7 ± 1.68 74.6 ± 5.87 9.23 ± 2.67 16.18 ± 4.27 4.53 ± 1.55 80.5 ± 29.1 425.0 ± 196 15.0 ± 1.63 14.70 ± 1.03
　　
　　2.2.3血液生化：粗壮女贞提取物给药3个月及停药14天后各剂量组大鼠各指标，与对照组比较均无显著性差异（表2，表3）。表明粗壮女贞提取物对大鼠血液生化学指标无影响。
　　
　　表2粗壮女贞提取物对大鼠血液生化的影响（给药3个月）
　　组别 性别 ALT(U/L) AST(U/L) AKP(U/L) CK (U/L) TP(g/L) ALB(g/L) TBI(μmol/L)
　　对照组 ♂ 38.3 ± 18.53 174.05 ± 21.35 190.1 ± 34.99 4.40 ± 1.59 75.24 ± 5.38 28.26 ± 2.82 4.22 ± 2.15
　　 ♀ 50.1 ± 68.28 185.75 ± 37.66 113.1 ± 18.26 3.66 ± 1.89 82.56 ± 1.57 40.22 ± 3.03 4.79 ± 1.71
　　高剂量组 ♂ 47.4 ± 60.36 200.33 ± 38.05 195.8 ± 93.42 4.14 ± 3.04 79.66 ± 5.75 30.46 ± 3.16 8.13 ± 5.17
　　 ♀ 57.0 ± 33.86 158.91 ± 21.36 107.4 ± 22.73 3.24 ± 2.50 86.76 ± 7.84 41.86 ± 29.07 6.42 ± 3.67
　　中剂量组 ♂ 52.4 ± 32.56 140.40 ± 60.24 165.2 ± 32.69 5.53 ± 2.58 83.49 ± 15.62 26.32 ± 16.15 6.74 ± 2.20

　　 ♀ 63.3 ± 44.04 160.17 ± 72.79 128.2 ± 23.82 3.98 ± 2.76 89.52 ± 14.14 30.23 ± 17.00 3.26 ± 2.54
　　低剂量组 ♂ 72.9 ± 123.66 136.58 ± 104.85 160.5 ± 56.13 5.36 ± 2.90 78.44 ± 14.36 24.83 ± 8.32 2.87 ± 3.61
　　 ♀ 48.0 ± 10.26 151.17 ± 62.76 106.4 ± 29.44 4.31 ± 2.71 89.24 ± 28.66 29.83 ± 33.91 3.74 ± 2.88
　　表3粗壮女贞提取物对大鼠血液生化的影响（给药3个月）
　　组别 性别 CH0(mmol/L) TG（mmol/L） GLU（mmol/L） CRE(μmol/L) BUN(mmol/L) K+（mmol/L） Na+（mmol/L） Cl-（mmol/L）
　　对照组 ♂ 0.99 ± 0.14 0.53 ± 0.15 6.10 ± 1.32 49.66 ± 4.13 11.45 ± 3.09 6.21 ± 0.54 127.4 ± 14.24 133.8 ± 5.65
　　 ♀ 1.03 ± 0.17 0.97 ± 0.74 6.18 ± 0.51 45.81 ± 4.37 10.48 ± 0.39 5.31 ± 0.31 122.4 ± 11.10 132.3 ± 3.82
　　高剂量组 ♂ 0.90 ± 0.17 0.70 ± 0.26 8.00 ± 5.11 53.90 ± 11.64 10.61 ± 2.67 6.37 ± 0.71 123.6 ± 7.02 131.8 ± 5.77
　　 ♀ 1.15 ± 0.27 0.88 ± 0.30 4.74 ± 2.59 49.84 ± 4.59 10.08 ± 2.71 5.37 ± 0.35 123.6 ± 4.41 126.8 ± 8.03
　　中剂量组 ♂ 1.06 ± 0.27 0.56 ± 0.13 4.92 ± 1.78 53.94 ± 9.68 10.48 ± 0.78 5.59 ± 1.16 134.1 ± 2.80 135.5 ± 7.53
　　 ♀ 1.15 ± 0.26 1.47 ± 1.04 6.69 ± 4.00 54.61 ± 18.81 11.61 ± 2.91 4.66 ± 0.97 123.6 ± 20.94 136.1 ± 5.86
　　低剂量组 ♂ 0.95 ± 0.14 0.93 ± 0.82 5.97 ± 0.50 52.80 ± 5.39 11.81 ± 0.57 5.51 ± 1.66 132.9 ± 4.65 129.3 ± 15.37
　　 ♀ 1.14 ± 0.20 1.54 ± 1.00 5.00 ± 2.07 49.80 ± 10.02 12.42 ± 9.96 4.81 ± 1.65 127.3 ± 9.07 120.5 ± 18.71
　　
　　2.2.5病理学检查：给药3个月，对照组和粗壮女贞提取物组处死12只动物，停药2周各组处死8只，雌雄各半，取心、肝、脾、肺、肾、脑（大脑、小脑、脑干）、脊髓（颈、胸、腰段）、垂体、胸腺、食管、胃、小肠、大肠、肾上腺、附睾、睾丸、卵巢、子宫、膀胱、骨髓、肠系膜淋巴结等组织，先肉眼观察各脏器外观有无异常，再以10%的福尔马林将全部器官组织固定，进行病理组织学检查，检查结果部分动物出现间质性肝炎、间质性肾炎，给药组及对照组均有出现，这些病变属于动物的常见病及多发病，可排除因药物毒性引起。
　　3 讨论
　　急性毒性试验灌胃给药测不到LD50，最大给药量为160g/Kg，相当于成人日用剂量的800倍，未见毒性反应发生及死亡。长期毒性试验大鼠高剂量（20ml/kg/d=40 g药材/kg/d，相当人用量0.2g药材/kg/d的200倍），中剂量（10ml/kg/d=20g药材/kg/d，相当人用量的100倍）和低剂量（5 ml/kg/d=10g药材/kg/d，相当人用量的50倍）每天灌胃给药粗壮女贞提取物一次，连续给药3个月。结果各组动物活动、摄食量及排泄等均未见异常，毛色光泽，动物生长良好，体重普遍增加；血液常规检查、血液生化指标、主要脏器指数无显著改变；病理组织学检查虽然发现一些病变，但这些是动物的常见病及多发病，且给药组与对照组均有出现，可以排除药物毒性所至。提示粗壮女贞提取物灌胃给药对大鼠无明显蓄积性毒性和延迟性毒性作用。
　　参考文献
　　[1] 国家药品监督管理局． 中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则，指导原则编号：[Z]GPT3-1，2005，3．
　　[2] U.S. Department of Health and Human Services，Food and Drug Administration，Center for Drug Evaluation and Research (CDER)，Center for Biologics Evaluation and Research (CBER). Guidance for Industry and Reviewers：Estimating the Safe Starting Dose in Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers，December 2002，pp 7．

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