猪繁殖与呼吸综合征病毒不同毒株鉴别检测方法研究进展
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摘要：本文就当前我国猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）不同毒株鉴别检测方法的研究与应用进展进行综述，对提升我国猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）的综合防控能力具有一定的参考价值。
关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒;不同毒株;鉴别检测
猪繁殖与呼吸综合征病毒具有欧洲型和美洲型两个基因型，欧洲型毒株一般不引起严重的临床症状，但易导致混合感染，美洲型毒株可引起严重的临床症状以及感染猪的大批量死亡。自1995年开始美洲型PRRSV在我国开始流行，流行期间不断发生变异，2006年以JXA1毒株为代表的高致病性美洲型PRRSV在我国开始流行，高致病性PRRSV的致病性方面发生了很大变化，引起来了猪群的大批量死亡，虽然短时间内即开发出了相应的商品化疫苗，但一直未能完全控制高致病性PRRSV的流行，2013年以来，一种致病性介于经典株与高致病性毒株之间的美洲型PRRSV开始流行，由于该毒株与美国NADC30毒株的同源性很高，因此被称为NADC30-like毒株，2011年我国又发现了欧洲型PRRSV感染的病例。目前，我国PRRSV的流行毒株仍以美洲型为主，但经典株、高致病性株、NADC30-like毒株并存，同时欧洲型的感染时有发生，使PRRSV的鉴别诊断和防治难度加剧。本文综述了PRRSV不同毒株鉴别检测方法的研究与应用进展，为提升我国PRRSV的综合防控能力提供参考。
1 RT-PCR方法
RT-PCR方法靈敏、特异、快速、简便，是最常用的分子生物学诊断技术。李冰等建立了能够同时鉴别检测美洲型经典株、变异株和欧洲型毒株的多重PCR方法，该方法可对经典株、高致病性株、欧洲型毒株分别扩增出466bp、376bp、580bp的特异性片段。孟令宅等建立了检测PRRSV经典株、高致病性株、NADC30-like株3种毒株RT-PCR鉴别检测方法，该方法可对经典株、高致病性株、NADC30-like株分别扩增出1072bp、985bp、682bp的特异性片段，而扩增猪瘟病毒、伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型均为阴性，对经典株、高致病性株、NADC30-like株的最低核酸检出量分别为385皮克、269皮克、402皮克。RT-PCR方法快速、简单、准确、敏感，可用于不同PRRSV毒株的临床快速鉴别检测和流行病学调查。
2 荧光定量RT-PCR方法
荧光定量RT-PCR方法将光谱技术引入到常规RT-PCR方法中，在RT-PCR反应过程中实现了对拷贝数的准确定量。李晓菲等建立了一种可同时鉴别检测PRRSV经典株、高致病性株、NADC30-like株的TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR方法，该方法最低可以检测到10-1拷贝/μL的核酸，敏感性是常规RT-PCR方法的100倍，重复性试验的变异系数小于2.34%。荧光定量RT-PCR方法的敏感性更高、特异性更强、重复性更好，为我国PRRSV的实验室鉴别诊断、流行病学调查提供了准确、
敏感、快速的检测手段。
3 基因芯片方法
基因芯片是将特异性核酸杂交技术引入到PCR方法中，通过杂交信号的强弱即可判定目的基因的有无。郭焕成等根据PRRSV经典毒株与高致病性毒株的核苷酸序列分别设计引物和探针，建立了鉴别检测PRRSV经典株与变异株的基因芯片方法。该方法通过杂交模式可区分PRRSV经典株与高致病性株，与常规PCR法的灵敏度相近，对12份临床病料的检测结果与常规PCR方法的检测结果完全一致。基因芯片方法高通量、自动化，可通过集成PRRSV不同毒株的基因探针来实现快速鉴别诊断，可用于PRRSV的临床鉴别诊断和流行病学调查。
4 环介导间接PCR方法
环介导间接PCR是在一段报告基因的首尾两端分别连接两段特异性探针，再采用反向PCR扩增含探针的报告基因而实现对病原体的间接检测。郑鸣等选择大豆Lectin基因作为报告基因，将设计合成的2对PRRSV特异性探针分别标记于Lectin基因的两端，建立了鉴别检测PRRSV经典株和高致病性株的环介导间接PCR方法，该方法可对PRRSV经典株和高致病性株的最低检测灵敏度分别为5.6TCID50/毫升和18TCID50/毫升，该方法检测20份临床样本，检测出PRRSV经典株阳性样品4份，PRRSV高致病性阳性样品9份，混合感染样品1份，与常规PCR的检测结果完全一致。
5 结语
PRRSV一直以来都是困扰我国养猪业健康发展的重要免疫抑制病之一，加强PRRSV不同毒株的快速鉴别诊断对预防和控制PRRS具有重要的现实指导意义。其中RT-PCR方法只需要简单的仪器设备和试剂，适合一般实验室使用。荧光定量RT-PCR方法对仪器设备、试剂以及人员技术水平要求均较高，具有试验条件的实验室可选择使用。基因芯片方法和环介导间接PCR方法尚处于摸索阶段，一般实验室因不具备试验条件而无法开展。相信随着分子生物学技术的快速发展及在动物疫病诊断中的广泛应用，PRRSV不同毒株的鉴别检测方法将会得到进一步成熟与完善，不断为我国PRRSV的综合防控提供技术保障。
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