医疗机构制剂术元健脾止痛丸中橙皮苷含量测定方法的研究
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[摘要] 目的 制定医疗机构制剂术元健脾止痛丸质量标准草案中含量测定的方法与指标。方法 分析处方，选取陈皮中的橙皮苷为指标成分，采用HPLC法，进行方法学考察，对制剂中橙皮苷含量测定方法进行研究。结果 建立了制剂的含量测定方法并制定了质控指标。结论 通过三批中试样品的测定，验证了所建立的含量测定方法的稳定性和可靠性，质控指标的合理性。
[关键词] 医疗机构制剂;水丸;橙皮苷;含量测定;HPLC
[中图分类号] R286.0 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2019）03（b）-0102-03
该文所研究的“术元健脾止痛丸”属于医疗机构制剂新品种的研发，该文就该制剂质量标准草案中“含量测定”项目的测定方法及指标进行研究。
该制剂处方由麸炒白术、醋延胡索、 醋香附、麸炒苍术、党参、黄芪、陈皮、木香、砂仁、炒枳实、焦山楂、焦神曲、焦麦芽、炒鸡内金、海螵蛸、煅牡蛎、黄连、炙甘草等18味中药组成，参照《中国药典》[1]各药材饮片下含量测定方法，该文选择陈皮中的橙皮苷的含量作为该制剂的含量测定指标，采用HPLC法，通过方法学考察，建立了该制剂中橙皮苷的HPLC含测方法。具体实验如下。
1 实验材料
1.1 供试药品
术元健脾止痛丸：中试生产样品三批，批号为：20160201、 20160202、20160203。
1.2 仪器与试药
仪器：岛津LC-2010A高效液相色谱仪;Sartorius CP225D电子天平对照品及来源：橙皮苷，中国药品生物制品检定所，批号为0721-9909。
试剂：乙腈为色谱纯，甲醇、乙醇为分析纯，水为娃哈哈纯净水。
2 实验方法
2.1 色谱条件与系统适用性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.01%磷酸水（20：80）为流动相;检测波长为283 nm。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2 000。
2.2 耐用性试验
使用三种色谱柱：Inertsil ODS-3 5 μm;250×4.6 mm;依利特Hypersil BDS C18;5 μm;4.6×250 mm;Kromasil 100A C18;5 μm;250×4.6 mm，按上述色谱条件进行测试是可行的。
2.3 供试品溶液制备方法的考察
2.3.1 提取溶剂的考察 对照品溶液的制备：精密称取橙皮苷对照品（批号：0721-9909）5.2 mg，置50 mL量瓶中，用甲醇溶解后得到浓度为0.104 0 mg/mL的对照品溶液。
供试品溶液的制备：取该品10 g，精密称定，精密加人甲醇、80%甲醇、50%甲醇各50 mL，加热回流1 h，放冷后再称重量，分别用甲醇、80%甲醇、50%甲醇补至原重，取续滤液后即得。3种浓度的甲醇提取效果相当。没有明显差别，可确定甲醇为提取溶剂。
2.3.2 提取方法的考察 供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取约10 g，精密称定，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，分别超声处理（功率500 W，频率40 kHz）20、30、40 min，加热回流分时段提取出，放冷后称重，用甲醇补至原重量，取续滤液即得。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，计算含量。见表1。
由测定结果可知，加热回流1.0、1.5、2.0 h提取结果相当，故确定提取方法为加热回流提取1 h。
2.3.3 取样量的考察 供试品溶液的制备：分别取研细的本品约5 g、10 g、15 g，加入甲醇50 mL，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液即得。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，测定，计算含量。三种取样量测定结果差异不大，其中10 g的峰面积与对照品溶液峰面积大小接近，为了最大限度的减小系统误差，确定取样量为10 g。
2.3.4 供试品溶液的制备[2] 取本品适量，研细，取约10 g，精密称定，精密加人甲醇50 mL，密塞，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醉补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 线性关系的考察
分别精密吸取浓度为0.104 0 mg/mL的橙皮苷对照品溶液各2、4 、6、8、10、12 μL，注入液相色谱仪，分别测定峰面积积分值。以橙皮苷对照品的进样浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程。测定结果见表2。
回歸方程y=1 484 364.05x+73.47，相关系数r=0.999 9。
试验结果表明，橙皮苷进样浓度在0.041 6～0.145 6 mg/mL之间进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.5 仪器精密度试验
精密吸取橙皮苷对照品溶液（0.104 0 mg/mL）10 μL，连续进样6次，测其峰面积积分值。见表3。
试验结果显示仪器精密度良好。
2.6 样品稳定性试验
取本品适量，每隔5 h进样1次测定橙皮苷的峰面积积分值，共考察25 h，以观察供试品溶液在检测过程中待测成分的稳定性。见表4。
试验结果表明供试品溶液在25 h内稳定性良好，能够满足测定需要。
2.7 样品测定 按确定的方法和条件，对所收集到的3批样品进行测定，见表5。
根据上述3批样品的含量测定结果，并结合《中国药典》中“陈皮”中橙皮苷的含量限度为2.5 mg/g，本品每g水丸中含陈皮0.086 g，按检出率70%计算暂定本品每g含陈皮以橙皮苷计，应不得少于0.16 mg，实际测定值也均大于此值，故标准定为不得少于0.16 mg。
3 讨论
医疗机构制剂质量标准是反映医疗机构制剂质量特性的技术参数、指标，执行标准是控制医院制剂质量的有效手段，因此，质量标准的高低，决定着医疗机构对自制制剂质量控制的效力[3]，故本制剂质量标准的起草过程中，采用含量测定代替浸出物含量来控制药品的质量，为全省医疗机构制剂的质量标准提高工作提供了一定的参考。
中药制剂的质量受中药原材料的影响较大，同样都是合格的药材，不同批次的药材中有效成分的含量差别可能较大，甚至同一批次不同部位的药材差别也较大[4-5]。因此本文含量指标的确定时，在确保制剂质量的前提下，将指标定的相对较低，即根据药典中规定的指标成分的最低含量的基础上，再按照药材原粉入药提取率不得低于70%，换算后得出的。
因基层医疗机构制剂室条件有限，制剂生产规模较小，为降低制剂成本，该文在选择含量测定指标成分时，在能够反映制剂质量的前提下，选择操作比较简单，实验成本较低的橙皮苷作为指标成分。
[参考文献]
[1] 国家食品药品监督管理局.《中国药典》[S].北京：化学工业出版社，2015：179-181.
[2] 严晓丽，闫倩倩，刘晓政，等.高效液相色谱法测定衢枳壳中新橙皮苷及柚皮苷[J].食品研究与开发，2018，39（21）：161-167.
[3] 陈家润，江映珠，吴雪龙.广东省医疗机构制剂质量标准修订存在问题及对策[J].中国药事，2016，30（3）：209-214.
[4] 王美紅，张晓芹，王慧玉.中草药医院制剂的研究进展与发展趋势[J].中医药管理杂志，2018，26（20）：11-13.
[5] 严倩茹，邬伟魁.中药制剂含量均匀度研究[J].药学研究，2018，27（9）：28-30.
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